Молекулярные механизмы формирования резистентности к тетрациклинам и фторхинолонам у молликут

Молекулярные механизмы формирования резистентности к тетрациклинам и фторхинолонам у молликут

Автор: Говорун, Вадим Маркович

Шифр специальности: 03.00.04

Научная степень: Докторская

Год защиты: 2000

Место защиты: Москва

Количество страниц: 287 с. ил.

Артикул: 269859

Автор: Говорун, Вадим Маркович

Стоимость: 250 руб.

Молекулярные механизмы формирования резистентности к тетрациклинам и фторхинолонам у молликут  Молекулярные механизмы формирования резистентности к тетрациклинам и фторхинолонам у молликут 

ВВЕДЕНИЕ
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Молликуты. Общая характеристика класса
1.2. Сравнительная геномика микоплазм
1.2.1. Сигнальные системы
1.2.2. Транспорт
1.2.3. Другие особенности и свойства геномов микоплазм
1.3. Механизмы изменчивости генома микоплазм
1.3.1. Антигенная изменчивость
1.3.2. Хромосомные перестановки
1.3.2.1 .Фрагменты структурных генов
1.3.2.2. Интегрированные вирусные последовательности
1.3.2.3. Iподобные элементы
1.3.3. Влияние внешних воздействий на изменчивость генома микоплазм
1.3.3.1. Трансформация микоплазм
1.3.3.2. Культивирование микоплазм
1.3.4. Биохимические особенности организации плазматической
мембраны молликут
1.4. Краткая характеристика микроорганизмов, объектов исследования
1.4.1. i
1.4.1.1. Общая характеристика
1.4.1.2. Классификация .ii
1.4.1.3. Факторы вируленпюсти . i
1.4.1.4. Эпидемиология и клиническое значение
1.4.1.5. Чувствительность . i к антибактериальным агентам
1.4.2. iii
1.4.3. , ii
1.5. Антибактериальные препараты, используемые для лечения микоплазмозов и известные механизмы защиты
1.5.1. Основные группы бактериальных агентов,
используемых при лечении микоплазмозов
1.5.2. Антибиотикорезистеитность микоплазм
1.5.3. Фторхинолоны синтетические препараты ингибиторы топоизомераз
1.6. Резистентность микроорганизмов к фторхинолонам
1.7. Универсальные механизмы резистентности бактерий
1.8. Генная терапия хронических инфекционных заболеваний урогенитального тракта с использованием цитотоксических пептидов
1.8.1. Современное состояние генной терапии микоплазменных инфекций
1.8.2. Цитотоксичсскис пептиды
1.9. Общие замечания
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ
3.1. Определение нуклеотидных последовательностей геновмишеней для действия ФХ
3.1.1. Определение нуклеотидной последовательности фрагмента гена у .ii
3.1.2. Определение нуклеотидной последовательности генов, кодирующих субъединицы ДКгиразы .ivii.
3.1.3. Поиск фрагментов генов, кодирующих субъединицы топоизомеразы IV типа .iii, и определение их нуклеотидной последовательности
3.1.4. Разработка и использование метода амплификации с произвольным праймером для генотипирования микоплазм
3.1.5. Метод генотипирования клинических изолятов i биовара v
3.1.6. Метод трансформации .ii плазмидой рАМ0 с использованием элск гропорацни
3.2. Построение экспериментальной модели для изучения феноменологии адаптации формирования резистентности микоплазм к антибактериальным агентам в лабораторных условиях
3.2.1. Селекция лабораторного штамма .ii Н в присутствии ципрофлоксацина
3.2.2. Получение культур лабораторного штамма М.ii Н, резистентных к цинрофлоксацину, офлоксацину и
ломефлоксацину
3.2.3. Исследование перекрестной резистентности культур .ii к ФХ
3.2.4. Культивирование ципрофлоксацинрезистентных культур .ii
при постоянных концентрациях препарата
3.2.5. Исследование генов рагС и клинических
изолятов М. ii
3.2.6. Культивирование клинических изолятов на
ципрофлоксацинс, офлоксацинс и ломефлоксацинс
3.2.7. Исследование генетической вариабельности клинических
изолятов М. ii
3.2.8. Особенности формирования ФХрсзнстентных клонов
у клеток .iii
3.2.9. Биохимические особенности адаптации микоплазм к
воздействию антибактериальных препаратов
3.3. Определение параметров накопления и вывода бромистого
этидия и ципрофлоксацина у мутантов .iii и .ii,
резистентных к разным концентрациям ФХ
3.3.1. Получение мутантов, устойчивых к бромистому этидию, и выявление перекрестной устойчивости этих мутантов
к фторхинолонам
3.3.2. Накопление и выброс бромистого этидия
3.3.3. Влияние ингибиторов на процессы накопления и выброса бромистого этидия клетками М.ii и .iii
3.4. Характеристика процессов формирования резистентности
микоплазм и уреаплазм к тстрациклинам
3.4.1. Определение аллельного полиморфизма мозаичности
у клинических изолятов .ii и .i
3.4.2. Особенности персистированя клинических изолятов .i
при применении тетрациклииов
3.4.3. Клиническая характеристика изолятов .i
3.4.4. Результаты выявления детерминанты среди
клинических изолятов
3.4.5. Получение мутантов клеток молликут, устойчивых к тетрациклину
3.4.6. Устойчивость клеток .ii и .iii к ФХ в присутствии клеток
3.5. Применение рекомбинантных плазмид, экспрессирующих ген меллитина, для подавления размножения молликут
3.5.1. Цитотоксическая активность меллитина, экспрессируемого рекомбинантными векторами, в клетках
iii и ii
3.5.1.1. Конструирование рекомбинантного вектора, экспрессирующего
