Создание неиммунной комбинаторной библиотеки одноцепочечных антител человека и получение из этой библиотеки антител против фактора некроза опухоли альфа

Создание неиммунной комбинаторной библиотеки одноцепочечных антител человека и получение из этой библиотеки антител против фактора некроза опухоли альфа

Автор: Батанова, Татьяна Александровна

Шифр специальности: 03.00.03

Научная степень: Кандидатская

Год защиты: 2005

Место защиты: Кольцово

Количество страниц: 126 с. ил.

Артикул: 2817004

Автор: Батанова, Татьяна Александровна

Стоимость: 250 руб.

ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.
Введение
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
ФАГОВЫЙ ДИСПЛЕЙ.
1.1. Биология нитчатого бактериофага
1.2. Типы векторных систем на основе бактсриофагов.
1.3. Комбинаторные фаговые библиотеки пептидов
1.4. Комбинаторные фаговые библиотеки антител.
1.5. Фактор некроза опухоли альфа.
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Конструирование комбинаторной неиммунной библиотеки
. одноцепочечных антител человека.
3.2. Характеризация сконструированной библиотеки
одноцепочечных антител человека.
3.3. Получение одноцепочечных антител человека к ФНОа
в растворимой форме.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
БЛАГОДАРНОСТИ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Проведенные эксперименты подтвердили возможность отбора из сконструированной библиотеки антител против различных антигенов, включая цслыювириониый вирус осповакцины, коровый белок вируса гепатита В, образующий вирусоподобные частицы в результате самосборки продукции его в клетках . ФНОа человека. В результате проделанной работы впервые в России получены штаммы ii i, продуцирующие растворимые одноцепочечные антитела и 3 против ФНОа и оценена продуктивность этих штаммов. Показана специфичность взаимодействия полученных одноцепочечных антител с ФНОа человека и определены их константы аффинности. Определены аминокислотные последовательности полученных антител. На основе полученных антител в дальнейшем могут быть сконструированы полноразмерные антитела человека, специфично взаимодействующие с ФНОа. Глава 1. В середине х годов была разработана новая молекулярнобиологическая методология, которая совершила своеобразную революцию в области инженерии пептидов и белков фаговый дисплей. Эта методология основана на экспериментах Дж. Смита, впервые показавшего в середине х годов возможность экспрессии чужеродного белка на поверхности нитчатого бактериофага М. Он осуществил встройку гена, кодирующего фрагмент эндонуклеазы рестрикции I, в единую рамку трансляции с минорным белком оболочки рШ. I, Дж. Кау В. Сцепленность анализируемого полипептида и кодирующего его генетического материала в составе одной фаговой частицы обеспечивает возможность очень простого отбора вариантов и их анализа. Дж. Смитом был предложен термин фаговый дисплей i. В х годах МакКафферти с коллегами продемонстрировали модель эксперимента по использованию нитчатого бактериофага для создания комбинаторной фаговой библиотеки антител , . Кроме того, была разработана методика биопэмнимга т. Пармли и ДЖ. Смитом . ., . Благодаря разработке техники биопэннинга стало возможным отбирать бактериофаги с целевыми свойствами из клонотек представительностью до 9 п вариантов. Селекция множества фрагментов антител с использованием технологий обогащения библиотек, таких как фаговый дисплей i , , рибосомный дисплей , , или дрожжевой дисплей i . Основой для развития нового метода поверхностной экспрессии библиотек генов вариабельных доменов иммуноглобулинов послужил комбинаторный подход, который заключается в конструировании библиотек тяжелых и легких цепей, объединяющихся случайным образом и затем подвергающихся процессу аффинной селекции для получения индивидуальных клонов на интересующий нас антиген. Этот подход стал возможен благодаря двум достижениям. Вопервых, как было продемонстрировано в году, v фрагмент антитела способен связывать антиген , . фрагменты могут продуцироваться в правильной конформации и формировать антитело на поверхности нитчатого бактериофага . Первый эксперимент но созданию комбинаторной библиотеки фрагментов антител был описан в г. X и создавалась из фрагмснтов мыши. Представительность этой библиотеки составила 6 различных варнаков, а анализ индивидуальных клонов показал, что их аффинность находится в пределах 7М . Этот шаг был предпринят Пирсоном с созрудниками МА. I 1каппа библиотеки на основе фага X. Вместе с тем, при использовании фага X в качестве вектора для клонирования фрагмс1гтов антител, скрининг клонов был достаточно сложен, что ограничивало возможности использования библиотек. Поэтому были предприняты попытки экспонировать фрагменты антител на поверхности бактерий или нитчатых бактериофагов. Использование бактерий для конструирования комбинаторных библиотек антител столкнулось с рядом трудностей . . Картирование эпитопов моноклональных и поликлональных антител. Создание иммуногенов. Картирование сайтов связывания субстратов для протеаз и киназ. Направленная эволюция белков. Методология фагового дисплея и успешность се развития определяется биологическими особенностями нитчатых бактериофагов, инфицирующих ii i.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.188, запросов: 145