Антигенное картирование цитохромов Р450 101 и 52АЗ в различных формах

Антигенное картирование цитохромов Р450 101 и 52АЗ в различных формах

Автор: Мошковский, Сергей Александрович

Шифр специальности: 03.00.04

Научная степень: Кандидатская

Год защиты: 2001

Место защиты: Москва

Количество страниц: 128 с. ил

Артикул: 324415

Автор: Мошковский, Сергей Александрович

Стоимость: 250 руб.



Вэпитопы или в так называемое антигенное ядро Вэпитопы, антитела к которым найдены в нескольких антисыворотках. Ответ на этот вопрос можно получить при антигенном картировании с использованием различных антксывороток белка с известной третичной структурой. Изучение различных конформациоиных форм цитохрома Р0саш нативной Р0, неактивной гемсодержатей Р0 и апоформы спектральными методами выявило различия в их конформации, которые количественно оценивали по суммарному изменению элементов вторичной структуры. Данные же о конкретных участках, вовлеченных в процессы конформациоиных переходов, отсутствовали следует отметить, что эти сведения важны для выбора мест мутаций при создании мутантных форм фермента. Изучение трехмерной структуры эукариотических Р0 затруднено, поскольку эти мембраносвязанные белки не подлежат кристаллизации для рентгеноструктурных исследований, и их молекулы имеют слишком крупный размер для успешного применения методов яяерномагниткого резонанса. В связи с этим важное направление в исследовании мембраносвязанных цитохромов 0 создание растворимых модификаций молекулы за счет снижения ее гидрофобности. Это обеспечивает возможность ее кристаллизации, что уже было сделано на примере Р0пог из гриба . Для создания растворимого фермента генноинженерными методами была получена укороченная форма дрожжевого цитохрома Р0 АЗ . Для фундаментальных целей важно структурное сходство укороченной и полной формы, поскольку это делает возможным экстраполяцию данных, полученных для укороченной формы на нативную. Частью исследования по сравнению свойств нативной и укороченной форм этого белка было их сравнительное антигенное картирование. Метолом пептидного сканирования изучить индивидуальную и межвидовую вариабельность гуморального иммунного ответа животных на введение одного и того же белка, выявить иммунсдоминактные антигенные участки цитохрома Р0 1 Р0сат. Показать, как соотносятся полученные в ходе антигенного хартирования антигенные участки цитохрома Р0 1 с го известной трехмерной структурой. Выявить степень сходства и различия антигенных карт холои апофоры цитохрома Р4 1, а также полноразмерного цитохрома Р0 АЗ 0 и его искусственной укороченной формы. С применением пиновой технологии синтезировать гексаг. Р0 ЛЗ. Получить и охарактеризовать кроличьи и куриные сыворотки х апо и холо формам цитохрома Р0саш, кроличьи сыворотки к полной и укороченной форме цитохрома Р0 , а также препараты иммуноглобулинов из желтка куриных яиц против разных форм Р0саш. Методом неконкурентного сорбционного ИФА гексалелтидсв I цитохрома Р0 АЗ и ранее синтезированных з ИВМХ гексапептидов цитохрома Р0сат определить линейные антигенные детерминанты разных форм этих белков, используя полученные антисыворотки и препараты иммуноглобулинов. Разработать удовлетворительный метод статистической обработки данных ИФА сывороток с наборами гексапептидов для отделения значимых величин связывания антител от фоновых. Сравнить наборы антигенных гексапептидов холоформы Р0сазп, полученные при иммунизации разных особей одного вида, а также межвидовые антигенные карты, выявить иммунодоминантные участки. Сравнить антигенные карты различных конформациокных форм цитохромов и . В ходе работы был получен препарат алоцитохрома Р0сат, кроличьи сыворотки и препараты куриных антител против апо и холоформы этого белка. У всех препаратов определяли титрг и проводили исследования связывания сыворотки с гексапептидами, полностью перекрывающими последовательность цитохрома Р0сат. Таким образом были получены антигенные карты апо и холоцитохрома Р4 сат. Кроме того, по мотивам одного из установленных эпитопое были синтезированы гексапептиды с единичными аминокислотными заменами, и исследовано их связывание с опытными сыворотками. ИФА с гексапептидами, полностью перекрывающими последовательность этого цитохрома Р4 , получиз, таким образом, антигенные карты соответствующих белков. Работа выполнена в лаборатории конструирования и синтеза минимальных функциональноактивных белковых фрагментов НИИ биомедицинской химии РАМН.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.185, запросов: 145