Изучение реакций активных форм кислорода (супероксидных и гидроксильных радикалов, перекиси водорода, гипохлорита) и окиси азота с биологически важными соединениями

Изучение реакций активных форм кислорода (супероксидных и гидроксильных радикалов, перекиси водорода, гипохлорита) и окиси азота с биологически важными соединениями

Автор: Осипов, Анатолий Николаевич

Шифр специальности: 03.00.02

Научная степень: Докторская

Год защиты: 1999

Место защиты: Москва

Количество страниц: 203 с. ил

Артикул: 2284926

Автор: Осипов, Анатолий Николаевич

Стоимость: 250 руб.

Изучение реакций активных форм кислорода (супероксидных и гидроксильных радикалов, перекиси водорода, гипохлорита) и окиси азота с биологически важными соединениями  Изучение реакций активных форм кислорода (супероксидных и гидроксильных радикалов, перекиси водорода, гипохлорита) и окиси азота с биологически важными соединениями 

ОГЛАВЛЕНИЕ
ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ
ВВЕДЕНИЕ
ЦЕЛИ РАБОТЫ
НАУЧНАЯ НОВИЗНА
ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1. ГИПОХЛОРИТ И ЕГО МЕСТО В РЕАКЦИЯХ ОРГАНИЗМА.
1.1. Образование гипохлорита миелопероксидазой нейтрофилов.
1.2. Химические свойства гипохлорной кислоты и гипохлорита
натрия.
1.3. Реакции гипохлорита с биологически важными соединениями.
1.4. Бактерицидные и цитотоксические свойства гипохлорита.
1.5. Образование свободных радикалов в реакциях гипохлорита.
2. ГЕМОГЛОБИН РЕГУЛЯТОР СВОБОДНОРАДИКАЛЬНЫХ ПРОЦЕССОВ В ОРГАНИЗМЕ.
2.1. Роль внеэритроцитарного гемоглобина в
патологических процессах.
2.2. Взаимодействие гемоглобина с Н2 и органическими гидроперекисями.
2.3. Высвобождение ионов железа из гемопротеинов
под воздействием Н2 и гипохпорита.
2.4. Изменение физикохимических свойств гемоглобина
при образовании комплекса с гаптоглобином.
3. БИОЛОГИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ ОКИСИ АЗОТА.
3.1. Прямые реакции 0.
3.2. Опосредованные реакции 0.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
1. МАТЕРИАЛЫ
1.1. Реактивы
1.2. Приготовление убихинола О и Ккраун эфира
1.3. Получение гемоглобина
1.4. Получение гаптоглобина
1.5. Получение липопротеинов
1.6. Окисление липопротеинов
1.7. Выделение моноцитов
1.8. Выделение нейтрофилов
2. МЕТОДЫ
2.1. Измерение концентраций гипохлорита и перекиси водорода
2.2. Измерение концентрации ионов железа II
2.3. Измерение концентрации гемоглобина
2.4. Модификация гемоглобина Н2О2 или НОС1
2.5. Изучение влияния гаптоглобина и альбумина
2.6. Регистрация спектров ЭПР
2.7. Измерение хемилюминесценции реакции НОС1Ре
2.8. Измерение хемилюминесценции МеШЬИВиООН
2.9. Измерение хемилюминесценции клеток крови
2 Исследование взаимодействия гемоглобина
с гипохлоритом и перекисью водорода
2 Измерение хемилюминесции анионрадикалов супероксида
2 Измерение ТБКреактивных продуктов
2 Определение продукции
2 Измерение концентрации 0 методом ЭПР
2 Измерение концентрации 0 методом Гриса
2 Измерение флуоресценции циспаринариевой кислоты
2 Масс спектрометрический анализ
2 Измерения ВЭЖХ аскорбата, убихинона и атокоферола
2 Статистический анализ
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ИЗУЧЕНИЕ МЕХАНИЗМА ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ
ГИПОХЛОРИТА С ИОНАМИ МЕТАЛЛОВ
1.1. Образование гидроксильных радикалов при взаимодействии гипохлорита с ионами железа II. Метод ЭПР.
1.2. Образование гидроксильных радикалов при взаимодействии гипохлорита с ионами титана. Метод ЭПР.
1.3. Образование гидроксильных радикалов при взаимодействии гипохлорита с ионами железа II. Метод хемилюминесценции.
