Структурно-функциональная организация регуляторных районов и механизмы транскрипции генов интерлейкина-5 человека и мыши

Структурно-функциональная организация регуляторных районов и механизмы транскрипции генов интерлейкина-5 человека и мыши

Автор: Мордвинов, Вячеслав Алексеевич

Шифр специальности: 03.00.03

Научная степень: Докторская

Год защиты: 2008

Место защиты: Новосибирск

Количество страниц: 296 с. ил.

Артикул: 4402667

Автор: Мордвинов, Вячеслав Алексеевич

Стоимость: 250 руб.

Введение
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ .
1Л. Общие представления о цнтокинах .
1.2. Общие представления о механизмах регуляции транскрипции генов
эукариот.
1.2.1. Коровий промотор .
1.2.2. Про.моторныЙ и отдаленные регуляторные районы
1.2.3. Белки, контролирующие транскрипцию .
1.2.4. Активация факторов транскрипции
1.3. Биологические свойства ИЛ5
1.3.1. Активация экспрессии гена ИЛ5 .
1.3.2. Структура гена ИЛ5 и регуляция его экспрессии .
1.4. Влияние глюкокортикондов на эозинофилию и экспрессию гена ИЛ5 .
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы
2.1.1. Реагенты .
2.1.2. Этическая комиссия .
2.1.3. Перевиваемые и первичные культуры клеток, их культивирование
и стимуляция бактериальные штаммы
2.1.4. Гснноинжснсрныс конструкции, использованные в экспериментах
по футпринтннгу и в репортерном анализе .
2.2. Методы .
2.2.1. Приготовление элекгрокомпстснтных клеток .i и их трансформация .
2.2.2. Очистка ДНК и РНК, синтез кДНК, гидролиз с использованием эндонуклез рестрикции и лигирование ДНК, электрофорез и выделение фрагментов ДНК из агарозного геля, направленный мутагенез и ссквенирование ДНК
2.2.3. Получение фрагментов ДНК с использованием полимеразной
цепной реакции ПЦР и ПЦР с детекцией в реальном времени
2.2.4. Трансфекция клеточных культур, определение активности люциферазы и измерение содержания ИЛ5 человека в культуральной среде .
.5. Футаринишг, методы задержки ДНКзондов в геле и вестернблот
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Выбор перевиваемой клеточной линии для исследования структурнофункциональной организации промотора и механизмов регуляции экспрессии гена ИЛ5 человека .
3.1.1. Поиск перевиваемых Тклеточных линий человеческого происхождения, индуцибельно экспрессирующих гены ИЛ5 и ИЛ4
3.1.2. Продукция ИЛ5 клетками линии 7
3.1.3. Влияние дексаметазона на экспрессию гена ИЛ5 в клетках
7 и первичных культурах Тлнмфоцнтов .
3.1.4. Трансфекция клеток И 7 .
3.1.5. Заключение .
3.2. Новые регуляторные элементы промотора гена ИЛ5 человека .
3.2.1. Фугпринтинг проксимальной облает промотора .
3.2.2. Оценка функциональной активности белок связывающих
районов проксимальной области промотора
3.2.3. Определение границ Р и анализ его активности
в первичных лимфопитах человека
3.2.4. Идентификация ядерных белков, взаимодействующих с РЭ1
3.2.5. Определение белок связывающего мотива РЭ1
3.2.6. Фугпринтинг дистальной области промотора .
3.2.7. Определение белок связывающих мотивов РС8
3.2.8. Оценка функциональной активности РС8 .
3.2.9. Идентификация ядерных белков, образующие комплексы с РЭ2 .
3.2 Идентификация ядерных белков, взаимодействующих
с последовательностями РС6 и РС7
3.2 Заключение
3.3. Роль фактора транскрипции 3 в регуляции активности промоторов
генов ИЛ5 и ИЛ4 человека
3.3.1. Функции АТА3связывающих элементов в регуляции
