Клеточно-молекулярные механизмы фотоповреждения нервных и глиальных клеток лазерным микрооблучением и фотодинамическим воздействием

Клеточно-молекулярные механизмы фотоповреждения нервных и глиальных клеток лазерным микрооблучением и фотодинамическим воздействием

Автор: Узденский, Анатолий Борисович

Шифр специальности: 03.00.02

Научная степень: Докторская

Год защиты: 2004

Место защиты: Воронеж

Количество страниц: 336 с. ил.

Артикул: 2637893

Автор: Узденский, Анатолий Борисович

Стоимость: 250 руб.

Клеточно-молекулярные механизмы фотоповреждения нервных и глиальных клеток лазерным микрооблучением и фотодинамическим воздействием  Клеточно-молекулярные механизмы фотоповреждения нервных и глиальных клеток лазерным микрооблучением и фотодинамическим воздействием 

1. ВВЕДЕНИЕ
1.1. Актуальность проблемы.
1.2. Цели и задачи работы
1.3. Научная новина. Положения, выдвинутые на защиту
1.4. Практическая значимость
1.5. Апробация работы.
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1. Химические реактивы
2.2. Объект исследования
2.3. Регистрация импульсной активности механорецепторного нейрона.
2.4. Лазерное микрооблучение нейрона
2.5. Фотодинамическое воздействие.
2.6. Фотосснсибилизаторы
2.7. Исследование физикохимических характеристик фотосенсибилизаторов
2.8. Фармакологическая модификация реакции нейрона
на фотодинамическое воздействие
2.9. Цитохимическое изучение активности сукцинатдсгидрогсназы
в микрооблуценных нейронах.
2 Общая дегидрогеназная активность МТТтест
2 Исследование фотоиндуцированных
ультраструктурных изменений в мсханорсцспторном нейроне
2 Флуоресцентномикроскопические исследования
2 Определение АТФазной активности в гомогенатах мозга крыс.
2 Статистическая обработка результатов.
3. ДЕЙСТВИЕ ВИДИМОГО СВЕТА НА НЕРВНЫЕ КЛЕТКИ.
3.1. Фотобиологические реакции нервных клеток. Обзор литературы
3.1.1. Действие видимого света на пигментированные нейроны.
3.1.2. Действие видимого света на непигментированные нейроны.
3.1.2.1. Синяя и зеленая области спектра.
3.1.2.2. Красная область спектра.
3.1.3. Лазерное микрооблучение клеток
3.2. Реакция механорецепторных нейронов рака на лазерное микрооблучение
3.2.1. Динамика импульсной реакции нейрона.
3.2.2. Накопление необратимых фотоиндуцированных изменений в нейроне
3.2.3. Спектры действия импульсной реакции нейрона на лазерное микрооблучение
3.2.4. Зависимость реакции нейрона от интенсивности лазерного микрооблучения
3.2.5. Микрооблучение фотосенсибилизированнот нейрона.
3.2.6. Модификация импульсных ответов нейрона
биоэнергетическими ингибиторами.
3.2.7. Ультраструктурные изменения в нейроне,
подвергнутом лазерному микрооблучению.
3.2.8. Ингибирование сукцинатдегидрогеназы в нейроне,
подвергнутом лазерному микрооблучению.
3.2.9. Модификация реакции нейрона на лазерное микрооблучение перехватчиками свободных радикалов
3.2 Инактивация АТФаз в нервной ткани лазерным облучением.
3.2 Участие ионов Са2 в реакции нейрона на лазерное микрооблучение.
3.3. Возможный механизм реакции непигментированного нейрона
на синее лазерное микрооблучение
3.4. Заключение.
4. КЛЕТОЧНОМОЛЕКУЛЯРНЫЕ МЕХАНИЗМЫ
ФОТОДИНАМИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
4.1. История фотодинамической терапии.
4.2. Фотодинамический эффект
4.3. Фотодинамическая терапия.
4.4. Клинические применения фотодинамической терапии
4.5. Фотосенсибилиззаторы
4.6. Внутриклеточная локализация фотосенсибилизаторов
4.7. Фотодинамическое воздействие на клеточные структуры.
4.7.1. Плазматическая мембрана.
4.7.2. Лизосомы
4.7.3. Митохондрии.
4.7.4. Ядро
4.8. Механизмы гибели фотосенсибилизированных клеток.
4.9. Фотодинамическое воздействие на нервные клетки
5. ДЕЙСТВИЕ РАЗЛИЧНЫХ ФОТОСЕНСИБИЛИЗАТОРОВ НА ИЗОЛИРОВАННЫЙ НЕЙРОН. СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА.
5.1. Биоэлектрические реакции нейрона на ФД воздействие
5.2. Концентрационные кривые и сравнение фотосснсибилизаторов
5.3. Фотодинамическое действие на нейрон
различных производных гематопорфирина
5.4. Фотодинамическое действие на нейрон протопорфирина IX.
5.5. Фотодинамическое действие на нейрон различных производных дейтсропорфирина IX
5.5.1. Физикохимические свойства производных дейтеропорфирина IX
