Картирование границ фрагментов ДНК в районе хромосомы 17q12-q21 в клетках опухолей рака молочной железы человека с увеличенной дозой гена HER2/neu

Картирование границ фрагментов ДНК в районе хромосомы 17q12-q21 в клетках опухолей рака молочной железы человека с увеличенной дозой гена HER2/neu

Автор: Маценко, Наталья Юрьевна

Шифр специальности: 03.00.03

Научная степень: Кандидатская

Год защиты: 2008

Место защиты: Новосибирск

Количество страниц: 137 с. ил.

Артикул: 4142337

Автор: Маценко, Наталья Юрьевна

Стоимость: 250 руб.

Введение
Глава 1. Обзор литературы
1.1. Рецептор 2 член семейства рецепторов эпидермального фактора роста
1.1.1. Семейство рецепторов
1.1.2. Факторы роста лиганды семейства рецепторов
1.1.3. Особенности строения рецептора II
1.2. Молекулярные механизмы увеличения экспрессии гена рецептора 2
1.2.1. Хромосомные перестройки.
1.2.2. Анеусомия.
1.2.3. Регуляция экспрессии гена 2 транскрипционными факторами
1.2.4. Амплификация гена
1.3. Роль рецептора 2 в неопластической трансформации клегок
1.4. Особенности изменения клинических показателей у пациенток с повышенным уровнем экспрессии гена 2 в клетках злокачественных опухолей различного типа.
1.5. Прогностическая значимость увеличения экспрессии и дозы гена 2.
1.6. Рецептор II2 мишень для противоопухолевой терапии.
1.7. Технологии анализа 2 опухоли
1.7.1. Диагностика методом ИГХ.
1.7.2. Диагностика методом ИФА.
1.7.3. Диагностика методом
1.7.4. Метод ПЦР диагностики.
1.7.4.1. ПЦР РВ
1.8. Модели механизмов амплификации генов и фрагментов хромосом
1.8.1. Амплификация является частым событием в опухолевых клетках
1.8.2. Причины инициации амплификации
1.8.2.1. Репликация ДИК
1.8.2.2. Дисфункция теломеров
1.8.2.3. Сайты ломкости
1.8.3. Механизмы амплификации
1.8.3.1. Внутрихромосомная амплификация по модели цикла
1.8.3.2. Внехромосомная амплификация фрагментов хромосом.
1.8.3.3. Альтернативный механизм амплификации онкогенов в районе хромосомы
1.9. Доза генов, располагающихся вокруг гена 2, их функции и
описанные случаи изменения активности в опухолях.
Заключение.
Глава 2. Материалы и методы
2.1. Магериалы.
2.2. Методы
2.2.1. Образцы ткани опухоли РМЖ.
2.2.2. Выделение ДНК.
2.2.2.1. Выделение ДНК из архивных срезов методом экстракции смесыо фенолхлороформ
2.2.2.2. Выделение ДНК из свежезамороженных образцов опухоли.
2.2.3. Определение концентрации ДНК в растворе.
2.2.3.1. Оценка концентрации раствора нуклеиновых кислот по оптической плотности
2.2.3.2. Определение концеиграции растворов ДНК с помощью калибровочной прямой i ПЦР РВ
2.2.4. Олигонуклеотидные праймеры и флуоресцентные зонды
2.2.5. Условия проведения ПЦР РВ для системы с интеркалирующим красителем
2.2.6. Условия проведения Г1ЦРРВ для системы с зондами.
2.2.7. Калибровочная прямая и динамический диапазон ПЦР РВ.
2.2.8. Интерпретация результатов.
2.2.9. Анализ флексибильности нуклеотидной последовательности ДНК в районе 3 2 ТОР2А.
2.2 Анализ продуктов ПЦР.
2.2 Компьютерный анализ флексибильности нуклеотидных последовательностей.
2.2 Статистическая обработка данных.
Глава 3. Результаты.
3.1. Сравнение предложенных для определения дозы гена 2 протоколов и ПЦРРВ
3.1.1. Оценка эффективности реакции и воспроизводимости результатов измерения дозы гена 2 при использовании и
1ТЦРРВ.
3.1.2 Определение дозы гена 2 в опухолевой ткани молочной железы
с применением и ПЦР РВ