ген меллитина, на основе плазмиды
3.5.1.2. Конструирование рекомбинантного вектора,
экспрессирующего меллитин, на основе плазмиды рАМ 0
3.5.2. Кинетика размножения клеток .i, содержащих
рекомбинантные плазмиды 1 и рте
.3. Кинетика размножения клеток . iii после трансформации
ДНК рекомбинантных плазмид и ргпс
3.5.4. Проверка цитотоксической активности рекомбинантного
вектора рАМ 0, экспрессирующего меллитин в клетках М. ii
3.5.5. Экспрессия гена меллитина в клетках . iii и М. ii
3.5.6. Система регулирования уровня экспрессии целевого гена
в эукариотических клетках
3.5.7. Экспрессия меллитина в линии клеток, инфицированных М. ii 6 Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Сигнальные системы Наиболее распространенная у бактерий каскадная система передачи сигнала, состоящая из мембранного рецептора, гистидинкиназы и эффекторного белка, управляющего процессом транскрипции, у микоплазм, повидимому, отсутствует либо сильно редуцирована 1,7,0. В связи с этим возникают вопросы о механизмах, с помошыо которых эти клетки способны трансформировать сигналы на эффекторный уровень как при взаимодействии с клеткойхозяином, так и при культивировании без нес. Возможно, что определенную роль в трансдукции сигнала осуществляют некоторые липопротеины плазматической мембраны, являющиеся гипервариабельными антигенами, подверженными фазовым генетическим вариациям и выполняющими жизненно важные для клетки функции адгезию на поверхности и конститутивный энергозависимый транспорг метаболитов. К разряду охарактеризованных у молликут систем следует отнести гены, продукты которых участвуют в транспорте белков к плазматической мембране так называемые РРНке комплексы с ОТРазной активностью 0,7,8. Хорошо известно, что микоплазмы способны модифицировать состав своей плазматической мембраны и, следовательно, весь метаболизм за счет липидных перестроек. АЛтЛатг ,7. Такое перераспределение вызывает фазовые сдвиги в мембране ахолеплазм и является адаптивным ответом на многие внешние воздействия. У микоплазм, повидимому, таким регулятором является соотношение этерифицированного и свободного холестерина. Изменения в микровязкости мембраны способны влиять на интенсивность метаболизма. Сравнительная геномика микоплазм указывает на наличие сильно редуцированного аппарата транспортеров ЛВС и РТ5 типа, обеспечивающих, в основном, транспорт жизненно важных метаболитов и интермедиаторов гликолиза основного источника энергии для молликут 8. Кроме транспортеров этих двух семейств у микоплазм обнаружены гены белков, относящихся к МР8, М1Р, АР8 и Тгк семействам 6. Транспорт сахаров, олигопептидов и нуклеотидов у микоплазм был охарактеризован в ранних работах нескольких групп исследователей 1. Геномика позволила определить предсказанные аминокислотные последовательности белков, участвующих в этих процессах. Эта цифра составляет от общего размера генома. Одной из особенностей организации генома М. С другой стороны, нет никаких указаний на то, что системы обратного транспорта эффлюкса участвуют у микоплазм в адаптивных реакциях и, в частности, в формировании резистентности к антибактериальным препаратам. Некоторые интересные особенности структурной организации генома микоплазм, подтверждающие тезис о превалировании в ходе эволюции данного вида микрорганизмов процессов редукции контролирующих генов над структурными, выявляются при анализе системы генов, ответственных за процессы деления. ДНКполимеразы. Одна из гипотез, объясняющих высокий уровень мутационной активности в геноме микоплазм, опирается на отсутствие так называемой i экзонуклсазной активности, ответственной за устранение ошибок, возникающих в ходе репликации ДНК 3. Эти данные получены к настоящему времени для М. В то же время у большинства микоилазм ДНКзависимыс ДНКполимеразы представлены только одним ферментом ДПКполимеразон III типа, причем у некоторых видов микоилазм субъединицы этого фермента, имеющие регуляторное значение, не найдены 0,7. Белки, участвующие в делении. Количество белков, принимающих участие в делении, у микоплазм также редуцировано ,7,2. Можно с уверенностью говорить о наличии в геноме разных молликут , некоторых шаперонов и белков теплового шока, которые часто экпрессируются конститутивно. В то же время сигнальная пептидаза I типа, участвующая в экскреции полипептидов, повидимому, редуцирована вследствие прикрепления микоплазм к мембране клеткихозяина и паразитического существования. Следует отметить, что в клетках . Подводя итог изложению современных представлений о структурнофункциональной организации генома микоплазм, следует сказать, что, повидимому, упрощение структуры и редукция информационной емкости генома молликут привели к потере многих жизненно важных функций этих бактериальных клеток и снижению интегрального контроля над собственным метаболизмом. Как следствие этих процессов у микоплазм существенно повысился уровень спонтанного мутагенеза, с которым и связаны многие свойства микоплазм.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.213, запросов: 145