Клонирование и экспрессия генов, кодирующих белки мембраны включения IncA-IncG Chlamydia trachomatis

Клонирование и экспрессия генов, кодирующих белки мембраны включения IncA-IncG Chlamydia trachomatis

Автор: Кострюкова, Елена Сергеевна

Шифр специальности: 03.00.04

Научная степень: Кандидатская

Год защиты: 2007

Место защиты: Москва

Количество страниц: 158 с. ил.

Артикул: 3329548

Автор: Кострюкова, Елена Сергеевна

Стоимость: 250 руб.

Оглавление.
Список сокращений
Введение.
Глава I. Обзор литературы
1.1. Общая характеристика хламидий
1.1.1. Классификация хламидий, вызывающих патологии у
человека
1.1.2. Молекулярные основы внутриклеточного паразитизма хламидий.
1.1.2.1. Жизненный цикл хламидий
1.1.2.2. Особенности хламидийного включения
1.1 Взаимодействия хламидий с клеткойхозяином
1.1.3. Структурнофункциональная организация генома
хламидий
1.1.3.1. Общая геномика хламидий
1.1.3.2. Сравнительная геномика хламидий
1.1.4. Транскриптом хламидий.
1.2. Система секреции III типа хламидий.
1.2.1. Строение системы секреции III типа у хламидий.
1.2.2. Поиск белковэффекторов системы секреции III типа у хламидий.
1.3. Белки мембраны включения хламидий
1.3.1. Общая характеристика семейства
1.4. Поиск хламидийных белков мембраны включения i ii
1.3.1. Транскрипционный анализ генов, кодирующих Iбелки хламидий.
1.3.2. Связь Iбелков с системой секреции III типа.
1.3.3. Взаимодействия Iбелков с эукариотическими органеллами при экспрессии кодирующих их генов в
клетках vii
1.3.4. I.
1.4.4.1. Роль I в формировании единого включения у С. i.
1.4.4.2. Взаимосвязь I с вторичными включениями С. i.
1.4.4.3. Особенности строения I.
1.4.4.4. Влияние экспрессии i на развитие хламидийной инфекции
1.3.5. I.
1.3.6. СТ9
1.3.7. Белки мембраны включения, не принадлежащие семейству
Глава II. Материалы и методы
2.1. Материалы
2.1.1. Клеточные линии, бактериальные штаммы и плазмидные векторы
2.1.2. Реактивы и антибактериальные препараты
2.1.3. Антитела и флуоресцентные красители.
2.1.4. Олигонуклеотиды.
2.2. Методы
2.2.1. Выделение геномной ДНК С. i.
2.2.2. Полимеразная цепная реакция.
2.2.3. Определение нуклеотидной последовательности фрагментов
генов, кодирующих Iбелки С. i
2.2.4. Реакция рестрикции
2.2.5. Выделение фрагментов ДНК из агарозного геля.
2.2.6. Реакция лигирования.
2.2.7. Культивирование клеточных культур Е. i.
2.2.8. Трансформация клеток .i плазмидной ДНК
2.2.9. Выделение плазмидной ДНК
2.2 Экспрессия генов i и i в клетках
.i.
2.2 Массспектрометрический анализ рекомбинантных белков
Т xI и Т гх А1псС.
2.2 Выделение рекомбинантных белков I, I, xI и xI из клеток .i
2.2 Разделение составных белков xI и xI
2.2 Иммунизация кроликов препаратами белков I и I С.
i и отбор крови
2.2 Выделение и очистка поликлональных антител к рекомбинантным белкам I и I С. i.
2.2 Иммуноблот.
2.2 Трансфекция клеток линии
2.2 Определение жизнеспособности клеток линии , экспрессирующих гены Iбелков С. i
2.2 Конфокальная микроскопия.
2.2 Флуоресцентное окрашивание эукариотических клеток
2.2 Подсчет параметров колокализации
Глава III. Результаты исследования
3.1. Определение генетического полиморфизма генов, кодирующих Iбелки С. i.
3.2. Клонирование полноразмерных генов, кодирующих Iбслки С. i, в экспрессирующие плазмидные векторы
3.3. Определение локализации Iбелков С. i при экспрессии их генов в клетках линии .
3.4. Определение жизнеспособности клеток линии , экспрессирующих гены Iбелков С. i.
3.5. Выявление колокализации Iбелков С. i с эукариотическими органеллами при экспрессии кодирующих их
генов в клетках линии .
3.6. Определение влияния таксола на распределение составного белка I при экспрессии кодирующего его гена в клетках линии .
3.7. Получение и очистка полноразмерных рекомбинантных белков
I и I С. i
3.8. Получение и анализ поликлональных антител к рекомбинантным
белкам I и I С. i.
Глава IV. Обсуждение результатов исследования
Заключение.
Выводы.
Список цитируемой литерату ры
Благодарности
Список используемых сокращении
, СТР, ТТР x i i i i, ii i, ii i, дезокси адснозин трифосфат гуанозин трифосфат, цитидин трифосфат, тимидин трифосфат
i i, аденозин дифосфат
i i xi i, зоны выхода из эндоплазматического ретикулума
I i ii , ЭПРГольджи промежуточный компартмент
i, зеленый флуоресцирующий белок
Iбелки ii i, белки мембраны включения
МОМР i, основной наружный мембранный белок
i, красный флуоресцирующий белок
iiv , растворимый
чувствительный рецептор прикрепления
iii i, перемещаемый актин
реорганизующий фосфопротеин
i , трансГольджи сеть
x тиоредоксин
ii, пшеничный зародышевый агглютинин ак аминокислота
ДНК дезоксирибонуклеиновая кислота
кДНК комплиментарная ДНК
мРНК матричная РНК
ОРС открытая рамка считывания
пн пара нуклеотидов
РНК рибонуклеиновая кислота
РТ ретикулярные тельца
ССТТ система секреции III третьего типа
ЭПР эндоплазматический ретикулум
ЭТ элементарные тельца
Введение.
Актуальность


