Свойства связывающих центров альбумина: метод исследования в биологических жидкостях и опыт его применения для оценки состояния организма

Свойства связывающих центров альбумина: метод исследования в биологических жидкостях и опыт его применения для оценки состояния организма

Автор: Грызунов, Юрий Анатольевич

Шифр специальности: 03.00.02

Научная степень: Докторская

Год защиты: 2003

Место защиты: Москва

Количество страниц: 180 с. ил.

Артикул: 2622676

Автор: Грызунов, Юрий Анатольевич

Стоимость: 250 руб.

Свойства связывающих центров альбумина: метод исследования в биологических жидкостях и опыт его применения для оценки состояния организма  Свойства связывающих центров альбумина: метод исследования в биологических жидкостях и опыт его применения для оценки состояния организма 

ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. НЕКОТОРЫЕ СВЕДЕНИЯ О СЫВОРОТОЧНОМ АЛЬБУМИНЕ ЧЕЛОВЕКА.
СТРОЕНИЕ, ФУНКЦИИ, СВЯЗЫВАЮЩИЕ ЦЕНТРЫ.
1.1. Какие белки называют альбуминами .
1.2. Метаболизм и распределение альбумина
1.3. Распределение и циркуляция а
1.4. Функции альбумина в организме.
1.4.1. Поддержание онкогического давления плазмы
1.4.2. Связывание и транспорт ннзкомолекулярных веществ и экзогенных лигандов
1.4.3. Альбумин участник окислительновосстановительных реакций в организме
1.4.4. Пластическая функция альбумина.
1.4.5. Регуляция гемостаза
1.4.6. Участие в поддержании кислотноосновного равновесия в крови
1.4.7. Регуляция апоптоза.
1.5. Структура молекулы ммммм1ннннммнннмммммммм1мтммн1мнмм .
1.5.1. Первичная последовательность.
1.5.2. Вторичная структура. Домены
1.5.2.1. Распределение аминокислотных остатков и зарядов
1.5.3. Третичная структура ,
1.5.4. Связывающие центры альбумина.
1.5.5. Классификация центров
1.5.5.1. Главные лекарственные центры.
1.5.5.2. Центр связывания двухвалентных катионов
1.5.5.3. Тиоловая группа остатка Суэ.
1.5.5.4. Центры связывания неэстерифицированных жирных кислот.
1.5.5.5. Минорные центры
1.5.5.6. Другие классификации центров.
1.6. Влияние физикохнмическнх факторов на свойства центров альбумина
1.6.1.1. .
1.6.1.2. Повышение температуры
1.6.1.3. Концентрация неорганических солей
1.6.1.4. Связывание лигандов
1.7. Заключение по главе 1 в
ГЛАВА 2. ФЛУОРЕСЦЕГПЬЙ МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ АЛЬБУМИНА
В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ
2.1. Изучение белков с помощью красителей истории вопроса.
Флуоресцентный зопд К
2.2. Понятия эффективная концентрация альбумина ЭКА и общая концентрация
альбумина ОКА.
. Флуоресцентный метод определения массовой концентрации альбумина
2.3.1. Методика определения
2.3.2. Правильность и воспроизводимость метода.
2.3.3. Сравнение флуоресцентного метода и унифицированного метода с БКП
2.4. Наборы реактивов для флуоресцентного теста .
2.4.1. Состав реактивов
2.4.2. Стабильность реактивов
2.5. Технология выполнения анализа .
2.5.1. Калибровка анализатора
2.5.2. Измерение исследуемой пробы.
2.5.2.1. Подготовка проб
2.5.2.2. Определение показателя эффективная концентрация альбумина ЭКА
2.5.2.3. Определение показателя общая концентрация альбумина ОКА
2.6. Флуоресцентный метод исследования свойств альбумина жидкостей глаза
2.7. Заключение по главе 2
ГЛАВА 3. МОЛЕКУЛЯРНЫЕ МЕХАНИЗМЫ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ
ФЛУОРЕСЦЕНТНОГО МЕТОДА ИССЛЕДОВАНИЯ АЛЬБУМИНА
3.1. Исследование связывании флуоресцентного зонда с макромолекулой
с помощью безызлучателыюго переноса энергии возбуждения
с флуоресцентной метки на зонд
3.1.1. Использование явления безызлучателыюго переноса энергии возбуждения между флуорофорами для исследования связывания зонда с белком.
