Рекомбинантные α-галактозидазы А и С, пектинлиаза и фитаза Penicillium canescens

Рекомбинантные α-галактозидазы А и С, пектинлиаза и фитаза Penicillium canescens

Автор: Фёдорова, Екатерина Александровна

Шифр специальности: 02.00.15

Научная степень: Кандидатская

Год защиты: 2007

Место защиты: Москва

Количество страниц: 162 с.

Артикул: 4023562

Автор: Фёдорова, Екатерина Александровна

Стоимость: 250 руб.

Рекомбинантные α-галактозидазы А и С, пектинлиаза и фитаза Penicillium canescens  Рекомбинантные α-галактозидазы А и С, пектинлиаза и фитаза Penicillium canescens 

ВВЕДЕНИЕ
ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР
ГЛАВА I. аГАЛАКТОЗИДАЗЫ
1. Природные галактозосодержащие соединения
1.1 Г алактоолигосахариды
1.2 Галактоманнаны, галактоглюкомаинаны
2. аГ алактозидазы
2.1 Продуценты агалактозидаз
2.2 Гликозилгидролазные семьи агалактозидаз
2.3 Биохимические свойства агалактозидаз
2.4 Каталитические свойства агалактозидаз
3. Применение агалактозидаз
3.1 Кормовая промышленность
3.2 Пищевая промышленность
3.3 Целлюлознобумажная и текстильная промышленность
ГЛАВА II. ПЕКТИ1ГЛИАЗЫ
1. Пектин
1.1 Основная цепь молекулы пектина
1.2 Боковые цепи молекулы пектина
1.3 Неуглсводныс заместители в молекуле пектина
2. Пектин и пектатлиазы
2.1 Структурная характеристика пектин и пектатлиаз
2.2 Каталитические свойства пектин и пектатлиаз
3.рименепие пектина и пектинлиаз
3.1 Пищевая промышленность
3.2 Кормовая промышленность
3.3 Текстильная и целлюлознобумажная промышленность
ГЛАВА III. ФИТАЗЫ
1. Фитиевая кислота и е соли
1.1 Строение фитисвой кислоты
1.2 Содержание лмоинозит фосфатов в растительном сырье
1.3 Физикохимические методы определения содержания фитиевой кислоты
в образцах
2. Фитазы
2.1 Продуценты фитаз
2.2 Классификация фитаз
2.3 Биохимические свойства фитаз
2.4 Каталитические свойства фитаз
3. Применение фитаз
3.1 Кормовая промышленность
3.2 Пищевая промышленность
3.3 Медицина ГЛАВА IV. ХАРАКТЕРИСТИКА ШТАММОВ III С
КАК ПРОДУЦЕНТОВ РЕКОМБИНАНТНЫХ ФЕРМЕНТОВ
ЭКПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
ГЛАВА V. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
1. Использованные вещества
1.1 Ферментные препараты
1.2 Субстраты
1.3 Прочие реактивы
1.4 Хроматографические сорбенты
2. Методы
2.1. Выделение и очистка индивидуальных ферментов .
2.2 Определение концентрации белка
2.3 Определение биохимических характеристик ферментов
2.4 Методы определения активности ферментов
2.4.1 Определение активности по полисахаридным субстратам
2.4.2 Определение активности по ииитрофенильным производным сахаров
2.4.3 Определение пектинлиазной активности
2.4.4 Определение фнтазной и фосфатазной активности
2.5 Определение температурного и рНоптимума действия ферментов
2.6 Изучение термо и рНстабильности ферментов
2.7 Определение кинетических параметров действия ферментов Кт, V, К.
2.8 Исчерпывающий гидролиз специфических субстратов
2.9 Высокоэффективная тонкослойная хроматография ВЭТСХ продуктов гидролиза фитата
2. Высокоэффективная жидкостная хроматография ВЭЖХ продуктов гидролиза ГМ и галактоо.тигоеахаридов
2. Изучение влияния эффекторов на активность ферментов
2. Изучении влияния соков желудочнокишечного тракта свиней на свойства фитазы
2. Прикладные испытания ферментов
Оценка способности пектинлиазы осветлять яблочный сок
Изучение способности пектинлиазы увеличивать выход сока из ягод
Конверсия вт оричного продукта переработ ки сои агалактозидазами
Оценка способности ферментов увеличивать питательную ценность кормов V vi
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
ГЛАВА VI. ПОЛУЧЕНИЕ ПРЕПАРАТОВ РЕКОМБИНАНТНЫХ аГАЛАКТОЗИДАЗ А И С, ПЕКТИНЛИАЗЫ И ФИТАЗЫ НА ОСНОВЕ НОВЫХ ШТАММОВ .
1. Создание новых конструкций на основе штаммов .
2. Характеристика ферментных препаратов, полученных с помощью штаммов ., несущих гены гомологичных агалактозидаз, пектинлиазы
и фитазы
ГЛАВА VII. ВЫДЕЛЕНИЕ И СВОЙСТВА РЕКОМБИНАНТНЫХ аГАЛАКТО
ЗИДАЗ А И С, ПЕКТИЛИАЗЫ И ФИТАЗЫ .
1. Выделение гомогенных ферментов
2. Свойства гомогенных ферментов
2.1 аГалактозидазы А и С
2.1.1 Субстратная специфичность и классификация
2.1.2 и температурные оптимумы активности
2.1.3 Стабильность
2.1.4 Устойчивость к термошоку
2.1.5 Кинетические характсрист ики
2.1.6 Влияние эффекторов на активность
2.2 Пектинлиаза А
2.2.1 Субстратная специфичность
2.2.2 и температурные оптимумы активности
2.2.3 Стабильность
2.2.4 Устойчивость к термошоку
2.2.5 Кинетические характеристики
2.2.6 Влияние эффекторов на активность
2.3 Фитаза Л
2.3.1 Субстратная специфичность
2.3.2 и температурные оптимумы активности
2.3.3 Стабильность
2.3.4 Устойчивость к термошоку
