Молекулярные колонии

Молекулярные колонии

Автор: Четверина, Елена Владимировна

Шифр специальности: 03.00.03

Научная степень: Докторская

Год защиты: 2007

Место защиты: Пущино

Количество страниц: 329 с. ил.

Артикул: 3379258

Автор: Четверина, Елена Владимировна

Стоимость: 250 руб.



Более того, высокий температурный оптимум этих полимераз С позволил значительно повысить специфичность реакции за счет диссоциации неверно гибридизованных праймеров. Аналога ПЦР нет в природе, это полностью искусственный процесс. Для его проведения необходимо специальное оборудование, позволяющее осуществлять температурные циклы. Более того, для размножения определенного фрагмента ДНК необходимо знать последовательность, по крайней мере, его концевых участков и необходимо синтезировать олигонуклеотиды, комплементарные этим участкам. Однако эти недостатки оборачиваются преимуществами, так как позволяют полностью контролировать процесс и селективно размножать заданную нуклеотидную последовательность даже в сложных смесях нуклеиновых кислот, что особенно привлекательно для диагностики. С помощью ПЦР можно размножить и РНК, если сначала перевести ее в форму кДНК. С этой целью можно использовать обратные транскриптазы ретровирусов или ДНКполимеразу, способную копировать РНК в присутствии ионов 2 . ЧЧЧЧЧ
. Рис. Самополдсрживаемая репликация нуклеотидных последовательностей ЗБН. Рисунок из статьи Сиа1еШ г а1. Здесь проблему7 образования однопспочечных матриц решают путем не расплавления дуплекса, а транскрипции, продуктом которой является одноцепочечная РНК, что позволяет осуществлять реакцию при постоянной температуре около С. Стартовой матрицей может служить как фрагмент двухцепочечной ДНК, несущий хотя бы на одном конце промотор какойлибо РНКполимеразы, так и одноцепочечная РНК. ДНКзависимая РНКполимераза например, РНКполимераза фага Т7 использует двухцепочечную ДНК для синтеза многочисленных одноцепочечных РНКтранскриптов. V синтезирует двухцепочечные ДНКкопии РНКтранскриптов, используя праймеры, хотя бы в один из которых вводят промотор РНКполимеразы для восстановления этой последовательности на конце кДНК. РНКаза Н в определенных условиях достаточно одноименной активности самой обратной транскриитазы . РНКматрицу, вовлеченную в РНКДНКтетеродуплекс после синтеза первой цепи кДНК, тем самым позволяя синтезироваться второй цепи кДНК. Продуктом ЗБЯреакции является смесь молекул двухцепочечных ДНК и одноцепочечных РНК. I роутегк i . Рис. Амплификация с вытеснением цепи . Рисунок из статьи . Одновременный разрыв у 3конца комплементарной цепи блокирован тиофосфатной группой, вводимой благодаря использованию при синтезе ДНК атиофосфатного производного соответствующего . Возникший в результате одноцепочечного разрыва Зконец удлиняется ДНКполимеразой, лишенной 5Зэкзонуклеазной активности например, фрагментом Кленова это приводит к вытеснению лежащей впереди цепи ДНК. Вытесненная одно цепочечная ДНК способна вступать в следующие циклы размножения, так как у нее отсутствует лишь 5концевая последовательность, вводимая праймером. Лигазная цепная реакция , от i i i является аналогом ПЦР рис. Рис. Лигазная цепная реакция . Рисунок из статьи Вагапу . После расплавления полученного дуплекса реакция повторяется, причем если используют две взаимокомплементарные пары олигонуклеотидов, то в последующих циклах матрицами для лигирования служат и ранее сшитые пары. Как и в случае ПЦР, процесс может быть многократно повторен при использовании ДНКлигаз из термофильных организмов, приводя к экспоненциальному размножению лигированных фрагментов . Существенным недостатком является возможность безматричного лигирования олигонуклеотидов. X . Олигонуклеотид, который будет служить в качестве матрицы, фосфорилируют и отжигают на направляющем олигонуклеотиде так, чтобы 5 и 3концы матричного олигонуклеотида оказались рядом. Последующее лигирование приводит к циркуляризации матричного олигонуклеотида. ДНКполимераза, используя направляющий олигонуклеотид в качестве праймера, синтезирует по кругу цепь, комплементарную циркуляризованному олигонуклеотиду, вытесняя при этом предыдущую копию, в результате чего образуется длинная цепь, содержащая повторы, представляющие собой комплементарные копии матричного олигонуклеотида. Рис. Размножение по принципу катящегося кольца i X .

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.219, запросов: 145