3.1.2. Изоиндольная флуоресцентная метка как донор энергии возбуждения.
3.1.2.1. Реакция образования изоиндольной метки.
3.1.2.2. Сохранность связывающих центров ЧСА после реакции с ОФА
3.1.2.3. Стабильность флуоресцентной метки
3.1.2.4. Доказательство тушения ортофталсвого альдегида по механизму безызлучателыюго переноса энергии.
3.1.3. Определение параметров связывания К с препаратами альбумина
3.1.3.1. Метод с использованием БПЭ
3.1.3.2. Метод равновесного диализа.
3.2. Размер молекулы альбумина в растворе. Данные рассеяния нейтронов в
3.3. Влияние маркеров связывающих центров альбумина на связывание
и квантовый выход флуоресценции зонда К. .
3.3.1. Лекарственный цетр 1.
3.3.2. Лекарственный центр II.
3.3.3. Центр связывания билирубина
3.3.4. Центр связывания двухвалентных катионов
3.3.5. Тиоловый цсгтр Су.
3.3.6. Влияние лигандов на связывание К с альбумином. Данные ультрафильграции
3.3.7. Конкуренция или аллостерическое взаимодействие между центрами.
3.4. Обсуждение результатов раздела
3.5. Длннноцспочечныс жирные кислоты как регулятор доступности тиола остатка Суя. Конфирмационное сопряжение транспортной
и антиокиелнтелыюй функций альбумина.
3.6. Состояние каких центров альбумина отражает флуоресценции К.
3.7. Анализ гетерогенности альбуминовых центров с применением паиосекуиднон флуоресцентной спектроскопии
3.7.1. Метод изучения гетерогенного затухания флуоресценции в биологических образцах метод амплитудного стандарта.
3.7.2. Выбор специальной среды амплитудного стандарта
3.7.3. Флуоресценция К в растворителях. Возможные механизмы тушения.
3.7.4. Затухание флуоресценции К в альбумине. Спектр конформационных состояний центров альбумина поданным анализа затухания флуоресценции.
3.7.5. Влияние физикохимических факторов
на гетерогенность затухания К из альбумина
3.7.5.1. Гетерогенность состояний альбуминовых центров
в изолированном альбумине и в сыворотке крови человека.
3.7.5.2. Влияние кислотности среды.
3.7.5.3. Влияние иеэстерифицированных жирных кислот
3.7.5.4. Затухание К при изменении ионной силы раствора и в присутствии динамического тушителя флуоресценции .
3.7.5.5. Тушение нитратом флуоресценции АНС в ЧСА
3.7.5.6. Влияние повышения температуры.
3.8. Заключение по Главе 3
ГЛАВА 4. ИНФОРМАТИВНОСТЬ АЛЬБУМИНОВОГО ФЛУОРЕСЦЕНТНОГО ТЕСТА.
КЛИНИЧЕСКИЕ НАБЛЮДЕНИЯ
4.1. Обзор применения флуоресцентного теста
4.2. Изменение связывающих центров альбумина при психических заболеваниях
4.3. Применение флуоресцентного альбуминового теста в офтальмологии
4.4. Критические состоянии. Новый подход к раннему прогнозу распространенного
перитонита данные многоцентрового исследования
ГЛАВА 5. КОНФОРМАЦИОННЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ СВЯЗЫВАЮЩИХ ЦЕНТРОВ АЛЬБУМИНА КАК УНИВЕРСАЛЬНАЯ РЕАКЦИЯ
НА ПАТОЛОГИЧЕСКИЙ ПРОЦЕСС
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРИЛ ОЖЕНИ Е .
Материалы и реактивы.
Фракционирование сыворотки.
Спектральные оптические измерения .
Равновесный диализ .
Проведение экспериментов по малоугловому рассеянию нейтронов
на растворах альбумина человека
Измерение затухании флуоресценции в наносекундном диапазоне
Регистрация сигнала ЭПР радикала аскорбата.
Исследование слезной жидкости и водянистой влаги.
Изучение острого эмоционального стресса у крыс
Открытое поле
Эмоциональный стресс
Введение препаратов.
Определение показателей ЭКА и ОКА.
Определение концентрации неэстсрнфицированных жирных кислот .
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ .
СПИСОК ЦИТИРОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ


Не было выявлено и уменьшения продолжительности их жизни по сравнению с лицами, имеющими обычный уровень альбумина. В то же время, у лиц без анальбуминсмии уровень ЧСА положительно связан с продолжительностью жизни и является независимым антирискфактором общей смертности после лет . Столь глубокая компенсация функций альбумина в онтогенезе, понашему мнению, подчеркивает важную роль этого белка в организме. Этой функции альбумина в настоящее время придается не меньшее значение, чем его способности поддерживать онкотичсское давление т. Круг низкомолекулярных веществ лигандов, который способен обратимо связать альбумин, очень велик. Это метаболиты, среди которых жирные кислоты , желчные пигменты , окись азота , холестерин . Эго металлы как постоянной п2 Са2, i2, так и переменной валентности 2, 2 . Наконец, с альбумином способны связываться практически все известные лекарственные препараты. Тестирование лекарственных средств на способность связываться с ЧСА является обязательным этапом их испытаний. Некоторые лиганды альбумина и аминокислотные остатки, принимающие участие в их связывании, показаны на Рис. Число молекул лигандов, которое одновременно способна удержать одна молекула ЧСА, может достигать десяти и более. Один литр плазмы может нсковалеитио связать более 1 грамма лиганда с молекулярной массой около 0 Дальтон. Некоторые исследователи даже рассматривают ЧСА как ненасыщаемый переносчик . При связывании альбумином окиси азота образуется нитрозотиол, который, по существующим представлениям, является главной транспортной формой в плазме и резервуаром этого важного биологического регулятора . При некоторых заболеваниях, сопровождающихся гипертензией, в частности, при эклампсии беременных, функционирование ЧСА как транспортной формы 0 нарушается ,. Принципиально важным является то, что при связывании лиганда с альбумином химическая иили биологическая активность этого лиганда меняется. ЧСЛ 5. Переносимые альбумином лиганды, как правило, подвергаются деградации в печени. Способность альбумина уменьшать биологическую доступность и активность токсических веществ особенно важна при критических состояниях сепсисе, шоке и др. Таким образом, альбумин является важнейшим звеном в системе детоксикации организма. Для связывания лигандов на молекуле альбумина существуют специальные участки связывающие центры или места связывания. Данные о классификации и свойствах этих центров приведены ниже разделы 1. Здесь отметим, что для многих веществ наблюдается конкуренция за связывающие центры, и это обстоятельство должно обязательно учитываться при назначении лекарственных препаратов. Например, цсфалоспорины и другие антибиотики, связываясь с ЧСА, вытесняют из него билирубин, и у новорожденных с синдромом холсстаза этот эффект может привести к развитию билирубиновой энцефалопатии ,. Возможна и обратная ситуация, когда связывание антибиотика уменьшается или прекращается в присутствии друтого лекарственного средства. Таково, например, действие этамида на связывание пенициллина с альбумином 3. Проблема транспорта ксенобиотиков альбумином хорошо разработана в мире и освещена в монографиях например, 4,5 и в многочисленных статьях. Изменение связывающих свойств альбумина, происходящее при самых различных заболеваниях, зачастую может приводить к усилению токсических эффектов лекарственных веществ, к поражению тканей токсичными метаболитами. Поэтому исследование свойств альбумина, в основном его связывающей способности, необходимо при разработке новых лекарственных средств, дозировании лекарств у больных с поражением печени и почек, а также у детей. Альбумин вносит значительный вклад в антиоксидантную защиту организма ,. Как уже отмечалось, он связывает металлы переменной валентности, например ионы Си2. При этом активность металлов уменьшается в сотни раз. Кроме этого, молекула альбумина содержит одну восстановленную БНгруппу в остатке Суз см. Рис. При этом происходит образование стабильных продуктов дисульфидов, сульфоновых кислот, и альбумин, таким образом, обрывает цепи радикального окисления ,.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.417, запросов: 145