Инсулин-транспортирующие системы крови человека в норме и при сахарном диабете первого типа. Теоретические и прикладные аспекты

Инсулин-транспортирующие системы крови человека в норме и при сахарном диабете первого типа. Теоретические и прикладные аспекты

Автор: Гарипова, Маргарита Ивановна

Шифр специальности: 03.00.04

Научная степень: Докторская

Год защиты: 2009

Место защиты: Уфа

Количество страниц: 354 с. ил.

Артикул: 4391805

Автор: Гарипова, Маргарита Ивановна

Стоимость: 250 руб.

ВВЕДЕНИЕ
ЧАСТЬ 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Г лава 1. Транспорт гормонов первой группы в плазме
крови человека
1.1. Липокалины
1.2. Транспортные белки крови, не относящиеся к липокали нам
Глава 2. Гормондепонирующая функция эритроцитов и транс
порт гормонов второй группы.
Г лава 3. Особенности транспорта инсулина в крови человека.
Глава 4. Применение аффинной хроматографии в медицине
и биотехнологии
4.1 .Виды аффинной хроматографии
4.2. Носители для аффинной хромакнрафии и методы их активации
4.3. Использование поливинилового спирта в медицине и биотехнологии
4.4. Аналитические системы на основе аффинных сорбентов
ЧАСТЬ 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Глава 5. Объекты исследований, реактивы и материалы
5.1. Принципы формирования групп добровольцев при изуче
нии системы транспорта инсулина в норме и при сахарном диабете первого типа
5.2.0сновные реактивы для синтеза аффинных сорбентов
5.3. Реагенты белковой природы и иммунологические препа
Глава 6. Методы исследований
6.1. Химические методы
6.1.1. Синтез аффинных сорбентов
6.1.2. Качественное определение альдегидных групп активи рованного глутаровым альдегидом ПВСносителя
6.1.3. Определение оксирановых групп ПВСносителя
6.1.4 Получение диазопроизводного овальбумина
6.2. Хроматографические методы
6.2.1. Иммуноаффинное извлечение антигенных примесей из препаратов человеческого лейкоцитарного интерферона
6.2.2. Выделение иммуноглобулинов иммунных комплексов из фракций связывающих инсулин белков
6.2.3. Выделение антител к овальбумину на иммобилизован ном антигене
6.2.4. Аффинное определение гликозилированного гемогло бина
6.2.4.1. Приготовление гемолизатов
6.2.4.2. Хроматографическое выделение гликозилированного гемоглобина на сорбенте, содержащем дигидроксиборильные группы
6.2.5. Определение фракции НЬАС гемоглобина методом высокоэффективной ионообменной хроматографии
6.2.6. Иммобилизация инсулина на активированной бромциа ном матрице
6.2.7. Проведение хроматографического выделения связы вающих инсулин белков сыворотки человека
6.2.8. Проведение гельхроматографии
6.3. Иммуноферментный анализ
6.4. Иммунолюминесцентное определение гормонов
6.5. Количественная оценка инсулинсвязывающей активности сыворотки крови
6.5.1. Формалинизация эритроцитов
6.5.2. Приготовление эритроцитарных диагностикумов
6.5.3. Определение концентрации связывающих инсулин бел ков крови в реакции пассивной гемагглютинации
6.5.4.Титрование антител к овальбумину в реакции пассивной гемагглюти нации
6.5.5. Определение овальбумина в реакции торможения пас сивной гемагглютинации
6.6. Анализ спектров поглощения проб в ультрафиолетовой области спектра
6.7. Проведение электрофореза
6.7.1. Метод проведения электрофореза белков на ацетатцел люлозных пленках
6.8. Изоэлектрическое фокусирование с иммунопроявлением
6.8.1. Подготовка стеклянной подложки
6.8.2. Формирование геля
6.8.3. Проведение изоэлектрического фокусирования
6.8.4. Фиксация и окраска белков
6.9. Качественное выявление углеводного, белкового и липидного компонентов в связывающей инсулин фракции сы воротки крови
6.9.1 .Метод определения холестерина в пробе
6.9.2. Метод определения триглицеридов
6.9.3. Определение концентрации глюкозы ферментативным методом
6 Оценка иммуномодулирующих свойств компонентов сыворотки, связывающих инсулин
.Изучение влияния связывающих инсулин белков крови здоровых доноров и больных сахарным диабетом на титры мышиных антител к дифтерийному анатоксину
. Оценка модулирующего действия хондроитинсульфата на действие инсулина на перитонеальные мышиные макрофаги т уйго
6. .Определение коэффициента распределения инсулина между поверхностью эритроцитов и плазмой крови 6Определение а кислого гликопротеина и трансферина методом нефелометрии
6. . Разработка методов синтеза аффинных сорбентов на основе гелей поливинилового спирта