3.1.3. Сравнение результатов определения дозы гена 2 предложенным протоколом ПЦР РВ с результатами ИГХ и I определения статуса опухолей РМЖ
3.2. Картирование границ амплификации ДИК в районе хромосомы 2 с помощью метода ПЦРРВ
3.2.1. Оценка минимальной длины ампликонов хромосомы, содержащих ген 2, с помощью определения дозы соседних генов в образцах ткани опухоли РМЖ.
3.3. Компьютерный анализ структурных особенностей нуклеотидной последовательности ДНК в районе хромосомы 2.
3.3.1. Район ТВС 2 ТОР2А содержит последовательности ДНК с высокой флексибильностью
3.3.2. Нуклеотидные последовательности флексибильных районов xX7, x x2 высоко гомологичны с АТбогатыми нуклеотидными последовательностями в I и ЧСЛ.
3.3.3. Нуклеотидные последовательности флексибильных сайтов x1 и x2 обладают предрасположенностью к формированию устойчивых вторичных структур
3.4. Анализ взаимосвязи между местоположением 1раниц амплификации и локализацией специфических нуклеотидных последовательностей в районе хромосомы 2.
3.4.1. Амплификация фрагментов 1ена локализованных до и
после сайтов высокой флексибильносги и 7гедЛ7г
Глава 4. Обсуждение результатов
Список литературы.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
i альтернативное удлинение теломер
ВАС i iii искусственная хромосома бактерий
ii модель амплификации разломслияниемост
1 1 гаситель флуоресценции
i карбамилфосфатсинтетаза второго типа
iv i iii сравнительная геномная гибридизация
I i i i iii хромогенная гибридизация i i
i i i хроническая миелоидная лейкрмия
7 2 i i 7 СОС2родственная протеиновая киназа
i дигидрофолат редуктаза
i кольцевые внехромосомные ацентромерные фрагменты ДНК
i эпидермальный фактор роста
i рецептор эпидермального фактора роста
I i i иммуноферментный анализ
x i болезнь Педжета, разновидность РМЖ
6карбоксифлуоресцеин флуоресцентный краситель
iii Управление по контролю над качеством пищевых продуктов и лекарственных препаратов США
X7 x i белок, содержащий бокс домен
I i i iii флуоресцентная гибридизация i i
I iii iii ингибиторы димеризации рецепторов семейства
ii i гомогенно окрашенные район хромосомы
2 i 2 рецептор 2го типа эпидермального фактора роста человека
I Ii i i Итальянская Организация оценки качества опухолевых биомаркеров
МАРК iiv i i протеиновая киназа, активируемая митогенно
i i множественная устойчивость к лекарственным препаратам
2 i iii 2 фактор 2го типа нейрогенной диффереицировки
1 ii i ii 1 i белок, содержащего домен подобный i
i фенилэтаноламин метилтрансфераза
xi iiv ii i белок, связывающий рецептор активируемый пероксисомным пролифиратором
i 1 i I регуляторная субъединица I протеиновой фосфатазы 1го типа
iiv ii i количественный микросателлитный анализ
i i x обмен между сестринскими хроматида
3 i ii 3 белок 3го типа содержащий домен
i спектральное кариотипироваиие
ТСЛР ii белок кепа титана
iii искусственная хромосома дрожжей
А.о. аминокислотный остаток
ВОЗ Всемирная Организация Здравоохранения дАТФ дезоксиаденозинтрифосфат дГТФ дезоксигуанозинтрифосфат
ДНК дезоксирибонуклеиновая кислота дТТФ дезокситимидинтрифосфат дЦГФ дезоксицитозинтрифосфат
ИГХ иммуногистохимия
МКА моноклональные антитела
Н .о. нуклеотидное основание
П.н. пара нуклеотидных оснований
ПЦРРВ полимеразная цепная реакция в режиме реального времени РМЖ рак молочной железы
РСЛ редкий сайт ломкости в ДНК
СЛ сайт ломкости в ДНК
Т.п.н. тысяча пар нуклеотидных оснований
ФИО альфа фактор некроза опухоли альфа чел частый сай г ломкости в ДНК
ВВЕДЕНИЕ


