Дезоксипмбонуклеазы хроматина : Свойства, субклеточная локализация и биологическая роль

Дезоксипмбонуклеазы хроматина : Свойства, субклеточная локализация и биологическая роль

Автор: Абрамова, Зинаида Ивановна

Шифр специальности: 03.00.04

Научная степень: Докторская

Год защиты: 1998

Место защиты: Казань

Количество страниц: 424 с.

Артикул: 225803

Автор: Абрамова, Зинаида Ивановна

Стоимость: 250 руб.

Дезоксипмбонуклеазы хроматина : Свойства, субклеточная локализация и биологическая роль  Дезоксипмбонуклеазы хроматина : Свойства, субклеточная локализация и биологическая роль 

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
ГЛАВА I. ДЕЗОКСИРИБОНУКЛЕАЗЫ ЭУКАРИОТ
1. Общая характеристика нуклеодеполимераз
2. Эндодезоксирибонуклеазы ядер эукариот
3. Экзодезоксирибонуклеазы ядер эукариот
ГЛАВА И. ВНУТРИКЛЕТОЧНАЯ ЛОКАЛИЗАЦИЯ
Д ЕЗОКСИ РИ БОН У КЛ ЕАЗ
ГЛАВА III. ИЗМЕНЕНИЯ АКТИВНОСТИ ДНКаз
В ЗАВИСИМОСТИ ОТ СОСТОЯНИЯ ОРГАНИЗМА
1.Изменение активности ДНКаз при развитии и
дифферен дировке
2. Изменение активности ДНКаз в процессе старения организма
3. ДНКазы при апоптозе апоптоз и механизм старения
4. Изменение активности ДНКаз при экстремальных воздейсгвиях
5. ДНКазы при болезнях энзимопатий
6. ДНКазы при канцерог енезе
7. ДНКазы при лучевой болезни
ГЛАВА IV. ДНКСВЯЗЫВАЮЩИЕ БЕЛКИ ЭУКАРИОТ
1. ДНКсвязывающие белки, специфически связывающие однойитевую ДНК БЗВбелки
2. ДНКсвязывающие белки, специфически связывающие
двунитевую ДНК
3. ДНКсвязывающие белки, модулирующие функции нуклеаз
4. ДНКсвязывающие белки при некоторых патологиях развития клетки
5. ДНКсвязывающие белки печени
Г Л А В А V. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ГЛАВА VI. ОЧИСТКА И ХАРАКТЕРИСТИКА
ЯДЕРНЫХ ДЕЗОКСИРИБОНУКЛЕАЗ
1. Очистка нейтральной Мп2зависимой ДНКазы печени крыс
2. Очистка Са2,М2зависимой ДНКазы эмбрионов морского ежа
3. Иммунохимические свойства дезоксирибонуклеаз
ГЛАВА VII. ЛОКАЛИЗАЦИЯ ДЕЗОКСИРИБОНУКЛЕАЗ
1. Определение локализации Мп2Зависимой ДНКазы методом иммунофлюоресцентной микроскопии
2. Электронное иммуногистохимическое изучение локализации Мп2зависимой ДНКазы
3. Определение локализации Мп2зависимой ДНКазы в клетках печени крыс
4. Сравнительное изучение локализации Мп2зависимой ДНКазы на эпоновых срезах тканей и органов
5. Определение локализации Мп2зависимой ДНКазы в структурах хроматина ядер печени крыс
6. Определение локализации 2,2звиимй ДНКазы в эмбрионах морского ежа
7. Определение локализации ДНКаз в структурах хроматина методом улътраценгрифугирования
ГЛАВА VIII, ИЗУЧЕНИЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ДНКаз С ДНК
МЕТОДОМ ЭЛЕКТРОННОЙ ИММУНОГИСТОХИМИИ
1. Взаимодействие Мп2зависимой ДНКазы с ДНК
2. Взаимодействие 2, ДНКазы с ДНК
ГЛАВА IX. ДНКСВЯЗЫВАЮЩИЕ БЕЛКИ ЯДЕР ПЕЧЕНИ КРЫС И ЭМБРИОНОВ МОРСКОГО ЕЖА
1. ДНКсвязывающие белки ядер печени крыс
2. Выделение ДНКсвязывающсго белка из эмбрионов морского ежа.
ГЛАВА X. ИЗМЕНЕНИЕ АКТИВНОСТИ ЯДЕРНЫХ ДНКаз
В ЗАВИСИМОСТИ ОТ СОСТОЯНИЯ КЛЕТОК
1. ДНКазы хроматина при индуцированном синтезе нуклеиновых кислот
2. ДНКазы хроматина опухолевых клеток
ГЛАВА XI. СИНТЕЗ ДНК i vi
1. Характеристика синтеза ДНК в изолированных ядрах
печени крыс
2. Влияние Мп2зависимой ДНКазы на синтез ДНК