. Стабилизация гелей ПВС
.1. Стабилизация гелей ПВС глутаровым альдегидом
.2. Стабилизация гелей ПВС эпихлоргидрином
. Синтез аффинных сорбентов на основе Поливиналя и их использование в условиях лаборатории
.1. Оптимизация условий иммобилизации белковых лигандов на Поливинале
.2. Оптимизация условий проведения аффинной хроматографии
. Испытания сорбентов на основе Ноливиналя в услови 7 ях биотехнологического производства
6 Использование сорбента па основе Поливиналя с дигид 5 роксиборильными группами для количественного определения гликозилированного гемоглобина в капиллярной крови человека
. Синтез и лабораторные испытания сорбента для коли 6 чественного определения гликогемоглобина
Оценка достоверности и воспроизводимости количест
венного определения гликозилированного гемоглобина на полученном сорбенте
. Исследование природы фракции гемоглобина, взаи 4 модействующсй с сорбентом ПоливинальмАФБК
. Клинические испытания аффинного сорбента для он 5 ределения гликогемоглобина в крови человека
6 Статистическая обработка экспериментальных данных
ЧАСТЬ 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Глава 7. Соотношение вкладов эритроцитарной и сывороточ
ной систем в транспорт инсулина и ряда гормонов первой и
второй групп.
7.1. Распределения инсулина между поверхностью эритроци 4 тов и плазмой крови.
7.2. Изучение распределения между поверхностью эритроци 7 тов и плазмой крови гормонов первой и второй 1рупп.
Глава 8. Выявление, аффинное выделение и анализ гетеро
генности связывающих инсулин компонентов плазмы крови
8.1. Сравнение инсулинсвязывающей активности плазмы кро
ви здоровых доноров и больных сахарным диабетом первого
8.2. Хроматографическое выделение связывающих инсулин 8 компонентов плазмы крови человека.
8.2.1. Изучение роли ионов цинка в формировании комплекса 9 инсулина и транспортных белков.
8.3. Спектрофотометрическое изучение связывающих инсу 2 лин фракций сывороток здоровых доноров и больных сахарным диабетом
8.4. Электрофоретические спектры связывающих инсулин 9 компонентов сыворотки крови здоровых доноров и больных сахарным диабетом
Глава 9. Структурный анализ связывающих инсулин белков 8 плазмы крови
9.1. Углеводный, белковый и липидный компоненты связы 8 вающей инсулин фракции сыворотки крови
9.1.1. Особенности структуры белковой области связываю 9 щих инсулин компонентов плазмы крови здоровых доноров и больных сахарным диабетом
9.1.2. Углеводный компонент инсулинсвязывающих белков 0 крови в норме и при сахарном диабете
9.1.3. Липидный компонент связывающего инсулин комплек 2 са белков крови
9.2. Изучение модулирующего действия инсулинсвязываю 3 щих белков крови
9.2.1.Влияние связывающих инсулин белков крови здоровых 3 доноров и больных сахарным диабетом на титры мышиных антител к дифтерийному анатоксину
9.2.2. Влияние хондроэтинсульфата на эффект добавления ин
сулина в культуру мышиных перитонеальных макрофагов
Глава . Гормоны, входящие в состав связывающего инсу
лин комплекса
.1. Содержание в составе связывающего инсулин комплекса 0 гормонов первой группы
.2. Гормоны второй группы, входящие в состав связываю 1 щего инсулин комплекса
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ОСНОВНЫЕ ВЫВОДЫ СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЕ
ПРИЛОЖЕНИЕ
ПРИЛОЖЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АГП а, кислый гликопротеин
АЛЛ аполипротеин
АО акридиновый оранжевый
АФП афетотопротеин
ГАЕ единица гемагглютинации
ДАТ дифтерийный анатоксин кД килодальтон
Ггб процентное содержание гликозилированной формы гемоглобина в капиллярной крови
ИАС иммуноаффинные сорбенты
ИРИ иммунореактивный инсулин
ИСЬ инсулин связывающие белки
ИЭФ изоэлектрическое фокусирование
ИФА иммуноферментный анализ
ИФН интерферон
ИФР инсулинподобный фактор роста
КонА конканавалин А
КэПл коэффициент распределения инсулина между эритроном и плазмой крови ЗФР забуференный фосфатом физиологический раствор, 7,,
РЛГ Рлактоглобулин
iМГ агмикроглобулин
мАФБК мета аминофенилбороновая кислота
мкМ микромоль
мкг микрограмм
ОП2бо ОП0 отношение оптической плотности пробы при 0 нм к оптической плотности при 0 нм.
ПВС поливиниловый спирт
ПАА полиакриламид
ПрА протеин
РСБ ретинолсвязывающий белок
РПГА реакция пассивной гемагглютинации
СГСГ сексгормон связывающий глобулин
Тз трийодтиронин
Т4 тироксин
