Рекомбинантная дуплекс-специфическая нуклеаза

Рекомбинантная дуплекс-специфическая нуклеаза

Автор: Анисимова, Вероника Евгеньевна

Шифр специальности: 03.00.03

Научная степень: Кандидатская

Год защиты: 2008

Место защиты: Москва

Количество страниц: 122 с. ил.

Артикул: 4131086

Автор: Анисимова, Вероника Евгеньевна

Стоимость: 250 руб.



В настоящее время известно множество типов нуклеаз от высокоспецифичных эндонуклеаз рестрикции, атакующих строго определенные последовательности ДНК, до ДНК, РНКнеспецифичных экзо эндо нуклеаз, гидролизующих не только нуклеиновые кислоты, но и нуклеозидтрифосфаты. Ферменты этой группы являются ключевыми участниками таких биологически важных процессов как репликация, репарация, рекомбинация в том числе транспозиция, регуляция экспрессии генов, защита от вирусов, аполтоз, а также пищеварение. Ученые, изучающие любой из перечисленных процессов, уделяют немало внимания различным нуклсазам. Но, помимо этого, изучение самих нуклеаз, их молекулярной организации, механизмов взаимодействия с субстратом, основ специфичности очень интересная научная работа. С другой стороны, именно использование нуклеаз произвело настоящую революцию в методах молекулярной биологии. Молекулярное клонирование, позволившее на много порядков увеличить наши знания о живой природе, основано на применении высоко специфичных нуклеаз эндонуклеаз рестрикции. Также на основе использования различных нуклеаз были созданы широко распространенные изучения ДНКбелковых взаимодействий, определения структуры нуклеиновых кислот и другие. Ранее в нашей лаборатории была выделена и охарактеризована нуклеаза из гепатопанкреаса камчатского краба, впоследствии названная дуплексспсцифической нуклеазой ДСП. Она гидролизует только двуцепочечную ДИК или цепь ДНК в ДНКРНК гибридах. Для осуществления гидролиза ей необходимо минимум идеально комплиментарных пар оснований. Кроме того, ДСП обладает высокой стабильностью. Эти свойства позволили разработать несколько молекулярнобиологических методик на основе применения ДСП. Также был клонирован ген этого фермента. Оказалось, что его аминокислотная последовательность гомологична ДНК, РНК неспецифическим эндонуклеазам ферментам, гидролизующим, как ДНК, так и РНК, как дву , гак и одноцепочечную. Поэтому изучение структурнофункциональной организации ДСП является очень интересной научной задачей. Данная работа посвящена изучению рекомбинантной ДСН. Мы разработали метод получения активного рекомбинантного фермента, который необходим для исследования структурнофункциональных связей в белке. Для аккуратного сравнения ДСН с другими ДНК, РНК неспецифическими эндонуклеазами мы клонировали несколько нуклеаз из представителей класса Ракообразных. Филогенетический анализ выявил две эволюционно различающихся группы нуклеаз ДСН подобные и i подобные классические. Множественное выравнивание аминокислотных последовательностей этих белков показало наличие существенных структурных различий представителей упомянутых групп. Мы создали ряд му тантных вариан тов ДСП, содержащих как точечные замены, так и лишенных определенных концевых участков. Анализ свойств этих мутантов показал, что дополнительные но сравнению с нуклеазой участки ДСН обеспечивают ее необычные свойства, в том числе субстратную специфичность. Исходя из этих результатов, мы выделили новое семейство ферментов дуплексспецифические нуклеазы. Кроме того, рекомбинантная ДСН была успешно применена в ранее разработанной методике нормализации библиотек полноразмерных кДНК, а термолабильный вариант ДСН был успешно использован для удаления примесей ДНК из проб перед синтезом кДНК. Недавно в нашей лаборатории была выделена и охарактеризована новая нуклеаза из гепатопанкреаса камчатского краба позже названная дуплексспецифической нуклеазой, или ДСН. ДНК, РНК неспецифичных эндонуклеаз. Кроме того, на основе этого белка были разработаны новые молекулярнобиологические методики. Данный обзор посвящен дуплексспецифической нуклсазс камчатского краба ДСН и ее структурным гомологам ДНК, РНК неспецифичным эндонуклеазам. Современная классификация учитывает следующие параметры нуклеаз Рис. Митохондриальные нукпеазы, похожие на куклеазу из i i . Данный обзор посвящен неспецифическим РНК, ДНК эндонуклеазам и относящейся к этому классу дуплексспецифической пуклеазе камчатского краба. Рис. I Схема классификации нуклеаз по типу гидролизуемого субстрата. Согласно структурной классификации ДНК, РНК неспецифичные эндонуклеазы входят в большое суперсемейство р3а Ме нуклеаз.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.347, запросов: 145