Гликопротеины gB и gD вируса болезни Ауески: взаимодействие с плазматическими мембранами клеток и роль в индукции противовирусного иммунитета

Гликопротеины gB и gD вируса болезни Ауески: взаимодействие с плазматическими мембранами клеток и роль в индукции противовирусного иммунитета

Автор: Врублевская, Вероника Валерьевна

Шифр специальности: 03.00.04

Научная степень: Кандидатская

Год защиты: 2007

Место защиты: Пущино

Количество страниц: 157 с. ил.

Артикул: 3381374

Автор: Врублевская, Вероника Валерьевна

Стоимость: 250 руб.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Оглавление
Список сокращений
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литерату ры
1.1. Общая характеристика болезни Ауески
1.2. Общая характеристика вируса болезни Ауески
1.3. Структурнофункциональная характеристика гликопротеинов В иЭВБА
1.3.1. Структурная характеристика гликопротсина ВБ А
1.3.2. Структурная характеристика гликопротеина 0 ВБ А
1.3.3. Роль гликопротеинов и ВБА в проникновении вируса в клетки
1.3.3.1. Первичное гепарансульфатзависимое взаимодействие альфагерпесвирусов с клетками
1.3.3.2. ГСнезависимое связывание альфагерпесвирусов с клетками
1.3.3.3. Слияние вирусной оболочки и плазматической клеточной мембраной
1.3.3.4. Распространение альфагерпесвирусов от клетки к клетке
1.4. Роль гликопротеинов и ВБА в индукции противовирусного иммунитета
1.5. Заключение по литературному обзору
Экспериментальная часть
ГЛАВА 2. Материалы и методы
2.1. Химические реактивы, среды и материалы
2.2. Животные
2.3. Сыворотки и антитела
2.4. Культуры клеток и вирусные штаммы
2.5. Определение титра инфекционности вируса ВБА
2.6. Очистка вируса
2.7. Получение вирионов ВБА, меченых 5Бметионином
2.8. Получение гибридом, продуцирующих моноклональные антитела
к белкам ВБА
2.9. Наработка и очистка моноклональных антител
2 Получение конъюгатов антител с пероксидазой хрена
2 Определение концентрации белка
2 Электрофорез белков
2 Иммуноблоттинг
2 Иммунопреципитация радиоактивномеченых вирусных белков
2 Исследование взаимодействия вирусных гликопротеинов с конканавалин Асефарозой
2 Очистка гликопротеинов и с помощью аффинной хроматографии
2 Иммунопероксидазное окрашивание инфицированных клеток
2 Получение и контроль реконструированных липосом
. Получение и реконструированных липосом
. Получение радиоактивномеченых реконструированных
липосом
. Приготовление реконструированных липосом, нагруженных репортерными молекулами
. Оценка проницаемости мембран липосом по одновалентным катионам К
. Определение ориентации гликопротеинов ВБА в мембране виросом.
2 Исследование взаимодействия гликопротеинов В, О и виросом
с клетками
. Исследование связывания гликопротеинов , и виросом с клетками
. Специфичность взаимодействия гликопротеинов , и виросом с клетками
. Взаимодействие гликопротеинов и ВБА и виросом с гепарансульфатами клеток
. Влияние обработки клеток гепариназой на связывание и виросом с клетками
. Влияние гликопротеина на адсорбцию вирионов ВБА на клетках 5I
. Влияние гликопротеина на адсорбцию инфекционных вирусных частиц на клетках
. Интернализация виросом клетками
2 Связывание гликопротеина ВБА с гепаринсефарозой.
2 Иммуноферментные методы
. Определение ВБАспецифических антител с помощью непрямого ИФА
. Двуцентровые , и специфические сэндвич ИФА
. Определение , и IIцифичкиx антител с помощью прямых блокирующих ИФА
. Определение эпитопспецифических антител в сыворотках
. Топографическое эпитопное картирование гликоиротеина
. Определение чувствительности эпитопов гликопротеина к денатурации
2 Влияние специфических антител на развитие вирусной инфекции i vi
. Определение вируснейтрализующей активности антител
. Оценка влияния и специфических антител на проникновение вируса внутрь клеток
. Влияние специфических мкАТ на распространение вируса
от клетки к клетке
2 Исследование иммуногенной активности препаратов очищенных гликопротеинов и реконструированных липосом
2 Пассивная защита животных с помощью и специфических мкАТ
2 Статистическая обработка результатов
ГЛАВА 3. Результаты исследований
3. Получение и специфических моноклональных антител и разработка методов иммуноаффинной очистки гликопротеинов
3.1. Получение панели специфических мкАТ
3.2. Получение специфических мкАТ
3.3. Разработка методов иммуноаффинной очистки гликопротеинов
и ВБА
4. Изучение взаимодействия гл и ко протеи нов и ВБА с плазматическими мембранами клеток
4.1. Взаимодействие гликопротеина с клеточными культурами
4.2. Влияние гликопротеина на адсорбцию вируса на клетках
4.3. Связывание ВБА с иммобилизованным гепарином
4.4. Изучение связывания гликопротеипа с гепарансульфатами
клеток
4.5. Характеристика гепарансульфатсвязывающего центра гликопротеипа ВБА
4.6. Взаимодействие гликопротеина с клетками
5. Изучение взаимодействия вирусных гликопротеинов ВБА с
клетками с использованием метода реконструированных липосом
5.1. Реконструкция гликопротеииов ВБА в мембраны искусственных липосом
5.2. Изучение связывания виросом с клетками
5.3. Интернализация виросом клетками
6. Изучение антигенной структуры гликопротеипа ВБА
6.1. Топографическое эгштопное картирование ВБА
6.2. Характеристика эпитопов ВБА
6.3. Консервативность антигенной структуры гликопротеина ВБА
7. Изучение гуморального иммунного ответа на гликопротеин ВБА
7.1. Вклад конформационных и линейных эпитопов гликопротеина
в индукцию гуморального иммунного ответа
7.2. Эпитопспецифический гуморальный иммунный ответ на гликопротеин ВБА
8. Индукция защитного иммунитета гликопротеином ВБА
8.1. Противовирусная активность специфических антител i vi
8.2. Пассивная иммунизация мышей специфическими мкАТ
8.3. Защитная активная иммунизация мышей гликопротеином ВБА
9. Индукция противовирусного иммунитета при иммунизации мышей вирусными антигенами, реконструированными в мембраны липосом
. Разработка ИФА для серологической диагностики БА
. Обсуждение результатов
.1. Изучение взаимодействия гликопротеина ВБА с клетками
.2. Реконструкция вирусных гликопротсинов в мембраны липосом и изучение взаимодействия лротеолипосом с клетками и их имуногенности
.3. Исследование антигенной структуры и роли в индукции противовирусного иммунитета гликопротеина ВБА
.4. Разработка ИФА для серологической диагностики БА
Заключение
Выводы
Список основных публикаций но теме диссертации
Список литературы