I и I, которые в дальнейшем могут быть использованы для выявления белковпартнеров в реакциях белокбелкового взаимодействия, а так же специфические поликлональные антитела к ним. Кроме того, в результате определения генетического полиморфизма генов, кодирующих Iбелки С. Цель работы клонирование и экспрессия генов, кодирующих белки мембраны включения С. Определение генетического полиморфизма генов, кодирующих белки мембраны включения IIi С. Клонирование генов, кодирующих белки мембраны включения II С. Определение локализации белков мембраны включения II . Выявление колокализации белков мембраны включения II . Клонирование генов, кодирующих белки мембраны включения I и I . Получение и очистка полноразмерных рекомбинантных белков I и I . Глава I. Обзор литературы. Общая характеристика хламидий. Классификация хламидий, вызывающих патологии у человека. Представители порядка i грамотрицательныс бактерии, характеризующиеся небольшими размерами, отсутствием типичного пептидогликана, облигатным характером внутриклеточного паразитирования и сложным двухфазным жизненным циклом. Таксономия порядка i не является окончательно устоявшейся, поскольку количество выделяемых новых видов постоянно растет. При этом все хламидии, способные вызывать болезни у человека, относятся к семейству i. Согласно последним изменениям систематики v , , это представители родов i С. В пределах вида . Серовары А, В, Ва и С вызывают конъюнктивиты, осложняющиеся трахомой наиболее распространенным инфекционным заболеванием глаз, приводящим к слепоте. Серовары I, 2, и 3 приводят к развитию венерической лимфогранулемы. Серовары К являются возбудителями ряда урогенитальных инфекций человека, а так же артрита синдром Рейтера , . В развитых странах С. У мужчин С. У женщин . Младенцы, рожденные инфицированными матерями, часто страдают конъюнктивитами и пневмонией хламидийной природы , . С. i с развитием таких патологий, как атеросклероз i , , , , i , , , , бронхиальная астма , и рак легкого i , . Чаще всего орнитоз возникает у людей, по роду профессии связанных с большими скоплениями домашней птицы , . Кроме того, показана возможность возникновения конъюнктивитов, гломерулонефритов и эндокардитов при контакте человека с кошками и голубями, инфицированных С. Так же известны случаи спонтанных выкидышей на третьем триместре беременности у женщин, принимавших окоты у инфицированных С. Молекулярные основы внутриклеточного паразитизма хламидий. Жизненный цикл хламидий. Хламидии обладают уникальным двухфазным жизненным циклом рис. Он представляет собой последовательную смену двух состояний хламидии инфекционного, в виде небольших спороподобных элементарных телец ЭТ и вегетативного, в виде крупных репродуцирующихся ретикулярных телец РТ , . ЭТ являются внеклеточной формой хламидий. Их размер составляет приблизительно 0,3 мкм, они не проявляют какойлибо метаболической активности и характеризуются наличием конденсированного нуклеоидного комплекса ii, . Устойчивость ЭТ к физическим воздействиям на внеклеточном этапе существования хламидий достигается за счет образования множественных дисульфидных связей между белками наружной мембраны бактерий МОМР i, основной наружный мембранный белок и двух цистеинбогатых белков , , vi , , , , . Жизненный цикл . Рисунок 1. Жизненный цикл С. Хламидии не способны к свободному существованию в цитоплазме клеткихозяина. Все события внутриклеточного этапа жизненного цикла происходят внутри особой мембранной вакуоли, называемой включением, которая позволяет хламидиям создавать необходимое для собственного развития микроокружение. По мере размножения хламидий включение увеличивается в размерах, к концу цикла оно может занимать практически весь объем клетки, за исключением ядра i, . После проникновения в клетку происходит дифференцировка ЭТ в более крупные 1 мкм в диаметре метаболически активные и способные к размножению РТ. В процессе дифференцировки ЭТ комплекс дисульфидсвязанных мембранных белков подвергается восстановлению, а так же происходит деконденсация нуклеоидного комплекса ii, , , .

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.323, запросов: 145