2.3.5 Кинетические характеристики
2.3.6 Влияние эффекторон на активность
ГЛАВА VIII. ПРИКЛАДНЫЕ ИСЫТАНИЯ ФЕРМЕНТОВ
1. Оценка эффективности применения ферментного препарата рекомбинантной
Пел . в процессах получения соков
1.1 Получение сока из клюквы
1.2 Осветление яблочного сока
2. Гидролиз вторичного продукта переработки сои ферментным препаратом рекомбинантной аГал С .
3. Оценка способности ферментов . повышать питательную
ценность кормов i vi
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Основная цепь галактоглюкоманнаиа сформирована р1,4связанными остатками Оманнопиранозы и глюкопираиозы, а боковые цепи а1,6присоединенными остатками Огалактозы. Кроме того, в среднем каждое четвртое звено основной цепи Еглюкопираноза ацетилнровано по С2 или С3 атомам. Выделяют два типа галактоглюкоманнанов с высоким и низким содержанием галактозы. В первом, составляющем 5 сухой массы хвойной древесины, соотношение галактоза глюкоза манноза можно представить как 3 во втором, составляющем от сухой массы хвойной древесины, как 0. Таблица 1. Состав галактоглюкоманнанов мягких пород деревьев . ОЛ с 0. ООа р 0. О Ас 0. Галактомаииан ГМ имеет сходную, но более простую структуру , , . ГМ представляют собой гетерополисахариды, построенные из остатков галактозы и манпозы. Основная цепь ГМ состоит из р1,4связаниых остатков маннозы, а боковые ветви из единичных звеньев галактозы, присоединнных а1,6связями см. Главная цепь макромолекул ГМ построена, как правило, из маннозных остатков двух типов 4замещнных и С4,6дизамещнных. ГМ в изобилии присутствуют в эндосперме и зрелых семенах растений . Например, они обнаружены в семенах растений из семейств Атопасеае, i, vv, , , i, v, , , ii, i и, возможно, . Особое положение занимают ГМ семейства бобовых , поскольку на их долю приходится более общего числа исследованных ГМ см. В семенах растений ГМ выполняют энергетическую при прорастании, водоудерживающую при набухании семян и защитную функции. Энергетическая функция является основной, поэтому ГМ относятся к группе запасных полисахаридов . Важнейшей характеристикой ГМ, определяющей их физикохимические свойства плотность, растворимость, вязкость растворов и др. М.Т в полимерной молекуле , . Этот параметр сильно варьирует в зависимости от источника галактоманнана. Гак, у ГМ бобовых соотношение МГ варьируется от до 5. ГМ некоторых пальм описываются соотношением МГ или 1 их иногда относят к маннанам. Отсутствие прочной связи с другими полимерами клетки позволяет извлекать ГМ водной экстракцией. Измельчнные тем или иным способом семена бобовых экстрагируют холодной или горячей водой, после чего полисахариды осаждают этиловым спиртом . В настоящее время в промышленном масштабе производятся три ГМ из эндосперма семян бобового растения, повсеместно выращиваемого в Индии и Пакистане, i . Карубин является нейтральным, не образующим гелей полисахаридом с соотношением М. Т 3 , . Степень полимеризации СП молекул гуарана больше, чем СП тарагалактоманнана, и оба они превышают по СП молекулы карубина . Ман,
т
Рисунок 3. Схема строения галактоманианов классическая т число незамещенных остатков маннозы, может принимать значения от 0 до 4 п степень полимеризации . Таблица 2. ГМ семян некоторых видов семейства аЬисеае ЫпЛ. Подсемейство 1. Подсемейство 2. Подсемейство 3. I i v . Ii ii . В году из дрожжей был выделен фермент, способный гидролизовать дисахарид мелибиозу, названный мелибиазой , . Позднее, изучение специфичности действия этого фермента на различные углеводные субстраты, содержащие концевые аОгалактозидные группы, дало основание Вайденхагену изменить название мелибиаза на агалактозидаза 4. Галактозидазы аЛгапактозид галактогидролазы, КФ 3. Схема реакции гидролиза представлена па рис. СН2ОН
О. Рисунок 4. Схема реакции гидролиза, катализируемой агалактозидазами. К продуцентам агалактозидаз относятся большое число микроорганизмов микроскопические грибы, дрожжи, бактерии, множество растений и ряд животных. Галактозидазы широко представлены в растительном мире табл. Высокая агалактозидазная активность наблюдается в прорастающих семенах , где агалактозидазы осуществляют конверсию олигосахаридов раффинозной семьи. Авторами было продемонстрировано, что при прорастании бобов количество олигосахаридов раффинозной группы уменьшается. Одновременно с этим увеличивается содержание фруктозы, что подтверждает гидролиз фруктозосодержащих олигосахаридов. Другая функция агалактозидаз рас тений это участие в модификации текстуры созревающих плодов. Например, при созревании папайи i .

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.203, запросов: 121