Прионные и неприонные амилоиды: изучение в дрожжевой модели

Прионные и неприонные амилоиды: изучение в дрожжевой модели

Автор: Кушниров, Виталий Владимирович

Автор: Кушниров, Виталий Владимирович

Шифр специальности: 03.00.03

Научная степень: Докторская

Год защиты: 2008

Место защиты: Москва

Количество страниц: 152 с. ил.

Артикул: 4116373

Стоимость: 250 руб.

ВВЕДЕНИЕ.
ГЛАВА 1. СВОЙСТВА АМИЛОИДОВ, ИХ РАСПРОСТРАНЕННОСТЬ И РОЛЬ В ПРИРОДЕ Обзор литературы.
1.1. Общие свойства амилоидных полимеров.
1.2. Роль амилоидных полимеров в природе
1.2.1. Амилоидозы.
1.2.2. Инфекционные амилоиды прионы.
1.2.3. Непатогенные амилоиды млекопитающих
1.2.4. Структурные и внеклеточные амилоиды
1.2.5. Прионы низших эукариот генетические элементы с необычными свойствами.
1.2.5.1. Нонсенссупрессорный детерминант .
1.2.5.2. Детерминант 3 регуляция метаболизма азота
1.2.5.3. Детерминант помощь возникновению других прионов
1.2.5.4. Белки дрожжей, способные полимеризоваться
1.2.5.5. транскрипционный фактор i
1.2.5.6. Детерминанты Р и i
1.2.5.7. Детерминант гриба Р. i
1.3. Заключение.
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1. Генетические методы
2.1.1 Штаммы дрожжей
2.1.2 Штаммы . i
2.1.3. Культивирование микроорганизмов
2.1.4. Трансформация микроорганизмов
2.1.5. Цитодукция.
2.2. Конструирование плазмид
2.2.1. Генноинженерные манипуляции, ПЦР и секвенирование.
2.2.2. Получение плазмид
2.2.3. Конструирование плазмид, кодирующих гибридные белки с полиглутаминовыми и полиглутаминтирозиновыми фрагментами
2.2.4. Создание геномной библиотеки . vii.
2.3. Флуоресцентная микроскопия.
2.4. Биохимические методы.
2.4.1. Приготовление дрожжевых лизатов
2.4.2. Фракционирование лизатов.
2.4.3. Электрофоретический анализ белков, иммуноблоттинг
2.4.4. Расчет массы прионных агрегатов и полимеров
2.4.5. Прионное превращение белка i vi
2.4.6. Выделение амилоидных полимеров белка и анализ присутствия в их составе белка 1.
2.4.7. Измерение активности галактозидазы в клетках дрожжей и определение эффективности сквозного прочтения нонсенскодонов
2.4.8. Продукция в . i и аффинная очистка белков, содержащих 6i или тэги.
ГЛАВА 3. ПОДТВЕРЖДЕНИЕ ПРИОННОЙ ГИПОТЕЗЫ ДЛЯ
3.1. Фактор история вопроса
3.2. Генетические данные домен необходим для поддержания .
3.3. в клетках агрегирован и способен присоединять мономеры .
3.4. Прионная форма отличается повышенной устойчивостью к протеазам
3.5. Супрессорный фенотип Ю1еток является следствием уменьшения количества растворимого .
3.6. агрегирует посредством своего концевого домена и вовлекает в агрегаты .
3.7. Воспроизведение прионного превращения i vi.
ГЛАВА 4. СОЗДАНИЕ И СВОЙСТВА ХИМЕРНОГО
ГЛАВА 5. БЕЛКИ, ПРОТИВОДЕЙСТВУЮЩИЕ ПОДДЕРЖАНИЮ ПРИОНОВ ДРОЖЖЕЙ.
5.1. Шапероны семейств II и .
5.2. Систематический поиск белков, препятствующих поддержанию .
5.3. Механизмы антиприонных эффектов
5.4. Изменения в дозе генов , 1 и 0 повышают тепловую устойчивость клеток.
5.5. связывается с промоторным элементом .
ГЛАВА 6. МОДЕЛЬ РЕПЛИКАЦИИ ДРОЖЖЕВЫХ ПРИОНОВ РОЛЬ
6.1. Две модели прионного превращения РгР.
6.2. Модели прионного превращения анализ.
6.3. Модель репликации дрожжевых прионов ключевая роль
ГЛАВА 7. РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ ВЫДЕЛЕНИЯ И АНАЛИЗА ПРИОНОВ
7.1. Подбор реагентов и условий для очистки прионных частиц.
7.2. Электрофоретический анализ размера прионных частиц в ДСНагарозном геле разработка метода.
7.3. Другие методы.
ГЛАВА 8. ХАРАКТЕРИСТИКА ПРИОННЫХ ПОЛИМЕРОВ И АГРЕГАТОВ
8.1. Структура прионных агрегатов
8.2. Варианты 7, и V отличаются по размеру полимеров
8.3. Присутствие ГуГХ блокирует фрагментацию прионных полимеров
8.4. Уменьшение уровня шаперона приводит к увеличению размера прионных полимеров.
8.5. Увеличение уровня уменьшает размер прионных агрегатов при увеличении или сохранении размера прионных полимеров.
ГЛАВА 9. НЕПРИОИНЫЕ АМИЛОИДЫ БЕЛКА
9.1 Полимеры , возникающие при его сверхпродукции
9.2. Полимеры содержат белок .
9.3. Амилоидная полимеризация является причиной нонсенс супрессии
9.4. Нестандартные варианты .
9.5. Сравнение прионных и амилоидных полимеров Обсуждение.
ГЛАВА . СОЗДАНИЕ ПОЛИМЕРОВ НА ОСНОВЕ ПОЛИГЛУТАМИПА ЧАСТОТА ФРАГМЕНТАЦИИ ОПРЕДЕЛЯЕТСЯ ГИДРОФОБНЫМИ АМИНОКИСЛОТНЫМИ ОСТАТКАМИ.
.1. Создание плазмид, кодирующих полиглутаминовыс белки.
.2. Полиглутаминовыс белки способны полимеризоваться i viv
.3. Влияние I на появление и поддержание полимеров.
.4. Влияние шаперона на поддержание полимеров
.5. Прионные свойства полиО белков
.6. Свойства полимеров на основе полиглутамина Обсуждение.
.6.1. Остатки тирозина улучшают фрагментацию полимеров
.6.2. Полимеры полиС фрагментируются и могут быть прионами.
.6.3. Фрагментация полимеров в отсутствие
.6.4. Значимость результатов для понимания свойств полиглутаминовых болезней.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.
БЛАГОДАРНОСТИ.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ГуГХ гидрохлорид гуанидина ДСН додецил сульфат натрия
ДСНААГЭ элеюрофорез в полиакриламидном геле с ДСН
ДТТ дитиотреитол
кДа кил о Дальтон
ПААГ полиакриламидный гель
ЭДТА этилен диамин тетраацетат
зеленый флуоресцирующий белок i
фосфатный солевой буфер i
фенилметилсульфонил фторид, i, ингабитор протеаз
полиО полиглутаминовые белки
полирУ полиглутаминовые белки, содержащие остатки тирозина 4
ТАЕ буфер ТрисацетатЭДТА i
Триссолевой буфер i i
ВВЕДЕНИЕ