ТЭСГ тестостерон эстроген связывающий глобулин
ТСГ тироксин связывающий глобулин
ТСПА тироксинсвязывающий преальбумин
ХС хондроэтинсульфат
ЭДТА этилендиаминтетроуксусная кислота
ЭХГ эпихлоргидрин
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Несмотря на то, что в настоящее время достаточно известно о его структуре и свойствах, физиологическая роль микроглобулина остается неясной, предполагается, что он участвует в регуляции иммунологических реакций . I.
Свободный микроглобулин человека это мономерный белок, состоящий из 8 аминокислотных остатков, содержит три цистсина, два из
которых остатки и 3 формируют дисульфидную связь . Микроглобулин гликозилирован тремя отдельными углеводными цепями. Эти полисахаридные цепи составляют 3 , , и 7 соответственно полной молекулярной массы i микроглобулина i . Свободный микроглобулин чрезвычайно гетерогенен и сильно связан с хромофором, обуславливающим его характерную желтокоричневую флюоресценцию в растворе . Микроглобулинi связывает ретинол как важный но не единственный лиганд. Этот белок выявлен у многих видов, включая человека, крысу, свинью, кролика, мышь, цыпленка и низших приматов. Белки разных видов высоко гомологичны, хотя их гликозилирование различно у разных видов. Основные места синтеза микроглобулииа печень и почки. РНК вместе с белком, названным гликопротсином I. Предшественник разрезается в зрелый Х микроглобулин и гликопротеин I. Функциональное значение этой коэкспрессии не известно. МикроглобулинX проявляет иммуносуирессивное действие а. Он подавляет стимуляцию культуры лимфоцитов белковыми антигенами и подавляет миграцию иейтрофилов i vi. В то же время, xi микроглобулин может проявлять митогенный эффект на лимфоциты. Кислый гликопротеин АГП, или орозомукоид, состоит из 3 аминокислотных остатков, имеет молекулярный вес 0. Его молекула имеет две дисульфидные связи , . Он имеет необычно высокое содержание углеводов и обладает очень высоким отрицательным зарядом. АГП относится к основным белкам острой фазы, концентрация которых резко возрастает при различных воздействиях на организм i . Большая часть АГП синтезируется в печени, а остальная часть в других органах, в том числе в очагах опухолевого роста. Индукторами синтеза АГП являются липополисахарид грамотрицательных бактерий, некоторые цитокины интерлейкин 1Ь, фактор некроза опухолей, интерлейкин6 и глюкокортикоиды i . Другие цитокины интерлейкин, интерлейкин4, интерлейкин, наоборот, ингибируют синтез этого белка. Примечательно, что при воспалительных процессах синтезируется АГП, имеющий двухразветвленные углеводные цепи i . Новикова и др. Эта форма АГП АГПС сильно связывается конканавалином ii . Биологические функции АГП очень многообразны и до конца не изучены. Показано его участие в регуляции иммунологических реакций, защите от бактериальных инфекций, стабилизации повышенной проницаемости капиллярного русла, ингибировании апоптоза клеток и многих других биологических процессах i . В последнее время все более важное значение придают транспортным свойствам АГП. Наряду с ретинолсвязывающим белком и микроглобулином кислый гликопротеин относят к семейству липокалинов i . Все известные липокалииы, обеспечивая транспорт и связывание с мембранными рецепторами различных веществбиорегуляторов, играют значительную роль в регуляции процессов клеточного роста и метаболизма. В плазме крови АГП выступает основным переносчиком положительно заряженных лекарственных веществ хлорпромазина, пропранолола, лидокаина, верапамила, тамоксифена, кроме того, этот белок связывает стероиды прогестерон, андростандион, кортизол, анионные лиганды варфарин, фенобарбитал, ретинол, а также серотонин, мелатонин, гистамин и фактор активации тромбоцитов . Значительное увеличение уровня Х кислого гликопротеина наблюдается при множестве состояний, таких как воспалительные заболевания, острый инфаркт миокарда, травмы, беременность, хирургические вмешательства i . Несомненно, превосходящим количественно все остальные транспортные белки плазмы крови является альбумин, составляющий от до всех белков плазмы. Альбумин синтезируется в печени и его единственная негликозилированная гюлипептидная цепь состоит из 0 аминокислот. Альбумин транспортирует билирубин, жирные кислоты, многие лекарственные соединения , , .

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.216, запросов: 145