Исследование метаболизма инсулина в эритроцитах крыс в норме и при экспериментальном диабете

Исследование метаболизма инсулина в эритроцитах крыс в норме и при экспериментальном диабете

Автор: Николаев, Сергей Леонидович

Шифр специальности: 03.00.04

Научная степень: Кандидатская

Год защиты: 2000

Место защиты: Санкт-Петербург

Количество страниц: 181 с. ил

Артикул: 315361

Автор: Николаев, Сергей Леонидович

Стоимость: 250 руб.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
1 ЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
I 1 Роль инсулина в обмене веществ. Молекулярные механизмы
действия инсулина на клетки.
1.2.1. Структура рецепторов инсулина.
1.2.2. Аутофосфорилирование рецепторов инсулина.
1.3. Роль специфического связывания инсулина плазматическими
мембранами клеток в его расщеплении.
1 А. Методы исследования инсулин деградирующей системы клеток.
1.5.1. Ферменты, расщепляющие инсулин
1.5.2. Инсул и наза и ее свойства
1.5.3. Роль инсулиназы в клетке.
1 5.4. Мембранная инсулиназа.
1.6.1. Ингибиторы инсулиназы.
1.7. Продукты деградации инсулина инсулиназой.
1.8.1. Деградация инсулина в эритроцитах.
1.8.2. Связывание инсулина рецепторами эритроцитов крыс в норме и мри патологии.
1.8.3 Связывание инсулина рецепторами эритроцитов человека в норме и при
инсулин зависимом диабете.
1 8.4. Инсулин деградирующая активность эритроцитов при диабете.
1.9. Патогенез развития сахарного диабета.
1. Методы лабораторной диагностики сахарного диабета.
III Вклад в изучение метаболизма инсулина кафедры
Ленинградскою химикофармацевтического института.
ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1. Объекты исследования
2.2 Определение количества эритроцитов в эритроцитарной массе.
2.3 Создание экспериментального диабета.
2.4. Выделение и очистка инсулиназы из лизата эритроцитов.
2.4.1.олученпе лизата эритроцитов.
2.4.2. Ионообменная хроматография на сефадексе.
2.4.3. Аффинная хроматография.
2.5 Выделение инсулиназы из цитозоля гепатоцитов.
2 6. Получение препарата инсулина, меченного .
2.7. Методы определения активности инсулиназы.
2 8 Изучение влияния ионов металлов на активность инсулиназы
2.9. Определение оптимума действия инсулиназы .
2 . Получение термокислото устойчивого ингибитора из лизата
эритроцитов
2. Выделение ингибитора инсулиназы из гепатоцитов.
2. Изучение обмена инсулиназы из цитозоля гепатоцитов.
2. Определение концентрации белка
. Определение наличия гликозиднон части в составе ингибитора инсулиназы.
. Определение наличия липидной части в составе ингибитора инсулиназы.
2. Определение связывания инсулина рецепторами мембраны эритроцитов.
2 1 Определение процента специфического связывания инсулина
рецепторами мембраны эритроцитов
. Определение количества мест связывания инсулина на эритроцит.
2 Электрофоретические методы анализа фермента.
. Электрофорез в пластинах полиакриламидного геля.
. Диск электрофорез в градиентном ПЛАГ.
. Электрофорез с добавлением ДС натрия. 2.4 Окраска полиакриламидных гатей для выявления белковых полос
2 Статистическая обработка результатов.
ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Определение процента специфического связывания инсулина
рецепторами мембраны эритроцитов
3.2. Изучение сродства инсулиновых рецепторов мембраны эритроцита крысы
в норме и при экспериментальном диабете.
3.3. Определение количества инсулиновых рецепторов на мембране
