Действие физических факторов - видимого света и ионизирующей радиации - на сетчатку глаза

Действие физических факторов - видимого света и ионизирующей радиации - на сетчатку глаза

Автор: Логинова, Марина Юрьевна

Шифр специальности: 03.00.02

Научная степень: Кандидатская

Год защиты: 2009

Место защиты: Москва

Количество страниц: 176 с. ил.

Артикул: 4419844

Автор: Логинова, Марина Юрьевна

Стоимость: 250 руб.

СОДЕРЖАНИЕ
ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность проблемы
Цель диссертационной работы
Основные задачи исследования.
Научная новизна
Научная и практическая ценность работы.
Основные положения, выносимые на защиту
Апробация диссертации и публикации результатов исследования
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
Фотоиндуцированные изменения в фоторецепторных
мембранах в присутствии полностьютрансретиналя
1.1. Объект исследования.
1.1.1. Строение сетчатки глаза.
1.1.2. Структура наружных сегментов фоторецепторов.
1.1.3. Свойства зрительного пигмента родопсина.
1.2 Фотолиз родопсина палочек.
1.2.1. МстародопсинН.
1.2.2. МетародопсинШ.
1.2.3. Равновесие между Мета II и Мета III формами.
1.2.4. Трансретиналь и опсин
1.3. Зрительный цикл.
1.3.1. Выведение полностью1мшоретиналя из фоторецепторных мембран и преобразование его в нолностыош1асрстинол
1.3.2. Реизомеризация в сретнналь.
1.3.3. Рекомбинация исретиналя с опсином.
1.4. Вероятность накопления нолностьютншсретиналя в фоторецепторных мембранах
1.4.1. Нарушения зрительного цикла, приводящие к накоплению п7дсретиналя в фоторецепторной клетке.
1.4.1.а. Дефект гена АВСК
1.4.1.6. Дефект гена .
1.5. Производные полностьютрансретинали, образующиеся в фоторецепторных мембранах как побочные продукты зрительного цикла
1.5.1. Образование производных полностьюирансретиналя
1.5.1.1. ГМгеРЕ, дигидроА2РЕ, А2РЕ, А2Е, А2ПНРРЕ. АШРЕ.
1.5.1.2. АТЯ димер, АТИдимерРЕ, АТЯдимерЕ.
1.5.1.3. А2родопсин.
1.5.2. Физикохимические свойства полностыошрднсретиналя и его производных, образующихся в фоторецепторных мембранах
1.5.2.1. Свойства полносзьюшрянсретиналя
1.5.2.1.а. Фотофизические свойства
1.5.2.1.6. Фотохимические свойства
1.5.2.1.в. Фотоповрсзддающис свойства.
1.5.2.2. Свойства производных полностьюяя1Сретиналя
1.5.2.2.а. Свойства оснований Шиффа.
1.5.2.2.6. Свойства А2РЕ.
1.5.2.2.в. Свойства АТИдимера и его конъюгатов .
1.6. Два типа фотохимического повреждения сетчатки.
1.6.1. Первый тип повреждения
1.6.2. Второй тип фотоповреждения
1.7. Факторы, влияющие на подверженность сетчатки светоиндуцированному повреждению.
7.7Общсе содержание родопсина, и, в частности,
регенерабелыюго родопсина
.7.2. Скорость регенерации родопсина.
1.7.2.1. Скорость синтеза мсретнналя
7.7.2.2.Связыванис цисретиналя с хромофорным центром родопсина
1.7.3. Влияние липидного состава фоторецепторных мембран. Радиационноиндуцированные изменения в сетчатке
1.8. Световые вспышки фосфены.
1.9. Лучевые поражения тканей глаза
1 Механизмы радиационного поражения ЦНС.
1 Радиационноиндуцированные изменения в сетчатке глаза
. Морфологические изменения в сетчатке после воздействия ИИ
.1. Гибель фоторецепторов
.2 Изменения в клетках ретинального пигментного эпителия.
.3. Изменения в ретинальных сосудах и внутреннем слое сетчатки
.4. Изменения в хориоидальных сосудах
. Функциональные изменения в сетчатке после воздействия
З.Биохимические изменения в сетчатке последействия ИИ
. Особенности повреждения и репарации ДНК в клетках сетчатки после ИИ.
1 Особенности радиационного повреждения ДНК.
. Одиночные повреждения ДНК.
1,,2. Локальные множественные повреждения ДНК.
Глава 2. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Фотоиндуцированные изменения в фоторецепторных мембранах в присутствии полностьютрансретиналя