в ядрах из клеток печени крыс i vi
3. Синтез ДНК в ядрах эмбрионов морского ежа оптимизация условий синтеза ДНК
4. Влияние 2,3i ДНКазы на синтез ДНК
в ядрах эмбрионов морского ежа
5. Зависимость синтеза ДНК в ядрах из регенерирующей печени крыс от действия антител к Мп2зависимой ДНКазе и в ядрах из эмбрионов морского ежа от антител к 2,ii ДНКазе
6. Сравнительное изучение влияния ДНКаз на синтез ДНК
в изолированных ядрах морского ежа
7. Влияние экзогенных ДНКаз на меченые ,4СДНК ядра
8. Влияние рестриктаз на синтез ДНК
в изолированных ядрах нечени крыс
9. Влияние ДНКсвязывающих белков хроматина печени
крыс на синтез ДНК
. Влияние ДНКсвязывающего белка эмбрионов
морского ежа на синтез ДН К
. Фракционирование хроматина ядер нормальной и регенерирующей печени крыс в нейтральном градиенте сахарозы
. Влияние ДНКсвязывающих белков ядер печени крыс
на переход хроматина в активную форму
. Влияние рестриктаз на переход хроматина
в активную форму
. Влияние Са2,Мзависимой ДНКазы
на переход хроматина в активную форму
ГЛАВА XII. НЕЙТРАЛЬНАЯ Мп2ЗАВИСИМАЯ ДНКаза В ПРОЦЕССЕ СТАРЕНИЯ ОРГАНИЗМА
1. Исследование белкового спектра фракции 0,4 в зависимости
от возраста животных и при пролиферации клеток
2. Определение активности и содержания ДНКазы
у животных различных возрастов
3. Изучение активности ДНКазы при регенерации
у животных различных возрастов
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ЛИТЕРАТУРА
СОКРАЩЕНИЯ И ОБОЗНАЧЕНИЯ, ПРИНЯТЫЕ В РАБОТЕ
ДНК дезоксирибонуклеиновая кислота
РНК рибонуклеиновая кислота
ДНКаза дезоксирибонуклеаза
ДНП дезоксирибонуклеопротеид
ДСБ ДНКсвязывающий белок
ЭДТА эти лен ди ам и нтетраацетат
ТРИС фисокси меди ламино метан
аытр дезоксинуклеозидрифосфать
алтр дезоксиаденозин рифосфаз
астр дезоксициз идин фи фосфат
аттр дезоксититидин фифосфат
астр дезоксигуанозиифифосфат
иэм эти лмалей ми д
агаСТР цитозинЬДарабинофуранозидфифосфат
АТР аденозинтрифосфорная кислота
ДТТ дитиофеитол
РРО дифенилоксазол
РОРОР 1,4 бис 2 5фенил оксазоя бензол
ТХУ фихлорукеусная кислота
ПЭГ полиэтиленгликоль
И ФА иммуноферментный анализ
ИЭФ изозлектрофокусирова ие
ПААГ полиакрнламидны й гель
додецилсульфат натрия
ЖХВД жидкостная хроматорафия высокого давления
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Глузман провел цитохимическое изучение активности ДНКазы 1 и ДНКазы II в кроветворных клетках крыс. Автором было отмечено, что кислая ДНКаза, в основном, обнаруживается в ядрах ретикулярных клеток костного мозга. Активность щелочной ДНКазы выявилась в цитоплазме кроветворных клеток. Наличие в клетках эндогенной фосфатазы вызывает отложение кристаллов свинца в местах сс локализации i, , i0. Метод требует длительной инкубации 6 ч, что ведет к диффузии и перераспределению фермента. Значительное влияние на локализацию ДНКаз оказывает фиксация ткани, наличие ингибиторов активности фермента , i, i 7. В связи с этим, повидимому, гистохимические методы не нашли широкого применения в изучении локализации ДНКаз в клетках. Метод флюоресцирующих антител, впервые предложенный Кунсом с соавторами i. Этот метод позволяет локализовать ДНКазы независимо от их активности и при условии достаточно хорошей сохранности ткани. Важное значение для понимание роли