Роль субъединичных контактов в проявлении гемоглобином структурно-функциональных свойств в условиях различного микроокружения

Роль субъединичных контактов в проявлении гемоглобином структурно-функциональных свойств в условиях различного микроокружения

Автор: Вашанов, Геннадий Афанасьевич

Шифр специальности: 03.00.02

Научная степень: Докторская

Год защиты: 2004

Место защиты: Воронеж

Количество страниц: 347 с. ил.

Артикул: 3297012

Автор: Вашанов, Геннадий Афанасьевич

Стоимость: 250 руб.

СОДЕРЖАНИЕ
I. ВВЕДЕНИЕ.
II. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
ГЛАВА 1. СТРУКТУРА, ФИЗИКОХИМИЧЕСКИЕ И
ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ СВОЙСТВА ГЕМОГЛОБИНА.
1.1. Структура молекулы гемоглобина.
1.2. Спектральные характеристики гемоглобина
1.3. Связывание и перенос лигандов гемоглобином.
1.4. Структурнофункциональные особенности некоторых лигандных форм гемоглобина
1.4.1. Структурные особенности и некоторые физикохимические свойства метгемоглобина.
1.4.2. Особенности структуры и физикохимических свойств карбоксигемоглобина.
1.5. Функциональные свойства молекул гемоглобина с различным субъсдиничпым составом
1.6. Структурная организация эритроцитарпон мембраны
1.7. Цитозольная и мембраносвязанная формы внутриэритроцитарного гемоглобина.
III. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Объекты исследования.
2.2. Получение суспензии отмытых эритроцитов
2.3. Получение теней эритроцитов
2.4. Получение растворов оксигемоглобина
2.5. Получение растворов метгемоглобина.
2.6. Получение растворов карбоксигемоглобина
2.7. Получение димеров гемоглобина различного состава.
2.8. Формирование гибридов валентности
2.9. Образование молекул полигемоглобина
2 Образование поперечных сшивок между молекулами полигемоглобина, супсроксидднсмутазы и каталазы
2 Регистрация спектров поглощения
в УФ и видимой областях.
2 Регистрация спектров пропускания в ИКобласти
2 Регистрация кривых диссоциации оксигемоглобина.
2 Определение величины константы Хилла.
2 Определение процентного содержания лигадных форм гемоглобина в растворе.
2 Хроматографическое фракционирование на КМцсллюлозс
2 Регистрация спектров фотофлуоресценции.
2 Определение каталазной активности растворов гемоглобина
2 Определение перокендазной активности растворов гемоглобина
2 Определение супероксиддисмутазной активности.
2 Неэнзиматическое определение содержания фосфатов.
2 Регистрация кривых термоденатурационного плавления гемоглобина в его растворах
2 Проведение сеансов АУФОКтерапни.
2 УФоблучение растворов гемоглобина и
суспензии эритроцитов
2 Определение количества ионогенных групп в белковой макромолекуле методом кислотноосновного титрования
2 Вычисление спектра буферной емкости белка
2 Статистическая обработка результатов экспериментов.
ГЛАВА 3. ИЗУЧЕНИЕ КИСЛОРОДСВЯЗЫВАЮЩИХ СВОЙСТВ
РАЗЛИЧНЫХ СТРУКТУРНЫХ ФОРМ ГЕМОГЛОБИНА.
3.1. Изучение кислородсвязывающих свойств растворов
гемоглобина человека.
3.2. Изучение кислородсвязывающих свойств гемоглобина
в составе эритроцитарных клеток
3.3. Исследование кислородсвязывающих свойств мембраносвязанного гемоглобина.
