ГТФ-связывающий белковый комплекс наружных сегментов палочек сетчатки лягушки

ГТФ-связывающий белковый комплекс наружных сегментов палочек сетчатки лягушки

Автор: Тищенков, Владимир Григорьевич

Шифр специальности: 03.00.02

Научная степень: Кандидатская

Год защиты: 1983

Место защиты: Москва

Количество страниц: 201 c. ил

Артикул: 3430288

Автор: Тищенков, Владимир Григорьевич

Стоимость: 250 руб.

ВВЕДЕНИЕ
ОБЗОР ЛИТЕРА1УШ
ГЛАВА I. СТРОЕНИЕ И ФУНКЦИОНИРОВАНИЕ НАРУЖНОГО СЕГМЕНТА
ПАЛОЧКИ СЕТЧАТКИ ПОЗВОНОЧНОГО.
1. Морфология фоторецепторной клетки. Электрический ответ фоторецептора
2. Медиаторный механизм передачи сигнала в НСП.
Требования к медиатору
3. Попытки экспериментального подтверждения кальциймедиаторной гипотезы Хагинса.
4. Циклические нуклеотиды могут являться медиатором
в передаче возбуждения в фоторецепторе.
ГЛАВА 2. ФУНКЦИИ ГТФСВЯЗШАЩИХ БЕЛКОВ
1. белки в механизмах гормональной рецепции.
2. Участие ГТФсвязывающих белков в процессе элонгации трансляции прокариот.
3. Участие ГТФсвязывающего белка в механизме активации светозависимой фЦЭ в НСП
4. Постановка задачи исследования.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
1. Материалы6
2. Получение препаратов наружных сегментов палочек сетчатки лягушки.
3. Получение мембран дисков наружных сегментов ВДНС
4. Получение препарата,обогащенного водорастворимыми
белками НСП
5. Центрифугирование НСП в градиенте плотности сахарозы.
6. Очистка комплекса белков НСП, обладающих светозависимой сорбцией на фоторецепторные мембраны.
7. Термоденатурация препаратов и супернатанта НСП.
8. Электрофоретическое разделение белков в полиакриламидном геле БББ электрофорез .
9. Электрофорез белков в неденатурирующих условиях
. Разделение водорастворимых белков методом гельфильтрации на Сефакриле Б0
. Изоэлектрофокусирование белков в амфолинах
. Связывание гуаниловых нуклеотидов с препаратами НСП
. Измерение Са связывающей способности фракций, полученных после гельфильтрации белков супернатанта НСП.
. Тонкослойная хроматография нуклеотидов
. Приготовление растворов с заданной концентрацией
свободного Са .
. Фосфорилирование ГДФ, связанного с нуклеотид
связывающими центрами НСП
. Определение аденилаткиназной активности.
. Измерение гуанозиндифосфактиназной КФ 2.7.4.6 активности
. Методы измерения нуклеозидтрифосфатазных активностей.
. Определение концентрации белка
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.
ГЛАВА I. ГТФсвязывающий белковый комплекс НСП сетчатки
лягушки.
1. Зависимость связывания НГВДФ препаратами НСП
от количества обесцвеченного родопсина
2. БОБ электрофорез в ПААГе белков супернатанта НСП
3. Изоэлектрофокусирование белков супернатанта НСП
4. Комплекс Шона из НСП сетчатки лягушки
5. Гельфильтрация белков супернатанта и идентификация ГТФсвязывающего белка
6. Термоинактивация ГТФсвязывающей способности супернатанта НСП
ГЛАВА 2. Обменный механизм формирования активного состояния
трансдуцина НСП сетчатки лягушки