В последующие годы жизни отмечается увеличение частоты РМЖ, в частности, если в лет регистрируется 0 случаев, то после лет 0 случаев на сто тысяч женщин. Новосибирск по заболеваемости злокачественными новообразованиями входит в десять самых неблагополучных регионов РФ. По данным ежегодной отчетной конференции онкологов в году в Новосибирске количество больных РМЖ составило . РМЖ на 0 тысяч женского населения. Только в году в Новосибирске диагностированы новые случаи РМЖ у 2 больных. Большинству пациенток выполнены калечащие операции полное удаление молочной железы. Значительным прогрессом в диагностике и лечении РМЖ стало открытие молекулярных маркеров, которые имеют прогностическое и предсказательное значение при определении их статуса у пациенток с РМЖ. Из общего числа пациенток страдающих РМЖ, увеличенная экспрессия гена II2, кодирующего рецептор 2, в клетках опухоли встречается в случаев . Избыточное наличие этого рецептора на поверхности опухолевых клеток свидетельствует о наиболее агрессивной форме РМЖ, которая характеризуется быстрым ростом опухоли, высокой вероятностью метастазирования, снижением эффективности химио, гормональной и лучевой терапии Имяиитов Е. Н с соавт. М., . В подавляющем большинстве случаев в основе увеличенной экспрессии рецептора лежит амплификация гена 2 i . Своевременная диагностика 2 опухоли позволяет назначить адекватное и эффективное лечение РМЖ. На данный момент в России существуют проблемы с диагностикой РМЖ в целом и с определением 2x опухолей в частности, связанные как с плохим оснащением по всей стране диагностических лабораторий, так и с несовершенностью применяемых методов диагностики иммуногистохимического ИГХ анализа и флуоресцентной гибридизации i i I. На сегодняшний день, проблема отсутствия быстрого, точного и доступного для большинства диагностических лабораторий метода определения 2статуса пациенток с РМЖ имеет острую социальную важность. Знание НЕК2статуса пациенток и использование антиНЕЯ2наиравленной терапии Герцептина позволяет назначить индивидуальное и оптимизированное лечение больных РМЖ, исключив назначение заведомо неэффективной терапии. Таким образом, поиск нового подхода к определению НЕ2статуса опухолей РМЖ, который учитывал бы недостатки ныне использующихся методик определения и был доступен для большинства диагностических лабораторий в качестве рутинного анализа, является одной из актуальных проблем современной онкологии. Амплификация генов один из механизмов активации онкогенов в процессе развития опухоли. Е. . В литературе описано несколько механизмов амплификации, предложенных для объяснения активации онкогенов в клеточных линиях опухолей разного типа, в том числе и для РМЖ vv . М., . Однако предложенные модели амплификации не дают ответа на вопрос о причинах ее возникновения. В каком случае этот процесс случайный, а в каком случае селективное событие Почему амплификация возникает в определенных локусах на хромосоме Существуют ли закономерности амплификации, общие молекулярные основы и механизмы ее инициации Если подобные закономерности и общие механизмы возникновения амплификации онкогенов существуют, то их открытие может послужить основой для разработки новых препаратов направленного действия для антираковой терапии, которые позволят контролировать и даже предотвращать развитие раковых опухолей у человека. В свете постоянного увеличения заболеваемости злокачественными новообразованиями актуальность данной темы не вызывает сомнений. Картирование границ фрагмента ДНК в районе хромосомы 2 в клетках опухолей РМЖ человека с увеличенной дозой гена 2 и выявление структурных особенностей ДНК на данных границах. Провести сравнительный анализ чувствительности, воспроизводимости и диапазона измерений двух протоколов ПЦРРВ и i для определения дозы гена 2 в клетках опухолей РМЖ. Провести сравнительный анализ результатов определения дозы гена 2 методом ПЦРРВ с результатами методов ИГХ и I определения НЕЯ2статуса опухолей РМЖ. Определить дозу гена 2 в панели образцов опухолей РМЖ человека методом ПЦРРВ.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.198, запросов: 145