2,1 Исследуемый объект суспензия фоторецепторных мембран
2.2. Процедура получения конъюгатов полностьюлямсретиналя с компонентами фоторецепторных мембран
2.3. Тест на регенерацию родопсина
2.4. Облучение фоторецепторных мембран видимым светом.
2.5. Спектральные измерения.
2.6. Высокоэффективная жидкостная хроматография ВЭЖХ
2.7. Пикосекундная флуоромстрия.
2.8. Оценка перекисного окисления липидов.
2.9. Статистическая обработка данных при проведении фотохимических исследований.
Радиационноиндуцированные изменения в сетчатке глаза .
2. Содержание животных
2 Условия облучения животных
2 Экспериментальные процедуры.
2 Морфологические исследования
2 Вестернблоттинг
2 Метод ДНКкомет.
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Фотоиндуцированные изменения в фоторецепторных мембранах в присутствии полностьютрансретиналя
3.1. Получение конъюгатов полностьюя7а1брстиналя с
компонентами фоторецепторных мембран
3.1.1. Спектры поглощения.
3.1.2. Спектры флуоресценции.
3.1.3.Высокоэффективная жидкостная хроматография
3.2. Получение и идентификация продуктов окисления полностьюдршсрез иналя в отсутствие фоторецепторных мембран
3.2.1. Спектры поглощения.
3.2.2. Спектры флуоресценции
3.2.3. Высокоэффективная жидкостная хроматография.
3.3. Исследование в пикосекундном диапазоне времен кинетики затухания флуоресценции полностьююишсретиналя и его конъюгатов с компонентами фоторецепторных мембран
3.4. Изучение фотоповреждающих свойств полностыонрао ретиналя и его конъюгатов с компонентами фоторецепторных мембран.
3.4.1. Фотоиндуцированное снижение скорости регенерации родопсина в присутствии полностьюшраноретиналя или его конъюгатов.
3.4.2. Фотоиндуцированное перекисное окисление липидов фоторецепторной мембраны в присутствии полностыонрансрстиналя или его конъюгатов.
Радиационноиндуцированные изменения в сетчатке
3.5. Генотоксическое действие ионизирующего излучения на сетчатку половозрелых мышей.
3.6. Оценка количества белков р и АТМ в сетчатке мышей после воздействия уизлучения и ускоренных протонов в дозе Гр .
3.7. Морфологические изменения сетчатки после воздействия уизлучения и ускоренных протонов в дозе Гр
Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ.
4Действие видимого света и ионизирующей радиации на сетчатку.
4.2. Действие видимого света на сетчатку
4.3. Образование коныогатов полностьюмрдсретиналя в модели его избыточного присутствия в фоторецепторных мембранах i vi
4.4. Изучение фотоповреждаюших свойств полностьющлсретиналя и его конъюгатов с компонентами фоторецепторных мембран
4.5. Кинетика затухания флуоресценции полноетьюирясретиналя и его конъюгатов.
4.6. Действие ионизирующего излучения на сетчатку.
4.7. Генотоксическое действие ионизирующего излучения на
сетчатку половозрелых мышей .
4.8. Ответ р на действие ионизирующего излучения
БЛАГОДАРНОСТИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Цель диссертационной работы заключалась, с одной стороны, в выяснении фоготоксических свойств конъюгатов полностыотаб,ретииаля в модели i vi, имитирующей избыточное присутствие полностьютрапсретиналя в фоторецепторных мембранах наружных сегментов палочек сетчатки, а с другой стороны, в исследовании морфологических и цитогенетических изменений в клетках сетчатки мышей после воздействия ионизирующего излучения i viv. Исследовать спектральные и фотофизические свойства конъюгатов полностьююасретиналя с компонентами фоторецепторных мембран. Исследовать i vi фототоксичное действие пол ностъютрапсретиналя и его конъюгатов с компонентами фоторецепторных мембран, оценивая 1 фотоокисление липидов фоторецепторных мембран, и 2 изменение скорости