Исследование физико-химических свойств и биологической активности регуляторного белка, выделенного из роговицы глаза быка

Исследование физико-химических свойств и биологической активности регуляторного белка, выделенного из роговицы глаза быка

Автор: Маргасюк, Дмитрий Викторович

Шифр специальности: 03.00.02

Научная степень: Кандидатская

Год защиты: 2007

Место защиты: Москва

Количество страниц: 157 с. ил.

Артикул: 3317716

Автор: Маргасюк, Дмитрий Викторович

Стоимость: 250 руб.

Содержание
Список используемых в тексте англоязычных сокращений
Список используемых в тексте русскооязычных сокращений
Введение
1 Литературный обзор.
1.1. Строение и основные функции роговицы
1.1.1 .Строение и функции эпителия роговицы
1.1.2.Строение и функции стромы роговицы.
1.1.3.Строение и функции эндотелия роговицы.
1.2. Взаимодействия между слоями роговицы
1.2.1. Эидотслиалыюстромальные взаимодействия
1.2.2. Взаимодействия между стромой и эпителием роговицы.
1.3. Процессы ранозаживлсиия в роговице
1.3.1 Общая последовательность процессов, протекающих в ходе раиозаживления
1.3.2. Клеточные источники регенерации роговицы
1.3.3. Ранозаживленне в эпителии роговицы
1.3.4. Процессы ранозаживлсиия в строме роговицы.
1.3.5. Процессы раиозаживления в эндотелии роговицы
1.4. Регуляторные белки, биологически активные в сверхмалых
Глава 2 Материалы и методы.
2.1. Приготовление экстракта ткани роговицы
2.2. Приготовление супернатанта экстракта ткани роговицы.
2.3. Получение фракций экстракта ткани роговицы и супернатанта методом изоэлсктрофокусирования
2.4. Определение концентрации белка
2.5. Электрофорез белков в полиакриламидном геле.
2.6. Обращспнофазовая высокоэффективная жидкостная хроматография ВЭЖХ
2.7. Определение вторичной структуры с помощью метода кругового дихроизма.
2.8. Исследование частиц в водном растворе РБР методом динамического
светорассеяния
2.9. Определение радиуса частиц, присутствующих в растворе РБР, методом атомносиловой микроскопии.
2 Определение влияния растворов, содержащих РБР, на вязкоупругие свойства мембран гспатоцитов мышипри кратковременном органном культивировании i vi
2 Получение кроличьей поликлональной антисыворотки
2 Иммупоферментный анализ антител I.
2 Иммуногистохимичсское исследование локализации белка с использованием Iконъюгированных антител.
2 Культивирование роговицы
2 Приготовление гистологических срезов
2 Нанесение разреза роговицы
2 Исследование клеточной пролиферации методом радиоавтографии.
Глава 3. Результаты и их обсуждение.
3.1. Выделение и очистка регуляторных белков, выделенных из роговицы глаза быка
3.2. Биотестирование фракций РБРв процессе очистки
3.3. Исследование РБР фракции методом кругового дихроизма
3.4. Исследование методами динамического светорассеяния и атомносиловой микроскопии размеров и формы частиц, присутствующих в водном растворе регуляторного белка роговицы
3.5. Исследование локализации регуляторного белка, выделенного из роговицы глаза быка
3.6. Исследование влияния регуляторных белков, выделенных из роговицы глаза быка, на состояние роговицы тритона в условиях роллерпого культивирования i vi
3.7. Влияние СРБР на состояние роговицы тритона при органном культивировании на подложке в условиях i vi
3.8. Влияние СРБР на состояние роговицы крысы при роллерном органном
культивировании в условиях i viИЗ
3.9. Влияние СРБР па состояние роговицы крысы в условиях культивирования на подложке i vi.
3 Исследование влияния СРБР на клеточную пролиферацию эпителия роговицы тритона после нанесесения экспериментального разреза в условиях i viv.
Глава IV. Общее обсуждение
Список литературы.
Список используемых в тексте англоязычных сокращений.
Некоторые сокращения названий традиционно используются на английском языке, русские аббревиатуры менее употребимы. Прежде всего это относится к названиям цитокинов. Поэтому ниже приводится список используемых в тексте англоязычных аббревиатур с переводом на русский язык.
I аидрогениндуцирусмый фактор роста
маркер лейкоцитов
1 маркер лейкоцитов
рецептор гиалуронана
геи мыши, ответственный за синтез люмикана, Сот мутация по данному гену, приводящая к подавлению синтеза люмикана и, как следствие этого, к гиперплазии эпителия и иеоваскуляризации стромы
эпидермальный фактор роста
I i I метод определения концентрации белка
хемокнн
трансмембранный белок плазмалеммы клеток, в частности, кератоцитов, связывание которого с лигандом запускает механизм реализации апоптоза
фактор роста фибробластов основной фактор роста фибробластов, кислый фактор роста фибробластов
глияактивирующий фактор роста
хемокии
фактор роста генатоцитов
I инсулиноподобный фактор роста
II интерлейкин
фактор роста кератоцитов
латентно ассоциированный пептид
I лазерный интрастромальный кератомилез, один из методов хирургических операций на роговице, основанный на использовании эксимерных лазеров.
I фактор ингибирования лейкемии
фактор активации и хемотаксиса моноцитов
колонийстимулирующий фактор роста
хсмокин
ММР металлопротсазы внеклеточного матрикса
система мембранных рецепторов на поверхности макрофагов
РАБ алкил2ацстил5глицеро3фосфохолин фактор активации тромбоцитов липидной природы
РОСИ фактор роста тромбоцитов
РОвНЯ рецептор к РОвГ
ЯАЫКЬ система мембранных рецепторов на поверхности макрофагов аБМА аактин гладкой мускулатуры
ТвБ фактор роста опухоли ТСИр фактор роста опухоли Р
ТМРтканевые ингибиторы металлопротеаз ТМР1 и ТМР
ЮТа фактор некроза опухоли а
УЕСБ фактор роста эндотелиоцитов.
Список используемых в тексте русскоязычных сокращений.
ВЭЖХ высокоэффективная жидкостная хроматография
ИЭФ изоэлектрофокусирование
ПААГ полиакриламидный гель
РБ группа регуляторных белков, биологически активных в сверхмалых дозах
РБР регуляторный белок, выделенный из роговицы глаза быка, фракции, его содержащие ТРБР фракция кислых белков, выделенная из тканевого экстракта роговицы, СРБР фракция кислых белков, выделенная из супернатанта тканевого экстракта роговицы
Введение
Актуальность