3.4. Исследование кислородсвязывающих свойств гибридов валентности гемоглобина
3.5. Исследование кислородсвязывающих свойств образцов гемоглобина, содержащих димеры различного состава.
3.6. Исследование кислородсвязывающих свойств образцов полигемоглобина.
3.7. Исследование кислородсвязывающей способности молекул полигемоглобина, содержащих метгемоглобин.
3.8. Исследование кислородсвязывающей способности молекул полигемоглобина, содержащих карбоксигсмоглобин
ГЛАВА 4. ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ УФИЗЛУЧЕНИЯ нм
НА КИСЛОРОДСВЯЗЫВАЮЩИЕ СВОЙСТВА РАЗЛИЧНЫХ СТРУКТУРНЫХ ФОРМ ГЕМОГЛОБИНА
4.1. Влияние УФизлучения на кислородсвязываюшую способность растворов гемоглобина человека
4.2. Влияние УФсвета на кислородсвязывающие свойства внутриэритроцитарного гемоглобина.
4.3. Изучение функциональных свойств фотомодифицированного мембраносвязанного гемоглобина
4.4. Изучение УФчувствительности тотальных димеров гемоглобина.
4.5. Исследование УФчувствительности частично диссоциированных образцов гемоглобина.
4.6. Изучение УФчувствительности гибридов валентности гемоглобина.
4.7. Изучение УФчувствительности молекул полигемоглобина
ГЛАВА 5. ИЗУЧЕНИЕ КИСЛОРОДСВЯЗЫВАЮЩИХ СВОЙСТВ ГЕМОГЛОБИНА, МОДИФИЦИРОВАННОГО
ИНТЕГРАЛЬНЫМ УФИЗЛУЧЕНИЕМ И СЕРОТОНИНОМ.
5.1. Влияние серотонина на кислородтранспортные свойства растворов гемоглобина
5.2. Кислородсвязывающие свойства гемоглобина, подвергнутого сочетанному воздействию УФизлучения и серотонина
5.3. Изучение кислородсвязывающих свойств тотальных димеров гемоглобина, УФоблученных в присутствии серотонина
5.4. Изучение кислородсвязывающих свойств частично диссоциированных молекул гемоглобина,
УФоблученных в присутствии серотонина.
5.5. Исследование УФчувствительности модифицированных серотонином гибридных молекул гемоглобина
5.6. Исследование кислородсвязывающих свойств полигемоглобина, УФоблучеиного в присутствии серотонина
ГЛАВА 6. ВЛИЯНИЕ ДЛИННОВОЛНОВОГО УФИЗЛУЧЕНИЯ нм НА СТРУКТУРНОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ СВОЙСТВА ГЕМОГЛОБИНА
6.1. Влияние ДУФсвета на спектральные свойства гемоглобина
6.2. Влияние ДУФсвета на кислородсвязывающую функцию тетрамеров гемоглобина.
6.3. Влияние ДУФсвета на кислородсвязывающие свойства гемоглобина с измененной структурой субъединичных контактов
6.4. Влияние ДУФсвета на спектральные свойства гемоглобина человека в присутствии серотонина
6.5. Кислородсвязывающие свойства гемоглобина, подвергнутого воздействию ДУФсвета в присутствии серотонина.
6.6. Исследование термодинамических параметров молекул гемоглобина, ДУФоблученных в свободном состоянии и в присутствии серотонина
ГЛАВА 7. ИЗУЧЕНИЕ ДИНАМИКИ ОСНОВНЫХ ЛИГАНДЫЫХ ФОРМ ГЕМОГЛОБИНА В РАСТВОРЕ И В СОСТАВЕ ЭРИТРОЦИТАРНОЙ КЛЕТКИ ПОСЛЕ ВОЗДЕЙСТВИЯ УФИЗЛУЧЕНИЯ
7.1. Влияние интегрального потока УФсвета на содержание основных лигандных форм гемоглобина в растворе.
7.2. Влияние длинноволнового УФсвета на содержание
основных лигандных форм гемоглобина в растворе
7.3. Исследование фоторезистентностн эритроцитов
7.4. Исследование процентного содержания лигандных форм гемоглобина, полученных из супернатанта УФоблученных эритроцитов.