эритроцита крысы в норме и при экспериментальном диабете.
3.4.1. Выделение и очистка инсулиназы из эритроцитов.
3.5. Характеристика инсулиназы из лизата эритроцитов.
3.5.1. Определение оптимума для инсулиназы лизата эритроци тов.
3.5.2. Изучение влияния ингибиторов и активаторов на активность инсулиназы из лизата эритроцитов.
3.5.3. Определение кинетических параметров инсулиназы из лизата эритроцитов.
3.5.4. Изучение инсулин деградирующей активности эритроцитов в норме и при экспериментальном диабете.
3.6. Изучение активности эндогенного ингибитора инсулнназы из лизата
эритроцита
3.6.1. Изучение ингибитора инсулнназы из плазмы крови.
3.7. Изучение мембранной инсулнназы эритроцитов.
3.8. Изучение деградации инсулина в гепатоцитах.
3.9 Характеристика инсулнназы из цитозоля гепатоцитов
3.9 1. Изучение субстратной специфичности инсулнназы из гепатоцитов.
3.9.2. Изучение кинетических ирамеров инсулнназы штгоэатя еиттоциш.
3.0. Характеристика термокислото устойчивого ингибитора из цитозоля
гепатоцитов
. Активность высокомолекулярного ингибитора при экспериментальном диабете.
3. Обмен инсулнназы из иигозоля гепаюиитов
3 Исследование инсулин рецепторного и инсулин деградирующего
комплекса эритроцитов человека.
. Определение процента специфического связывания инсулина рецепторами мембраны эритроцитов человека.
. Изучение сродства инсулиновых рецепторов мембраны эритроцита человека в норме и при инсулин зависимом диабете.
. Определение количества инсулиновых рецепторов на мембране эритроцита человека в норме и при инсулин зависимом диабете .
. Выделение и очистка инсулнназы из эритроцитов человека.
3 Характеристика инсулнназы из лизата эритроцитов человека
. Определение оптимума для инсулнназы лизата эритроцитов человека.
. Изучение влияния ингибиторов и активаторов на активность инсулнназы из лизата эритроцитов человека.
. Определение кинетических параметров инсулиназы из лизата эритроцитов человека
. Изучение инсулин деградирующей активности эритроцитов человека в норме и при инсулин зависимом диабете.
3. 1 Изучение активности эндогенного ингибитора инсулиназы из лизата эритроцита человека.
. Изучение ингибитора инсулиназы из плазмы крови человека.
IV. ОБСУЖДЕНИИ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
С ШСОК ЛИТЕРАТУРЫ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АКТГ адренокортикотропный гормон АМФ аденозинмоиофосфат цАМФ циклический 3.5аденозинмонофосфат АТФ аденозинтрифосфат
ВЖХ высокоэффективная жидкостная хроматография
цГМФ циклический 3,5гуанозинмонофосфат
ДТТ дитиотреитол
ИБС ишемическая болезнь сердца
ИЗСД инсулин зависимый сахарный диабет
ЛД лактат дегидрогеназа
НАД ни котинамидадени иди нуклеотид, окисленная форма
АДН никотнамидадениндинуклеотид, восстановленная форма АДФ никотинамиладенишинуклеотидфосфат, окисленная форма НАДФН никотинамидадениндинуклеотидфосфат, восстановленная форма
НСТ ниросиний тстразолий 2,2дидинирофенил5,5дифенил3,3 3,3диметокси4 4дифсниленхлорид дитетразолия
ПААГ полиакриламидный гель
ПТГ проба на толерантность к глюкозе
РНК рибонуклеиновая кислота
мРНК матричная рибонуклеиновая кислота
СТГ соматотропний гормон
ТЭМЭД . тетра мст илэтиленди ам и н
ТХУ трихлор уксусная кислота
ФАД флавинадениндинуклеотид
ФМФ флавннмононукпеотилфосфат
ЭДТА этилендиаминтетрауксусная кислота
ПЕАЕ диэтиламиноэтил
ВВЕДЕНИЕ.
Актуальность