Полученные в работе результаты, вопервых, способствуют пониманию механизмов, лежащих в основе восстановительных и репаративиых процессов, идущих в травмированных или патологически измененных тканях, а потому могут быть включены в специальные курсы лекций, касающихся проблемы ранозажнвления, в частности, в роговице глаза позвоночных животных и человека. В ходе исследования было впервые применено роллерное культивирование роговиц тритона и крысы данная модель может быть использована для изучения воздействия различных физикохимических факторов на ткань роговицы. Учитывая результаты исследования, показавшие стимулирующее действие изучаемого РБ на процесс эпителизации роговицы, а также данные, полученные при исследовании локализации данного белка в ткани, на его основе предполагается разработать новый офтальмологический препарат, который будет эффективен при лечении кератопатий различной этологии. Глава 1. Литературный обзор . Роговица образует переднюю стенку глазного яблока рис. Она выполняет защитную, светопроводящую и светопреломляющую функции, для осуществления двух последних необходима прозрачность и наличие определенной преломляющей силы Зиангирова, Олинович, . Кроме того, через роговицу у амфибий осуществляется транспорт воды и ионов СГ и , i, , , . И, наконец, следует отметить участие эндотелия роговицы в регенерации хрусталика после лензэктомии у личинок некоторых бесхвостых амфибий , v, i, . Способность к осуществлению этих функций определена специфическими особенностями строения роговицы. В ней выделяют три основных слоя эпителий, строму и эндотелий. На границе эпителия и стромы находится боуменова мембрана, состоящая из пространственно неупорядоченных коллагеновых волокон, а на границе стромы и эндотелия десцс. Строение роговицы тритона принципиально не отличается от такового других позвоночных животных и показано на рис. Эпителий роговицы имеет эктодермальное происхождение и состоит из 3 слоев базального, сумрабазального и чешуйчатого Хэм, Кормак, . Клетки базального слоя расположены на поверхности базальной мембраны, что типично для эпителия. За счет пролиферативной активности клеток внутренних слоев базального и суирабазального обеспечивается увеличение числа клеток наружного чешуйчатого слоя, в которых осуществляется синтез специфических белков кератинов, образующих гетеродимеры. Рис. Схема строения глаза млекопитающих. У млекопитающих накопление кератинов в клетках эпителия роговицы приводит к неполному их ороговеванию. Рис. Строение периферической части роговицы глаза тритона РкигосвеБ v ув. Ю, об х4 окраска толуидиновый синий срез 1 мкм. Каус, базальная мембрана, напротив, является значительно болсс толстой 0, мкм у ТгШипю с. ШБ по сравнению с 0,1 мкм для кролика и 0, мкм для человека. Расположенная под эпителием роговицы базальная мембрана состоит из коллагена IV и VII типов, ламииииов , 3, i, РЗ, у1 и у2, фиброиектина и гспарансульфата , ivii, i . Строма имеет мезенхимное происхождение и составляет наиболее значительную часть роговицы. Показана экспрессия фнбробластами стромы человека маркера гемопоэтических клеток костного мозга, что дает основание предположить происхождение клеток эмбриональной стромы именно из этого источника i . В строме роговицы мыши не все клетки экспрессируют данный маркер v . Авторы данного исследования показали, что антитела к этому маркеру преимущественно окрашивают макрофаги, но не фибробласты стромы. Основная масса клеточных элементов стромы представляет собой уплощенные фибробласты кератоциты, которые синтезируют коллаген, накапливающийся в виде пластинчатых структур ламелл, а также секрстируют компоненты межклеточного матрикса, например, протеогликаиы i . При ранозаживлении в строме обнаруживаются также фибробласты веретеиовидпой формы см. Плотность кератоцитов в центре роговицы существенно ниже, чем на периферии. Среди дайной популяции клеток выделяют особую небольшую группу кератоцитов, положительных но актину гладкой мускулатуры. Кроме , в данной популяции клеток отмечена экспрессия кристаллинов роговицы, обеспечивающих прозрачность клеток а.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.352, запросов: 145