1. Кинетические характеристики процессов связывания АГВДФ и СГДФ препаратами НСП
2. Характеристика процессов диссоциации комплексов гуаниловых нуклеотидов с препаратами НСП
3. Оценки констант диссоциации гуаниловых нуклеотидов
с нуклеотидсвязывающими центрами НСП.
ГЛАВА 3. Фосфорилирование ГДФ, связанного препаратами НСП сетчатки лягушки, как возможный механизм формирования активного состояния трансдуцина.
1. Фосфорилирование связанного ГДФ
2. Влияние АТФ на связывание ГДФ препаратами НСП
ГЛАВА 4. Фосфотрансферазные активности, катализируемые
трансдуцином НСП сетчатки лягушки.
1. Аденилаткиназная активность препаратов НСП.
2. Аденилаткиназная активность водорастворимой
фракции НСП
3. ГДФкиназная активность различных типов препаратов
НСП и водорастворимой фракции НСП
4. Термоинактивация АК, ГДФкиназной активностей и ЩЦФсвязыващей способности препаратов супернатанта НСП.
5. Светозависимость ГДФкиназной активности.
ГЛАВА 5. Нуклеозвдтрифосфатазные активности препаратов НСП.
1. Гидролиз ГТФ при низких менее I мкМ концентрациях
2. Сопряженные ферментативные реакции в НСП
3. Нуклеозидтрифосфатазные активности препаратов НСП
4. Распределение ГТФазной активности во фракциях, полученных при гельфильтрации белков супернатанта
5. Термоинактивация НТФазных активностей.
ГЛАВА 6. Модуляция ферментативных активностей трансдуцина
ионами кальция. Возможная функциональная роль субъединицы трансдуцина.
1. Регуляция ионами кальция гидролиза , связанного ГТФ
2. Зависимость ГДФкиназной активности от концентрации ионов кальция
3. Модуляция нуклеозидтрифосфатазных активностей.
4. Сасвязывающая способность фракций, полученных
при гельфильтрации препарата супернатанта НСП.
5. Термостабильность фактора, обеспечивающего Са регуляцию ГТФазной активности и т субъединиц трансдуцина. .
ОБСУЭВДШИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.
Принятые сокращения
НСП наружный сегмент палочки
ВСП внутренний сегмент палочки
ЬЩНС мембраны дисков наружных сегментов
цГМФ циклический гуанозинмонофосфат
цАМФ циклический аденозинмонофосфат
АТФ аденозин 5трифосфат
ГТФ гуанозин 5трифосфат
ЦТФ цитозин 5трифосфат
УТФ уридин 5трифосфат
ИГФ инозин 5трифосфат
ГДФ гуанозин 5дифосфат
Фн неорганический фосфат
ГВДФ негидролизуемый аналог ГТФ, гуанилил имидодифосфат
негидролизуемый аналог АТФ, у , метилен АТФ
константа Михаэлиса
дисс. константа диссоциации
к1 константа скорости ассоциации
константа скорости диссоциации V максимальная скорость реакции
константа связывания
,Ту субъединицы трансдуцина ЕЕТи фактор элонгации трансляции прокариот
рСа отрицательный логарифм концентрации ионов Са
АН аденилаткиназа КФ 2.7,4.
ЦЦФкиназа нуклеозиддифосфаткиназа КФ 2.7.4.6 АТФаза аденозинтрифосфатаза КФ 3.6.1.
ГТФаза гуанозинтрифосфатаза КФ 3.6.1.
НТФаза нуклеозидтрифосфатаза КШ 3.6.1.
АЦ аденилатциклаза КФ.4.6.1.
ЗДЭ фосфодиэстераза циклических нуклеотидов КФ 3.1.4. ГТФ связывающий белок гормональной рецепции С каталитическая субъединица аденилатциклазы БОБ додецилсульфат натрия
ВВЕДЕНИЕ