Гайдушек с коллегами показали, что куру, ГШШ и БКЯ инфекционны для обезьян . Одновременно было обнаружено, что агент, вызывающий скрейпи, необычайно устойчив к различного рода обработкам, таким, как высокая температура или фиксация формальдегидом, убивающим большинство известных видов бактерий и вирусов i, , а также к облучению ультрафиолетом, причем в гораздо большей степени, чем ДНК или РНКвирусы . Это позволило предположить, что агент скрейпи не содержит нуклеиновой кислоты . Математик Д. Гриффит предложил несколько гипотез распространения и наследования этих заболеваний, в том числе и будущую прионную гипотезу . Позднее очистка инфекционного материала показала, что его основу составляет белок массой кДа. Этот агент был назван приоиом анаграмма из слов i ii i, а белок i i i, . Идентификация гена Ргпр . Обнаружение идентичности генов Ргпр и i . БКЯ имели мутации в гене Ргпр . РгР основа патогенеза этих заболеваний. В году С. Прузинер сформулировал прионную концепцию, состоящую в том, что прионная форма белка является патогенным агентом и стимулирует конформационный переход нормальной формы РгР С, в с , i, что и определяет его инфекционность i, i . Спорадические формы прионных заболеваний обусловлены спонтанным переходом РгРс в , приобретенные формы вызываются попаданием в организм извне, наследственные формы определяются мутациями в гене Ргпр. К настоящему времени получены убедительные данные, подтверждающие прионные свойства белка . В частности, было показано, что трансгенные мыши, гомозиготные по делении гена Ргпр, не развивают скрейпи при введении им гомогеиата мозга зараженных мышей . Окончательным доказательством прионных свойств явилось то, что инъекция фибрилл мышиного РгР, выделенного из . Интересным и важным свойством приона является существование его штаммов, отличающихся по инкубационному периоду, симптомам болезни и распределению вакуолярных повреждений мозга . Эти отличия наблюдаются на генетически однородном материале и воспроизводятся у вновь инфицированных животных . Прогеазоустойчивые ядра, характерные для разных штаммов , несколько различаются по своим размерам, что указывает на различия в структуре , как причину штаммовой вариации , , . Все инфекционные амилоидозы прионные болезни человека и животных связаны с полимеризацией лишь одного белка РгР. Встречаемость этих болезней невелика, приблизительно 1 случай на миллион человек в год. Тем не менее, прионы важны как для практической медицины, так и для фундаментальной биологии. Опасность передачи прионной инфекции от больных животных к человеку через потребление мяса нанесла животноводству многомиллиардный урон, особенно в связи с эпизоотией губчатой энцефалопатии коров в Великобритании в х гг. В биологии прионы стали прецедентом уникального инфекционного агента, не содержащего генетической программы в виде нуклеиновой кислоты. Впоследствии приоиоподобные явления были обнаружены у дрожжей и грибов Раздел 1. У этих организмов, однако, они проявлялись не как инфекционная болезнь, а как наследуемые фенотипические признаки с необычными генетическими свойствами. Подобно амилоидами, прионы обладают способностью к автокаталитичсскому структурному превращению. Инфекционная форма приоиного белка млекопитающих , взаимодействуя с нормальной клеточной формой белка РгРс, превращает ее в подобие себя. Подобная реакция является необходимым, но не достаточным условием для инфекционности амилоида, поскольку большинство амилоидов неинфекционны. Различие в инфекционности имеет несколько причин. Одна из причин очевидна некоторые амилоиды например, полимеры синуклеина расположены внутри клеток и поэтому не могут распространяться по организму. Некоторые особенности , а именно его крайне высокая протеазоустойчивость и ассоциация с Влимфоцитами i . Однако несиецифические причины неинфекционности амилоидов в литературе проанализированы не были. В данной работе Раздел 9. Непатогенные амилоиды . Амилоидные полимеры принимают участие в синтезе пигмента меланина, защищающего кожу от воздействия ультрафиолетовых лучей.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.183, запросов: 145