Заболевание свиноматок приводит к резкому нарушению воспроизводства стада аборты, мертворожденные, мумифицированные и мацерированные плоды. Переболевшие животные мало пригодны для откорма и непригодны на племя вследствие остаточных патологических явлений Сергеев, i . Инфицирование вирусом других животных крупного рогатого скота, овец, собак, кошек, крыс, пушных зверей и др. В большинстве случаев при инфицировании этих животных вирусом они погибают, являясь конечным звеном эпизоотической цепи, так как количество выделяемого ими вируса недостаточно для заражения других животных Сергеев, i . Экспериментальную инфекцию можно вызвать у различных видов млекопитающих лошади, мыши, морские свинки, крысы, кролики и др. Люди невосприимчивы к заболеванию Малярец и др. Кроме этого, вирус проникает в нервные окончания тригеминальной и обонятельных областей и через них в ЦНС. Во вторичной фазе болезни, вирус распространяется по организму в свободной форме, либо посредством лимфоцитов, инфицированных вирусом, через кровеносную и лимфатическую систему i i, , . Генерализация инфекции длится примерно 7 дней. Переболевшие животные становятся латентноинфицированными и являются главным резервуаром вируса в хозяйствах vv . Латентный вирус обнаруживается в тригеминальных ганглиях, головном и спином мозге, миндалинах, лимфоидных клетках i i, . Вирус в латентном состоянии может существовать в течение всей жизни животного. При определенных условиях стресс, УФ облучение и др. Сергеев, i . Вирус болезни Ауески i vi 1, вирус псевдобешенства относится к семейству vii, подсемейству ivii i, i, Мэрфи, . Внутри подсемейства ВБА сгруппирован с вирусом ветрянки и опоясывающего лишая человека ВВОЛ и рядом герпесвирусов животных вирус инфекционного ринотрахеита КРС вирус ИРТ, герпесвирус лошадей 1го типа и др. Vivi. Вирионы ВБА имеют размеры нм и состоят из четырех структурных компонентов ядра сердцевины, капсида, тегумента и оболочки. Ядро вириона диаметром нм состоит из линейной 2цепочечной молекулы ДНК, связанной с полиаминами и рядом белков. Ядро окружает икосаэдрический капсид диаметром 5 нм, состоящий из 2 частично полых белковых капсомеров пентамеров и 0 гексамеров. Капсид покрывает внешняя оболочка нерегулярной формы, состоящая из 2слойной липидной мембраны и погруженных в мембрану вирусных гликопротеинов и ряда белков негликопротеиновой природы. Ройзман и Баттерсон, i i, , . Геном ВБА состоит из линейной 2цепочечной ДНК, состоящей примерно из пар оснований и кодирующей около вирусных белков. Геном разделен на длинный уникальный сегмент и короткий уникальный сегмент посредством инвертированных повторов, которые фланкируют сегмент. ВБА способен продуктивно инфицировать различные культуры клеток животных i vi. При размножении в культуре клеток, репликативный цикл ВБА обычно занимает около 8 ч. Инфекция заканчивается лизисом зараженных клеток, который наступает через часов после проникновения вируса в клетку. В адсорбции вируса на клетках участвует комплекс гликопротеинов вируса , , и ряд клеточных рецепторных структур гепарансульфаты клеток, модифицированные гепарансульфаты, V, пектины 1 и 2 . После адсорбции вирус проникает внутрь клеток посредством слияния вирусной и клеточной мембраны. Механизм слияния клеточной мембраны и мембран герпесвирусов до сих пор не изучен, однако определены вирусные гликопротеины, участвующие в этом процессе , , ii . В результате слияния вирусной и клеточной мембран в клетку проникает нуклеокапсид. Уже через 5 мин после проникновения, нуклеокапсиды обнаруживаются около ядерных пор i, vv . Механизм транспорта нуклеокапсидов к ядерным порам в основном неизвестен. Повидимому, в этом процессе белки цитоскелета клеток играют центральную роль. Нуклеокапсиды ориентируются одной из вершин в направлении ядерной поры, и ДНК ВБА инъецируется в нуклеоплазму без разрушения нуклеокапсида i, . Вирусная ДНК транскрибируется клеточной РНКполимеразой II при участии на всех стадиях ряда вирусных белков. Синтез вирусных белков строго регулируется экспрессия вирусных генов координирована и представляет собой последовательный, развернутый во времени каскад событий.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.208, запросов: 145