7.5. Исследование процентного содержания лигандных форм гемоглобина, полученных из гематокрита УФоблученных эритроцитов.
ГЛАВА 8. ИССЛЕДОВАНИЕ СОЧЕТАННОГО ВЛИЯНИЯ КАРНОЗИНА И УФИЗЛУЧЕНИЯ НА СТРУКТУРНОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ СВОЙСТВА ГЕМОГЛОБИНА.
8.1. Кислородсвязывающие свойства растворов гемоглобина в присутствии карнознна.
6.2. Кислородсвязывающие свойства растворов гемоглобина, УФоблученного в присутствии карнозина
8.3. Изучение функциональных свойств внутриэритроцитарного гемоглобина, модифицированного карнознном.
8.4. Кислородсвязывающие свойства внутриэритроцитарного гемоглобина, подвергнутого воздействию УФсвета в присутствии карнозина.
8.5. Влияние карнозина на содержание лигандных форм гемоглобина в растворе.
8.6. Исследование сочетанного влияния интегрального потока УФизлучения и карнозина на содержание лигандных форм гемоглобина в растворе
8.7. Исследование сочетанного влияния ДУФизлучсния и карнозина на содержание лигандных форм гемоглобина в растворе.
8.8. Исследование физикохимического состояния комплекса гемоглобинкарнозин методом сканирующей
микрокалориметрии.
ГЛАВА 9. ИССЛЕДОВАНИЕ СТРУКТУРНЫХ ПЕРЕСТРОЕК В МОЛЕКУЛАХ ГЕМОГЛОБИНА ПРИ ФОРМИРОВАНИИ КОМПЛЕКСА С СЕРОТОНИНОМ.
9.1. Исследование флуоресцентных свойств растворов
серотонина
9.2. Изучение флуоресцентных свойств комплекса гемоглобинсеротонин
9.3. Исследование ИКспектров образцов гемоглобинсеротонин
9.4. Влияние серотонина на содержание лигандных форм гемоглобина в растворе
9.5. Определение типов химических реакций между гемоглобином и серотонином
9.6. Зависимость механизма формирования комплекса гемоглобинсеротонин от концентрации и структурного состояния биогенного амина
9.7. Изучение сочетанного влияния интегрального потока УФизлучсния нм и серотонина на содержание лигандных форм гемоглобина в растворе.
9.8. Изучение сочетанного влияния ДУФизлучения нм и серотонина на содержание лигандных форм гемоглобина в растворе
ГЛАВА . ИЗУЧЕНИЕ РОЛИ СУЛЬФГИДРИЛЬНЫХ ГРУПП В ФОТОМОДИФИКАЦИИ ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ СВОЙСТВ ГЕМОГЛОБИНА.
.1.Влияние иодацетамнда на кислородтранспортную функцию гемоглобина.
.2.Изучснис фоточувствительностн гемоглобина в присутствии иодацетамида
.3. Кислородтранспортные свойства гемоглобина крови больных бронхиальной астмой до и после применения АУФОКтсрапин.
.4. Исследование содержания 2,3ДФГ и АТФ в эритроцитах кровп доноров и больных бронхиальной астмой после АУФОКтерапии.
ГЛАВА . СТРУКТУРНОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ СВОЙСТВА УФОБЛУЧЕННЫХ ПОЛИФУИКЦИОИАЛЬНЫХ АССОЦИАТОВ ГЕМОГЛОБИНА
.1. Исследование каталазной активности различных.
.2. Изучение пероксидазной активности
различных структурных форм гемоглобина.
.3. УФчуветвитсяьность молекул полигемоглобина, связанных поперечными сшивками с молекулами супсроксиддисмутазы
.4. УФчувствительность молекул полигемоглобииа, связанных поперечными сшивками с молекулами каталазы
IV. ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
V. ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