5.5.2. Динамика импульсных ответов нейронов на фотодинамическое воздействие производных дейтсропорфирина IX
5.5.3. Концентрационные зависимости импульсных ответов нейронов на фотодинамическое воздействие производных дейтеропорфирина IX.
5.6. Фотодинамическое действие на нейрон производных хлоринов и рб.
5.6.1. Физикохимические свойства производных хлоринов.
5.6.2. Динамика импульсных ответов нейронов на фотодинамическое воздействие производных хлоринов еб и Рб.
5.6.3. Концентрационные зависимости импульсных ответов нейронов на фотодинамическое воздействие производных хлоринов вб и рб
5.7. Фотодинамическое действие на нейрон фталоцианиновых сенсибилизаторов
5.7.1. Физикохимические свойства фталоцианиновых сенсибилизаторов.
5.7.2 Динамика импульсных ответов нейронов
на фотодинамическое воздействие фталоцианиновых сенсибилизаторов.
5.7.3. Концентрационные зависимости импульсных ответов нейронов на фотодинамическое воздействие фталоцианиновых сенсибилизаторов
5.8. Спектральные свойства, фотостабильносгь и действие на клетки
гиперицина и его водорастворимой формы.
5.8.1. Спектральные свойства и фотостабильносгь гиперицина
в растворе и в клетках.
5.8.1.1. Спектры поглощения света гиперицином
5.8.1.2. Спектры флуоресценции гиперицина
5.8.1.3. Спектры флуоресценции гиперицина в культивируемых раковых клетках
5.8.1.4. Обсуждение.
5.8.2. Локализация гиперицина в клетках
5.8.2.1. Локализация гиперицина в опухолевых клетках.
5.8.2.2. Локализация гиперицина и в рецепторе растяжения рака.
5.8.3. Темповая токсичность гиперицина и
5.8.4. Фототоксичиость гиперицина и .
5.8.4.1. Фотодинамичсское действие гиперицина на опухолевые клетки
5.8.4.2. Динамика импульсных ответов нейронов
на фотодинамическое воздействие гиперицина и ур.
5.9. Фотодинамическое действие на нейрон экзогенного рибофлавина
5 Фотодинамическое действие на нейрон других фотосенсибилизаторов.
. Метиленовый синий.
. Янус зеленый В
5 Заключение
6. КЛЕТОЧНОМОЛЕКУЛЯРНЫЕ МЕХАНИЗМЫ ФОТОДИИАМИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ ФОТОСЕНСА НА ИЗОЛИРОВАННЫЙ НЕЙРОН
6.1. Локализация Фотосенса в рецепторе растяжения рака
6.2. Влияние излучения гелийнсонового лазера и темпового действия
Фотосенса на импульсную активность нейрона
6.3. Импульсные реакции нейрона на фотодинамическое воздействие Фотосенса
6.4. Участие активных форм кислорода в реакции нейрона
на фотодинамическое воздействие.
6.5. Изменения морфологии ядер механорецепторных нейронов.
6.6. Динамика нарушения проницаемости плазматической мембраны.
6.7. Ультраструктурные изменения рецептора растяжения
при фотосенсибилизации Фотосенсом.
6.8. Фотоиндуцированнос изменение активности сукцинатдегидрогеназы
и общей дегидрогеназной активности в рецепторных нейронах.
6.9. Субстратноингибиторный анализ участия биоэнергетических процессов в реакции нейрона на фотодинамическое воздействие.
6 Участие ионов Са2 в импульсной реакции нейрона на фотодинамическое воздействие.
6 Участие процессов сигнальной трансдукции в реакции нейрона на фотодинамическое воздействие
. Протеинкиназа С.
. Фосфатидилинозитол 3киназа.
. Аденилатциклаза.
. Тирозинкиназа.
. Протеинфосфатаза
6 О механизме реакции нейрона на ФД действие Фотосенса
. Локализация Фотосенса в рецепторе растяжения рака.
. О роли активных форм кислорода в ФД повреждении нейрона.
. Структурные изменения в фотосенсибилизированных нейронах
. ФД воздействие на биоэнергетические процессы
. Участие ионов Са2 в фототорможении и смерти нейронов.
. Участие процессов сигнальной трансдукции в реакции нейронов
на ФД воздействие.
. Механизм фотоповреждения нейронов при слабом ФД воздействии.
. Механизм фотоповреждения нейронов при интенсивном ФД воздействии
6 Выводы
7. ФОТОДИНАМИЧЕСКОЕ ДЕЙСТВИЕ НА ГЛИАЛЬНЫЕ КЛЕТКИ
7.1. Введение.
7.2. Локализация Фотосенса. Морфология глиальных ядер. Некроз и апоптоз.
7.3. ФД повреждение глиальных клеток, сенсибилизированных Фотосенсом
7.4. Ультраструктурные изменения в глиальных клетках,
сенсибилизированных Фотосенсом
7.5. Участие процессов сигнальной трансдукции в ФДиндуцированном повреждении глиальных леток.
7.6. Обсуждение