активности промотора тона ИЛ5 человека .
3.3.1.1. Идентификация белков, взаимодействующих
с проксимальными элементами
3.3.1.2. Функциональная активность элементов , расположенных в проксимальной и дистазыюй
областях промотора гена ИЛ5 человека .
3.3.2. Функции 3связывающих элементов в регуляции
активности промотора гена ИЛ4 человека .
3.3.2.1. Идентификация белков, взаимодействующих
с элементами гена ИЛ4 человека .
3.3.2.2. Функциональная активность АТ А3 связывающих элементов промотора гена ИЛ4 человека
3.3.3. Заключение
3.4. Идентификация белков, регулирующих активность
консервативного лимфокинового элемента 0 и мотивов
промотора гена ИЛ5 человека .
3.4.1. Факторы транскрипции, регулирующие активность
гена ИЛ5 человека .
3.4.1.1. Идентификация белков, взаимодействующих с
гена ИЛ5 человека .
3.4.1.2. Верификация белок связывающих мотивов I
гена ИЛ5 человека .
3.4.1.3. Оценка функциональной значимости бслоксвяэывающих мотивов 0 ИЛ5 человека
3.4.1.4. Роль транскрипционных факторов 1 и
в активации С1.Е0ИЛ5 человека .
3.4.2. Участие факторов транскрипции в регуляции активности промотора гена ИЛ5 человека .
3.4.2.1. Идентификация белков, взаимодействующих с элементом ИЛ5Р гена ИЛ5 человека .
3.4.2.2. Оценка функциональной значимости белоксвязывающего мотива , расположенного в районе позиции 0 промотора гена ИЛ5 человека
З.4.2.З. Идентификация представителей семейства факторов транскрипции МАТ. взаимодействующих с АТ
сайтами регуляторных элементов гена ИЛ5 человека
3.4.3. Заключение .
3.5. Регуляторные элементы гена ИЛ5 мыши .
3.5.1. Новые регуляторные элементы промотора гена ИЛ5 мыши .
3.5.1 Л. Функциональная активность элементов мРи мР
3.5.1.2. Белки, взаимодействующие с элементами мРЭ1 и мР .
3.5.1.3. Идентификация белоксвязываюших сайтов элементов
мР имРЭ2
3.5.2. Новый регуляторный элемент 3 нетранелнруемой области
гена ИЛ5 мыши .
3.5.2.1. Футпринтинг 3нстранслируемой области
гена ИЛ5 мыши .
3.5.2.2. Функциональная активность мЗПЭ .
3.5.2.3 Идентификация ядерных белков, взаимодействующих
с мЗПЗ
3.5.3. Факторы транскрипции, регулирующие активность . ИЛ5 мыши .
3.5.3.1. Идентификация ядерных белков, взаимодействующих
с СЬВО ИЛ5 мыши
3.5.3.2. Роль факторов Ос1 и в регуляции транскрипции
гена ИЛ5 мыши
3.5.4. Заключение .
3.6. Механизмы регуляции транскрипции гена ИЛ5 человека .
3.6.1. Механизм инициации транскрипции гена ИЛ5 человека .
3.6.1.1. Влияние I1X на синтез II ИЛ5 в клетках 7 .
3.6.1.2. Влияние условий клеточной стимуляции на взаимодействие ядерных белков с 0 ИЛ5 человека .
3.6.1.3. Синтез белков, взаимодействующих с 0 ИЛ5 человека
3.6.1.4. Роли субъединиц 0 ИЛ5 связывающего фактора транскрипции АР1, белков и 2, в регуляции экспрессии гена ИЛ5 человека .
3.6.2. Механизм подавления экспрессии гена ИЛ5 человека дексаметазоном
3.6.2.1. Влияние условий клеточной активации на эффект дексамстазона на экспрессию i сна ИЛ5 человека
3.6.2.2. Идентификация регуляторных элементов гена ИЛ5 человека, активность которых подавляется дексаметазоном
3.6.2.3. Влияние дексамстазона на формирование ДНКбслковых комплексов 0 ИЛ5 человека .
3.6.2.4. Эффект дексаметазона и на синтез мРНК
в клетках 7 .
3.6.2.5. Эффект белка 1 на активность промотора
гена ИЛ5 человека
3.6.2.6. Влияние II.7. на формирование С1.Е0бслковых комплексов .
3.6.3. Заключение .
ВЫВОДЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ


На клеточной мембране Тлимфоците в располагаются антигснспсцифнчныс рецепторы, которые распознают соответствующие антигены и прикрепляются к ним. Рецепторы состоят либо из а и рцепей, либо из у и 6 цепей, каждая из которых имеет константный на Сконце и вариабельный на конце участки. Гены, кодирующие каждую из цепей, достраиваются в процессе созревания Тлнмфоцитов из отдельных сегментов V от vi, вариабельный, от ivi, разнообразный только для Рценей, от ii, соединяющий и С от , константный ii, , . Таким образом, рецепторы каждого Тяимфоцита уникальны и способны связываться с определенными антигенами. Комбинация генных сегментов обеспечивает изменчивость рецепторов, необходимую для распознавания тысяч антигенов, с которыми сталкивается организм. У большинства Тлкмфоцитов в кровотоке и лимфоидных органах рецепторы состоят из а и рцеией аУР Тлимфоциты. Клеток с рецепторами из у и бценей у5 Тлимфоциты меньше, и встречаются они в основном в слизистых в частости, в кишечном эпителии . Большинство а Тлимфоцитов несут на себе либо молекулы 4. Другое название лимфоцитов 4 Тхелперы от англ. В зависимости от вырабатываемых цитокинов Тхелиеры разделяют на несколько типов I . ТхО синтезируют практически весь спектр Тклегочных цитокшюв и представляют собой клегкипрсдшествснники последующих типов. Тхелпсры типа 1 Тх1 в основном секретируют ИФН И ИЛ2 и стимулируют клеточный иммунитет и активность макрофагов. Они участвуют в реакциях гипсрчувствитсльности замедленного типа в частности, в образовании гранулем и в защите от внутриклеточных возбудителей. Тхелперы типа 2 Тх2 регулируют мморальний иммунитет и их маркерными цитокинами являются ИЛ4 и ИЛ5. Опт цитокины важны в патогенезе аллергических заболеваний. Так, ИЛ4 необходим для синтеза I. ИЛ5 запускает пролиферацию и дифференцировку эозинофилов , i, , . По какому пути дифференцировки пойдет незрелый Тхелпер, зависит от множества факторов, в том числе от цитокинового окружения, природы антигена и его количества. Цитокины, в свою очередь, также разделяют на две полярные группы Тх1 и Тх2, в зависимости от типа клеток, продуцирующих эта белки . Следует отмстить, что за исключением уже упоминавшихся маркеров ИФНу для Тх1 цитокшюв, а ИЛ4 и ИЛ5 для Тх2, принадлежность конкретных факторов к той или иной рутшс постоянно дискутируется в литературе i, . Ото, вероятно, связано со значительным разнообразием и неполной изученностью индивидуальных свойств отдельных регуляторных факторов Тклеточного происхождения. Разнообразие индивидуальных свойств цитогинов не мешает, однако, выделить ряд общих характеристик этих молекул. Как уже отмечалось, цитокины представляют собой группу регуляторных белковых факторов. Чаще всего это небольшие гликозилированные белки с молекулярной массой до кДа. В обеих формах цнтокины обладают биологической активностью. Важно отметить, что экспрессия генов цитокинов является индуиибсльным процессом. При физиологическом состоянии, принятом за норму, спектр детектируемых мРНК цитокинов узок и уровень экспрессии соответствующих генов невысок. Например, в печени здоровых взрослых самцов мышей 6 удатся обнаружить мРНК лишь ИЛ, ИЛ1а и ИЛ1 р. Однако после стимуляции печеночных макрофагов бактериальным липополисахаридом эти клетки активно синтезируют ФНОа, который в свою очередь индуцирует продукцию таких цитокинов как ИЛ6, ИЛ, ИФНу и значительно усиливает экспрессию ИЛ1 i, . Действительно. Иными словами, большинство цитокинов не синтезируется клетками вне воспалительной реакции и иммунного ответа. Экспрессия генов цитокинов начинается в ответ на проникновение в организм патогенов, аптигешюе раздражение или повреждение тканей. Одними из наиболее сильных индукторов синтеза цитокинов служат компоненты клеточных сгенок бактерий лииополмсахариды, пептидогликаны и мурачилдипептиды. Цитоюшы синтезируются в ответ на стимуляцию через короткий промежуток времени. Синтез прекращается в результате действия отрицательных обратных связей, опосредуемых простагландинами, кортикостероидными гормонами и другими факторами, а также за счет разнообразных механизмов саморегуляции.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.202, запросов: 145