Большинство позвоночных имеют в составе сетчатки и палочки, и колбочки, однако некоторые виды животных обладают преимущественно одним типом зрительных клеток. В фоторецепторном слое сетчатки крыс, мышей, кроликов, лягушек и жаб преобладают палочки у древесных землероек, птиц, земляных белок и ящериц колбочки , . Высокая чувствительность палочек к свету, а именно, детектирование световых потоков на уровне одиночных фотонов, обусловлена строением этой сенсорной клетки и механизмом трансформации энергтии фотона в электрический ответ фоторецепторной клетки. I. Морфология фоторецепторной клетки. На рис. Наружный сегмент палочки НСП возникает как вырост в апикальной части фоторецепторной клетки, в месте расположения реснички. Ресничка имеет девять парных микротрубочек, расположенных по периферии формула строения Винников Я, такое расположение обнаружено у нейронов, реснички которых лишены подвижности Питерс и др. Ресничка соединяет наружный и внутренний сегменты фоторецептора. Внутренний сегмент палочки ВСП имеет стандартный для любой клетки набор клеточных органелл митохондрии, ядро, эндоплазматический ретикулум, комплекс Гольджи, рибосомы и т. ВСП содержит синаптические образования, которые контактируют с биполярными и горизонтальными клетками сетчатки Винников Я, , . НСП сетчаткивысокоспециализированное клеточное образование, основной функцией которого является трансформация светового стихла в электрический сигнал. НСП содержит стопку от нескольких сотен до нескольких тысяч в зависимости от класса позвоночного плоских везикул, называемых дисками. Диски в НСП отстоят друг от друга на небольшом расстоянии ангстрем, объем цитоплазматического матрикса составляет примерно половину от объема НСП размеры НСП сетчатки лягушки длина мк, диаметр б мк, число дисков примерно сопе , . Диски постоянно образуются путем впячивания и замыкания цитоплазматической мембраны в ее базальной части в области расположения реснички и постепенно мигрируют в апикальную зону, где происходит их деградация клетками пигментного эпителия. Как было показано с использованием меченых аминокислот, время жизни дисков составляет 9 дней у теплокровных и около двух месяцев у амфибий , . Ламеллярное строение НСП фоторецептора при относительно небольших размерах НСД обеспечивает получение значительной площади мембран в небольшом объеме и, следовательно, высокой концентрации жирорастворимых компонентов , . Молекулы родопсина расположены в мембране дисков так, что ориентация хромофорной группы обеспечивает высокую вероятность поглощения фотона значительная концентрация родопсина в НСП 2, мМ повышает эту вероятность , vv, . Поглощение молекулой родопсина кванта света приводит к изомеризации хромофора из Пцис ретиналя ватранс ретиналь, а затем серия конформационных перестроек молекулы родопсина приводит к разрыву ковалентной связи между ретиналем и опсином. Орлов Н. Я., Фесенко Е. Е. и др. Ратнер В. А., . Процесс фотолиза родопсина обеспечивает первое звено в цепи передачи сигнала от молекулы обесцвеченного родопсина на цитоплазматическую мембрану Фесенко Е. Е. и др. Палочка фоторецептора может генерировать электрический ответ при попадании в НСП всего нескольких фотонов. Зарегистрирован ответ палочки при интенсивностях светового потока, соответствующих поглощенным фотонам на палочку . Темновой ток через цитоплазматическую мембрану фоторецептора обусловлен диффузией ионов натрия внутрь НСП выход натрия обеспечивается оуабаинчувствительной Ка, К аденозинтрифосфатазой, которая расположена во внутреннем сегменте фоторецепторной клетки i , , i, . НСП, эквивалентному уменьшению переноса более 2 электричес
ких зарядов i, i, . При уровнях светового потока, соответствующих ста фотонам на палочку, наблюдается насыщение фотоответа, выражающееся в полном блокировании проводимости цитоплазматической мембраны . Отсутствие электрического и морфологического контакта дисков с цитоплазматической мембраной НСП Винников Я. НСП медиатора, передающего сигнал от молекулы обесцвеченного родопсина, локализованного в мембране диска, на цитоплазматическую мембрацу НСП , , i, i .

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.198, запросов: 145