того или иного белка ядер в частности нуклеодеполимераз имеет изучение взаимодействия белков с нуклеиновыми кислотами в зависимости от их первичной структуры и организации в составе хроматина , i, . В клеточном ядре ДНК в комплексе с 1 истонами и нсгистоновыми белками уложена в компактную структуру хроматин. В настоящее время детально изучена нуклеосомная структура хроматина , , i, i, , iv . Мюльберг и др. Кищенко и др. Преображенская и др. Караванов, . Установлено, что в состав нуклеосом входит октамерный комплекс гистонов, образованный четырмя нарами молекул Н2А. Н2В. НЗ и Н4. Одна молекула гистона 1 и отрезок ДНК переменой длины. I . Храпунов и др. Однако имеется лишь несколько сообщений, как с этими участками связаны негистоновые белки. Результаты этих работ предполагают, что в основном негистоновые белки локализованы во внутринуклеосомной линкерной ДНК v . Среди работ, в которых показана ассоциация белков с хроматином и нуклеосомами, можно отметить работу Киселевой с соавторами Киселева и др. ДНП диаметром нм у цианобактерий i i и более расправленных фибриллах актиномицета , и фосфопротеинфосфатазы в наднуклеосомных структурах Леонова и др. Показана ассоциация белков с нуклеосомами Кфосфобелка , iv, , гистонов Н2В i . ДНК полимераза а, АРэндоДНКаза хроматина ядер печени крыс ixi, V, , ДНКполимераза i . Все эти данные кроме локализации гистона Н2В были получены после переваривания хроматина нуклеазами с последующим центрифугированием через градиент сахарозы и определения в полученных фракциях активности. В работе ди Кануа с соавторами i . А белка, который несет важную функцию в генетической рекомбинации . А и дуплексом ДНК, содержащем однонитевые разрывы, которые, как полагают, способствуют частичному расплетению ДНК. Впоследствии был показан механизм вовлечения белка в рекомбинацию ДНК, путем прямой визуализации образования комплекса гес АДНК в процессе реакции обмена нити , i, i . ДНК полимераза р достаточно равномерно распределена вдоль нити хроматина, а после интенсивного переваривания и фракционирования через градиент сахарозы, энзиматическая активность выявлялась лишь в нуклсосомном коре и не обнаружена в линкерах. При определении локализации АРэндо ДНКазы в аналогичных условиях ixi, V, , энзиматическая активность была выявлена в коровых и линкерных районах. Таким образом, использование иммуногистохимических методов с помощью меченых антител на уровне световой микроскопии достаточно убедительно показало, что этот метод вносит существенный вклад в установление биологической роли иуклеодеполимераз и других ферменов нуклеинового обмена в процессе клеточной дифференциации. Благодаря сочетанию высокой разрешающей способности электронного микроскопа и строго выраженной специфичности и чувствительности антител, метод электронной иммуногистохимии позволяет получать информацию, характеризующуюся высокой пространственной точностью, достоверностью и однозначностью , i, . Однако все эти достоинства проявляются только при наличии хорошо охарактеризованного антигена, высокоспецифических антител, меченых электронноплотным маркером и правильной постановке реакции i, ii, .

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.208, запросов: 145