ГЛАВА 2. ИССЛЕДОВАНИЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ГИПОХЛОРИТА С ГЕМОГЛОБИНОМ И ЛИПОПРОТЕИДАМИ
2.1. Изучение механизма взаимодействия гипохлорита с оксигемоглобином.
2.1.1. Спектрофотометрическое исследование взаимодействия гипохлорита и перекиси водорода с оксигемоглобином.
2.1.2. Изучение образования свободных радикалов в системе гипохлорит гемоглобин методом хемилюминесценции.
2.2. Влияние гипохлорита и перекиси водорода на способность гемоглобина стимулировать перекисное окисление липидов липопротеинов низкой плотности.
2.2.1. Индукция ПОЛ липопротеинов гемоглобином, модифицированным гипохлоритом и Н2.
2.2.2. Влияние перехватчиков свободных радикалов и хелаторов ионов железа на перекисное окисление липидов липопротеинов низкой плотности.
2.2.3. Влияние гаптоглобина и альбумина на способность гемоглобина стимулировать перекисное окисление липидов липопротеинов низкой плотности.
2.3. Генерация свободных радикалов моноцитами и нейтрофилами возможная причина модификации липопротеинов.
2.3.1. Активация моноцитов в присутствии липопротеинов.
2.3.2. Перекисное окисление липопротеинов в присутствии моноцитов.
2.3.3. Активация нейтрофилов в присутствии липопротеинов.
2.3.4. Перекисное окисление липопротеинов
в присутствии нейтрофилов.
ГЛАВА 3. ИЗУЧЕНИЕ ПРО И АНТИОКСИДАНТНЫХ РЕАКЦИЙ ОКИСИ АЗОТА
3.1. Восстановление феррилмиоглобина и феррилгемоглобина окисью азота.
3.1.1. Спектрофотометрическое исследование взаимодействия ггМЬтеЖЬ с гидроперекисью третбутила и 0.
3.1.2. Спектры ЭПР радикалов, образующиеся при взаимодействии те1МЬ с ЬВиООН и 0.
3.1.3. Влияние феррилгемоглобина на концентрацию 0.
3.1.3. Обнаружение спиновых аддуктов в присутствии 1ВиООН и МеЖЬ.
3.1.4. Масс спектрометрический анализ взаимодействия те1МЬтеЖЬ с 1ВиООН и 0.
3.1.5.Влияние 0 на люминолзависимую хемилюминесценцию в системе тМЬтеЖЬ и 1ВиООН.
3.1.6. Ингибирование перекисного окисления липидов, индуцированного в системе системе те1МЬтеЖЬ и ЬВиООН, 0.
3.1.7. Механизм антиоксидантного действия 0 .
3.1.8. Механизм восстановления МЬРеУ0 НЬ4РеУ0 радикалов 0.
3.2. Окислительновоссановительный парадокс окиси азота прямое окисление атокоферола и опосредованное атокоферолом окисление аскорбата
3.2.1. Изучение взаимодействия атокоферола и 0 методом ЭПР.
3.2.2. Исследование взаимодействия аскорбата и 0 методом ЭПР.
3.2.3. Циклическое восстановление радикалов атокоферола аскорбатом в присутствии 0.
3.2.4. Изучение методом ВЭЖХ атокоферолопосредованного окисления аскорбата окисью азота.
3.2.5. Физиологическое значение исследованных реакций.
ГЛАВА 4. ИЗУЧЕНИЕ РОЛИ УБИХИНОНОВ В РЕАКЦИЯХ ОКИСЛЕНИЯВОССТАНОВЛЕНИЯ ВИТАМИНА Е
4.1. Убихинон Оюзависимое восстановление радикалов
витамина Е супероксидными радикалами.
4.1.1. Окисление атокоферола в присутствии и в
отсутствие убихинона .
4.1.2. Изучение методом ЭПР супероксидзависимого взаимодействия атокоферола и убихинона Ою.
4.1.3. Спектрофотометрическое исследование образования убисемихинона Ою в присутствии супероксида и атокоферола.
4.2. Убихинон зависимое восстановление радикалов Тролокса супероксидными радикалами, в системе ксантинксантиноксидаза.
4.2.1. Влияние Тролокса и убихинона 0 на интенсивность хемилюминесценции.
4.2.2. Обнаружение радикалов убихинона методом ЭПР.
4.2.3. Изучение продуктов окисления Тролокса методом ВЭЖХ.
4.2.4. Изучение взаимодействия убихинона 0 с радикалами Тролокса методом ЭПР.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЦИТИРОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ


Растворы хлорноватистой кислоты окрашены в слабый зеленоватожелтый цвет и обладают своеобразным запахом. НОС и почти все гипохлориты неустойчивые соединения. Скорость и направление распада НОС1 и гипохлоритов в водных растворах зависят от , температуры, концентрации, наличия примесей и освещения. В интервале . Освещение ускоряет эту реакцию, причем видимый свет оказывает более сильное влияние, чем ультрафиолетовый. Ниже С вклад этой реакции невелик, однако при более высоких температурах она становится преобладающей. Описание этих методов можно найти в книгах Фруминой и Уильямса . Однако в биологических исследованиях чаще всего используют спектрофотометрические и люминесцентные методы. Наиболее простой метод измерения концентрации гипохлорита измерения спектра поглощения в ультрафиолетовом диапазоне. Поскольку при физиологических гипохлорит существует как смесь НОС1 и ОС1 и их спектры поглощения различны, то сначала увеличивают до , когда происходит полное депротонирование, затем измеряют оптическую плотность при 2 нм. ЭКСТИНКЦИИ 0. М1см1 5. В основе остальных спектрофотометрических методов лежит способность гипохлорита окислять различные вещества, которая проявляется как в кислой, так и в щелочной среде. Например, в результате реакций ОС с такими веществами как отолуидин 8, монохлородимедон, К 8 и др. Еще одним часто используемым методом изучения реакций гипохлорита является хемилюминесцентный метод. Добавление гипохлорита в раствор люминола вызывает сильное свечение, интенсивность которого пропорциональна концентрации гипохлорита, причем в присутствии перекиси водорода интенсивность свечения увеличивается на порядка ,. Изучению реакций гипохлорита с различными биологическими соединениями посвящено множество работ, где в большинстве случаев исследователи констатируют факт взаимодействия гипохлорита с различными веществами, не определяя механизм этих реакций. Так, например, взаимодействие ОС1 с ферментами изучалось с помощью измерения спектров поглощения белков иили определения степени уменьшения их ферментативной активности ,,8. В работе Мп1егЬоигп е а1. Аналогичный прием применялся в работе Говоровой и соавт. Гипохлорная кислота и гипохлорит натрия, будучи сильными окислителями, способны реагировать со многими органическими соединениями различной природы. Не представляется возможным перечислить все известные в настоящее время реакции в данном обзоре. Описание большого числа реакций гипохлорита с органическими и неорганическими соединениями приведены в книгах 5,3. Реакции гипохлорита с биологически важными соединениями. Гипохлорная кислота обладает высокой реакционной способностью по отношению к очень многим видам биомолекул. Гипохлорит быстро реагирует с первичными аминами РЫН2 , такими как таурин, этаноламин, аминокислоты, и с множеством других соединений ,9,5,0. При этой реакции образуются произ водные хлорамины ИЖС. Результатом взаимодействия ОСГ с таурином, веществом часто используемым в качестве акцептора для НОС1, является хлорамин таурина. Это соединение достаточно стабильное. Его образование в гипохлоритсодержащей системе можно наблюдать по спектру поглощения в ультрафиолетовой области. В работе 9с применением изотопа С было показано, что в системе МП0Н2СГ образуются два вещества с различными спектрами поглощения, одно с максимумом поглощения 4 нм, другое при 0 нм, причем соотношение между концентрациями этих соединений зависело от среды. При взаимодействии НОС1 и таурина при эквимолярном соотношении образовывалось вещество, поглощающее в более коротковолновой области хлорамин таурина. Если же концентрация НОС1 увеличивалась, то возрастало количество вещества с максисмумом поглощения при 0 нм. Это соединение было идентифицировано как дихлорамин таурина РМС. Гипохлорит легко реагирует и с другими аминами, например, этаноламином, аланином, диэтаноламином. Аланин и этаноламин при взаимодействии с гипохлоритом дают хлорамины, подобные тем, которые образуются из таурина моно и дихлорамины. Диэтаноламин дает только монохлорамин 0.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.223, запросов: 145