Диссертация включает в себя введение, обзор литературы, описание материалов и методов исследования , экспериментальные данные и их обсуждения, выводов, списка литературы, содержащего наименований работ отечественных и зарубежных авторов. ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. Роль инсулина в обмене веществ. Молекулярные механизмы действия инсулина на клетки. Инсулин белок, состоящий из аминокислотных остатков ти аминокислот, имеющий молекулярный вес Да. Молекула инсулина стоит из двух цепей короткой Ацепи, состоящей из аминокислотного остатка и длинной Виеии, включающей аминокислотных остатков. Полипешидные цепи А и В соединены посредством двух дисульфидных связей Еще одна дисульфидная связь соединяет Цис6 и Цис в цепи А. Специфический тффект инсулина связан с наличием в нем аминокислотных остатков цистеина, активность которого, в свою очередь, зависит от наличия сульфгидрильных групп. В норме дневная потребность в инсулине для человека составляет и. У здоровых людей содержание иммунорсактивного инсулина в крови составляет . Мл. Глюкоза, как субстрат инсулина, является главным биологическим стимулятором секреции инсулина. В условиях повышения концентрации содержания глюкозы в крови синтез инсулина в поджелудочной железе усиливается, а при уменьшении концентрации глюкозы, соответственно, уменьшается. На синтез инсулина влияют АКТГ, СТГ, тироксин, глюкагон, секретин, аргинин и лейцин. Соматостатин является одним из наиболее важных регуляторов секреции инсулина. Соматостатин ингибирует секрецию инсулина и, в большей степени, глюкагона 0. Инсулин служит одним из основных регуляторов обмена веществ в клетках различных органов и тканей человека и животных. Инсулин влияет практически на все стороны обмена веществ обмен углеводов, липидов, белков и аминокислот, нуклеиновых кислот и нуклеотидов Под влиянием инсулина в организме усиливается биосинтез РНК и белков. Инсулин снижает уровень глюкозы в крови за счет усиления поступления глюкозы в клетки, интенсификации обмена глюкозы в различных метаболических циклах, включения ее в гликоген и жирные кислоты. В жировой ткани этот гормон усиливает липогенез и угнетает липолиз, причем активируется синтез как триглицеридов, так и фосфолипидов. В основе влияния инсулина на многие стороны обмена веществ лежит его действие на активность фермеров, осуществляемое путем индукции их биосинтеза или пост трансляционной модификации Молекулярные основы механизма действия инсулина на обмен веществ, очевидно довольно сложные и еше недостаточно расшифрованы, хотя в последние годы в этом направлении и достигнуты значительные успехи. Важным этапом в изучении молекулярных механизмов действия инсулина на клетки стало открытие и летальное исследование структуры и функции специфических для этого гормона рецепторов локализованных на плазматических мембранах клеток. С взаимодействия инсулина и мембранных рецепторов и начинается реализация его биологических эффектов на клетки. Об опосредованности гормональных эффектов инсулина рецепторами плазматических мембран свидетельствуют данные о наличии четкой корреляции между количеством связавшегося с рецептором инсулина и его биологической активностью на уровне клетки . Реализация биологических эффектов инсулина на клетки начинается с его взаимодействия с мембранными рецепторами. Рецептор инсулина представляет собой высокомолекулярный гликопротеидный комплекс молекулярной массой 0 тыс. Состоит рецептор инсулина из четырех субъединиц двух схсубъединиц с молекулярной массой и двух Рсубъединии с молекулярной массой тыс. Субъединицы рецептора содержат участки специфического связывания инсулина и находятся на наружной поверхности плазматической мембраны клетки. Трансмембранный участок рсубъединицы рецептора инсулина обладает, повидимому, специфической к ссрину киназной активностью, а локализованная на внутренней поверхности плазмалеммы часть представляет собой тирозиновую протеннкиназу, обеспечивающую аугофосфорилирование этой субъединицы рецептора при образовании инсулин рецепторного комплекса 1. В настоящее время изучена локализация и структура гена, кодирующего ентез рецептора инсулина . В клетках человека этот ген локализован в й хромосоме.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.209, запросов: 145