В этом случае полосы в видимой части спектра принадлежат замкнутой оболочке порфирина в. ОоШегтапп, . Характерными для оксигенированной формы гемоглобина полосами поглощения в видимой области спектра являются полосы с Хтах при 2 полоса Соре, 2 Рполоса и 6 нм аполоса. Интенсивность двух последних полос значительно меньше интенсивности полосы Соре. Молярный коэффициент экстинкции с для ссполосы равен ,5х 3 лхмоль1хсм1, для рполосы е ,2,2х 3 лхмольхсм1, а для полосы Соре е х 3 лхмольхсм1 Л. А. Блюменфельд, . Между а и Рполосами находится минимум при 0 нм. П.А. Коржуев, . Низкоспиновые полосы 2 и 6 нм иногда относят к синглеттриплетным переходам. Кроме того, в спектре поглощения оксигемоглобина присутствует полоса с Хтах2 нм, обусловленная особенностями железопорфирина В. Г. Артюхов и др. Простетичсская группа и соединенные с ней группы глобина представляют собой структуру с симметрией типа октаэдра С. Е. Малой лов, Д. М. Рифкинд, . Валентные борбитали металла, находящегося в молекуле в октаэдрическом окружении, расщепляются на два подуровня. Подуровень, более высокий по энергии, обозначается как е и включает две с1орбитали с1х2у2 и с2, которые играют ведущую роль во взаимодействии с атомами по стипу. Три 1орбитали в подуровне бху, бч2, с1 изза их пространственной ориентации могут принимать участие только в тгвзаимодействии и вследствие этого имеют более низкую энергию, чем сеорбитали. Расщепление на уровни е и называется расщеплением в октаэдрическом поле окружающих атомов и обозначается 1ЮЧ или Докт. Если 1ЮЧ относительно мало, то шесть валентных 1электронов распространяются на подуровни , и е с образованием максимальной спиновой мультиплетности в соответствии с правилом Гунда высокоспиновый комплекс. Если 1ЮЧ больше, чем энергия спаривания электронов на цорбиталях, то все шесть электронов будут оставаться на подуровне й низкоспиновый комплекс. На каждой из вырожденных разрыхляющих орбиталей кислорода имеется по одному неспаренному электрону. Оксигенирование гемоглобина дает диамагнитный низкоспиновый комплекс, в котором все сэлектроны железа расположены на орбиталях. Дезоксигемоглобин с четырьмя неспаренными электронами находится в высокоспиновом парамагнитном состоянии. Пятикоординационный дезоксигемоглобин не имеет октаэдрической конфигурации. Спектр дезокс и гемоглобина характеризуется в видимой области двумя полосами поглощения полосой Соре высокой интенсивности при 0 нм ех3 лхмольхсм1 и широкой полосой при нм е,9,6х3 лхмольхсм1. В диапазоне длин волн нм в его спектре имеется небольшой перегиб П. А. Коржуев, В. Г. Артюхов, . Спектр поглощения кислых растворов метгемоглобина характеризуется полосами поглощения при Я0 нм с3,,3х3 лхмоль,хсмД0 нм е9,5х3 лхмольхсм1 и интенсивной полосой Соре при Х5 нм ех3 лхмоль,хсм1 Л. А. Блюменфельд, П. А. Коржуев, . В спектре щелочных растворов метгемоглобина появляются две полосы поглощения при А7 нм с8,5х3 лхмоль1хсм1 и А0 нм с9,7х3 лхмоль,хсм1. Полоса Соре смещается в более длинноволновую область Х4 нм, ее интенсивность резко понижается ех3 лхмольсм1 Л. А. Блюменфельд, П. А. Коржуев, . Спектр поглощения карбоксигсмоглобина в УФ и видимом диапазонах длин волн в целом сходен со спектром оксигемоглобнна, однако, наблюдаются некоторые отличия, обусловленные влиянием неионного лиганда полоса Соре сдвинута в более длинноволновую область 0 нм, максимум аполосы приходится на 0 нм, рполосы на 0 нм в УФдиапазоне регистрируются полосы при нм и при нм П. А. Коржуев, М. В. Волькенштейн, . Способность лигандов , СО, 0 переводить комплекс из высокоспинового в низкоспиновое состояние, повидимому, обусловлена связыванием, которое приводит к дальнейшему понижению энергии орбитали. Кроме того, введение шестого лиганда вызывает приближение железа к плоскости порфирина, и это в свою очередь усиливает поле последнего. Таким образом, изложенные в настоящем разделе сведения позволяют идентифицировать различные лигандные формы гемоглобина в образцах и на основании анализа спектральных свойств выявлять структурные переходы в молекулах гембелка.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.203, запросов: 145