Топоизомераза II и ее участие в незаконной рекомбинации : Эксперименты в модельной системе

Топоизомераза II и ее участие в незаконной рекомбинации : Эксперименты в модельной системе

Автор: Иванова, Ольга Николаевна

Шифр специальности: 03.00.03

Научная степень: Кандидатская

Год защиты: 2006

Место защиты: Москва

Количество страниц: 109 с. ил.

Артикул: 2937076

Автор: Иванова, Ольга Николаевна

Стоимость: 250 руб.

Содержание
Содержание
Список сокращений и терминов, использованных в работе
Введение
Обзор литературы
Точки разрывов при хромосомных перестройках
Хромосомные перестройки и ассоциированные с ними заболевания.
Группы химерных белков.
Кластеры точек разрыва.
Механизм рекомбинации
Структура белка и кажущаяся кластеризация точек разрыва
Роль ядерной архитектуры в образовании хромосомных перестроек
Структура и механизм действия топоизомераз II типа.
Основные свойства топоизомераз II
Структура белка
Механизм действия
Клеточная роль топоизомеразы II
Репликация.
Транскрипция.
Конденсация хромосом.
Рекомбинация.
ч..
Ингибирование топоизмеразы II
Постановка задачи и методические подходы.
Материалы и методы.
Приготовление и трансформация компетентных клеток . i.
Трансформация бактериальных клеток
Манипуляции с плазмидной ДНК
Полимеразная цепная реакция.
Выделение бакмидной ДНК из бактерий.
Положительная селекция клонов, содержащих I.
Декатенация плазмид.
Инду кция незаконной рекомбинации i vi
Трансфекция.
Выделение плазмидной ДНК из эукариотических клеток
Радиоактивное мечение олигонуклеотидов и гибридизация их с ДНК
Обработка ядер микрококковой нуклсазой и Саузернгибридизация.
Конструирование плазмид.
Результаты исследования и их обсуждение.
Создание модельной системы для количественной оценки частоты незаконной
i4
рекомбинации
Проверка функционирования гена 1
Декатенирование модельных конструктов.
Количественная оценка частоты незаконной рекомбинации.
Индукция незаконной рекомбинации i vi.
Эксперименты i viv
Эписомная репликация модельных плазмид в эукариотических клетках
Индукция незаконной рекомбинации i viv и влияние ингибиторов
Предположительная модель действия топоизомеразы II
Картирование участков разрыва в рекомбинантных плазмидах
Нуклсосомный статус трансфецироваиных модельных плазмид
Выводы .
Список литературы


Хромосомные перестройки и ассоциированные с ними заболевания. Группы химерных белков. Кластеры точек разрыва. Структура и механизм действия топоизомераз II типа. Репликация. Транскрипция. Конденсация хромосом. Рекомбинация. Постановка задачи и методические подходы. Материалы и методы. Приготовление и трансформация компетентных клеток . Полимеразная цепная реакция. Выделение бакмидной ДНК из бактерий. Положительная селекция клонов, содержащих I. Декатенация плазмид. Трансфекция. Обработка ядер микрококковой нуклсазой и Саузернгибридизация. Конструирование плазмид. Результаты исследования и их обсуждение. Декатенирование модельных конструктов. Количественная оценка частоты незаконной рекомбинации. Индукция незаконной рекомбинации i vi. Выводы . Благодарности. Список сокращений и терминов, использованных в работе. За последние годы появилось много данных, свидетельствующих о том, что противоопухолевая химиотерапия с использованием агентов, специфичных в отношении топоизомеразы II, очень часто вызывает вторичные лейкозы, для которых характерны определенные хромосомные перестройки 12. Топоизомераза II относится к семейству ДИКтопоизомераз ферментоврегуляторов топологического состояния ДНК 34. Этот фермент способен снимать топологические напряжения в ковалентнозамкнутых молекулах ДНК или в петельных доменах в случае эукариотических геномов и разделять катенаны путем внесения, временных двуцепочечных разрывов в ДНК. В определенных условиях в частности, при подавлении лигирующей активности фермента такие разрывы стабилизируются, что может привести к хромосомным аберрациям 5. Клетка обладает двумя основными механизмами репарации двуцепочечных разрывов один из них основан на гомологичной рекомбинации , ii, , другой на негомологичном соединении концов ДНК поп ii, . Для гомологичной рекомбинации необходимы протяженные области гомологии между репарируемыми участками, при этом возможно полное восстановление последовательности ДНК. Белковый комплекс, осуществляющий , соединяет тупые или липкие концы ДНК даже при полном отсутствии гомологии. Считается, что этот комплекс осуществляет процессинг концов двуцепочечных разрывов, который может вести к делеции, дупликации или инверсии фрагментов коротких ДНК 5. Топоизомераза II, повидимому, способна осуществлять негомологичную или незаконную рекомбинацию i vi 67. В настоящее время рассматривается два механизма возникновения рекомбинаций при участии ДНКтопоизомеразы II. В соответствии с первой моделью модель субъединичного обмена топоизомераза II и вносит двуцепочечные разрывы в ДНК, и репарирует их за счет своей лигазной активности 89. При этом не исключн обмен субъединиц между молекулами топоизомеразы II, связанными с разными участками хромосомы хромосом. Это приведт к незаконной рекомбинации, проявлением которой могут быть те или иные хромосомные перестройки. Согласно альтернативной, индукционной модели, топоизомераза II только вносит двуцепочечные разрывы, а их репарация происходит за счет других клеточных систем . Л . II доксорубицин, амсакрии, тенипозид, этопозид блокируют ее религирующую активность и оставляют ДНК в состоянии двуцепочечного разрыва, скрытого молекулой фермента . Такие разрывы, повидимому, рспарируются путем . Достоверно показано, что этот путь репарации часто приводит к неправильному соединению концов ДНК особенно в тех случаях, когда разрывов много. Таким образом, топоизомераза II представляет большой интерес и с теоретической, и с практической точки зрения. Механизм действия и клеточные функции этого фермента до конца неясны. Кроме того, топоизомераза II представляет большой интерес как мишень противоопухолевых лекарств. Все это определяет большую важность дальнейшего изучения топоизомеразы II.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.232, запросов: 145