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Затем клетки 3 раза отмывались фосфатным буфером и изучались с помощью флуоресцентного микроскопа i xi i, , снабженного ртутной лампой НВО0 и водноиммерсионным объективом xI. Изображения регистрировались камерой i I, i, . Таблица 2. Исследование проводилось на белых крысах обоего пола весом 0 г. После дскаиитации, извлечения мозга и гомогенизации мозговой ткани в трисНС1 буфере 0, М, рН7,5 при 4 С определяли количество белка по Лоури и соответственно разводили суспензию. Порции гомогенатов облучали аргоновым лазером 8 нм, 0,1 В гсм2 в течение 1, , 0 или с. Контрольный образец не облучали. После облучения препараты замораживались и после размораживания определяли АТФазную активность. Общую АТФазную активность определяли по приросту количества неорганического фосфата Фи при минутной инкубации препарата при С в среде, содержащей в мМ трисНС1 буфер рН7,4 , натриевая соль АТФ 3, ЫаС1 0, КС1 , МСЬ 5, ЭДТА 0,2. М2АТФазную активность определяли в среде, не содержащей ионы Ыа а ионы К вносили в количестве 0 мМ для уравновешивания ионной силы раствора. Активность 2зависимой Ыа,КАТФазы рассчитывали по разности между общей и М2АТФазной активностями. Активность Са2АТФазы определяли по разности между общей и 1УьАТФазной активностью. С в среде, содержащей в мМ трисНС1 буфер рН7,4 , натриевая соль АТФ 3, СаСЬ 0,, КС1 0, МС1г 5. Л2ЛТФазную активность определяли в той же среде в присутствии I мМ ЭДТА. Конечный объйм реакционной смеси составлял 2 мл, содержание белка в пробах мкг. Реакцию прекращали внесением 0,4 мл трихлоруксусной кислоты. Содержание неорганического фосфата определяли спетрофотометрически по методу Кондрашовой и др. Активность фермента выражали в мкг неорганического фосфата на I мг белка за минут. Статистический анализ результатов экспериментов проводился по 1критерию Стьюдента с использованием стандартных методов Владимирский, . Данные представлены как среднее значение стандартная ошибка М т, или, где указано, доверительные интервалы. Фотобиология имеет более, чем вековую историю, но до настоящего времени влияние видимого света на клетки животных сравнительно мало изучено. Это объясняется их низкой чувствительностью к видимому свету и отсутствием в прошлом достаточно интенсивных источников видимого света. Ранее видимый свет считался неэффективным, и основное внимание уделялось исследованиям ультрафиолетового излучения или фотобиологических процессов, специализированных к восприятию света, например, зрения или фотосинтеза. Интерес к изучению влияния видимого света на неретинальные клетки животных значительно возрос в последние годы в связи с появлением лазеров и широким внедрением их в медицину. Исследование реакций нервных клеток на лазерное облучение актуально ввиду наметившихся перспектив широкого использования лазеров в экспериментальной нейробиологии, нейрохирургии, нейроонкологии, терапии, офтальмологии и других областях фотомелицины. Кроме того, в связи с широким применением лазеров в промышленности, науке, военном деле важное значение имеет и гигиенический аспект, рассматривающий повреждающее действие интенсивного лазерного излучения на различные ткани организма, включая периферические нервные элементы Плетнев, Скобелкин, , , . Действие света на клетки определяется как физическими параметрами излучения, так и оптическими свойствами самих клеток. Важную роль играет степень пигментации клеток, определяющая поглощение света клетками. В нервной системе встречаются как непигментированные их большинство, так и пигментированные нейроны. Влияние света на них различно. В пигментированных клетках фотоиндуцированные реакции в значительной степени определяются природой пигмента, поглощающего свет, поэтому в клетках с разными пигментными системами механизмы действия света различны. Механизмы действия видимого света на непигментированные нейроны в большей мере являются общебиологическими, так как эти нейроны располагают тем же набором биохимических веществ, что и любые другие клегки. На какие компоненты клеток воздействует свег Об этом можно априорно судить по данным о спектрах поглощения света.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.242, запросов: 145