регенерации родопсина после его обесцвечивания. Выявить и описать ранние морфологические изменения сетчатки после действия уизлучения и ускоренных протонов в высокой дозе Гр. Охарактеризовать поврежденность генома и активность репаративной системы зрелой сетчатки после действия уизлучения и ускоренных протонов в указанной дозе. Оценить изменение уровня экспрессии белка р, регулирующего ответ ряда клеточных систем и активирующегося в ответ на повреждение генома после действия ионизирующего излучения ИИ. С. Методом пикосекундной лазерной флуорометрии исследованы кинетики затухания флуоресценции полностьюиряеретиналя и его конъюгатов, определены центры свечения и их реальные времена жизни. Установлено образование, по меньшей мере, трех флуорофоров с характерными временами жизни возбужденного состояния , 8 и 0 пс. Показано снижение скорости регенерации родопсина i vi после облучения видимым светом нм в присутствии конъюгатов ретиналя. Впервые для определения поврежденности ДНК в клетках сетчатки применен метод ДНКкомет, позволяющий определять однонитевые и двунитевые разрывы ДНК. Установлено, что после облучения животных как улучами, так и ускоренными протонами в дозе Гр в ДНК клеток сетчатки образуется значительное количество одно и двунитевых разрывов, которые почти полностью удаляются к 6 часов. Обнаружено, что спустя часов после облучения в сетчатке снова встречаются клетки с поврежденной ДНК. Впервые показано увеличение количества белка р в сетчатке половозрелых мышей после действия ионизирующей радиации. Установлено, что массового апоптоза в терминальнодифференцированной ткани сетчатки в первую неделю после воздействия ИИ в дозе Гр не наблюдается. Результаты диссертации имеют фундаментальное значение для понимания механизмов липофусциногенеза и патогенеза сетчаткиретинального пигментного эпителия, связанных с избыточным накоплением полностыотрансретиналя в фоторецепторных мембранах, образованием его конъюгатов с компонентами мембраны и, как следствие, фотоиндуцированным перекисным окислением липидов. Описанные флуоресцентные характеристики конъюгатов ретиналя представляют несомненный практический интерес для дальнейшего усовершенствования метода аутофлуоресцентной диагностики глазного дна при дегенеративных заболеваниях сетчатки. Связывание полностыошрднсретиналя с компонентами фоторецепторной мембраны приводит к образованию нескольких флуорофоров с различными максимумами поглощения при 5, , и флуоресценции при 0, и нм, соответственно. Реальные времена жизни конъюгатов полностыояянретиналя с компонентами фоторецепторной мембраны выше, чем у полностьюшрансретиналя, и составляют , 8 и 0 пс. Скорость регенерации родопсина, находящего в окружении конъюгатов полностьютряноретипаля с компонентами фоторецепторной мембраны, резко падает после обесцвечивания светом в диапазоне нм. Облучение светом в диапазоне нм фоторецепторных мембран, содержащих конъюгаты полностыоиянсретиналя, индуцирует перекисное окисление липидов. Облучение половозрелых мышей в дозе Гр вызывает образование одно и двунитевых разрывов в ДНК их сетчатки, которые устраняются в течение часов после облучения. Спустя ч и далее в течение 7 суток после облучения среди нормальных клеток с неповрежденной ДНК снова встречается до клеток с поврежденной ДНК. Облучение приводит к увеличению количества белка р, повышенный уровень которого сохраняется в течение длительного времени после облучения. Облучение не приводит к резким морфологическим изменениям в сетчатке в течение первой недели после воздействия. Итог. Фундаментальные науки медицине Москва, , , VI и VIII междунар.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.199, запросов: 145