Функционирование и структура белков (ферментов) в коллоидных системах, на поверхности раздела фаз и в микроэмульсиях

Функционирование и структура белков (ферментов) в коллоидных системах, на поверхности раздела фаз и в микроэмульсиях

Автор: Кудряшова, Елена Вадимовна

Шифр специальности: 02.00.15

Научная степень: Докторская

Год защиты: 2009

Место защиты: Москва

Количество страниц: 320 с. ил.

Артикул: 4698233

Автор: Кудряшова, Елена Вадимовна

Стоимость: 250 руб.

Функционирование и структура белков (ферментов) в коллоидных системах, на поверхности раздела фаз и в микроэмульсиях  Функционирование и структура белков (ферментов) в коллоидных системах, на поверхности раздела фаз и в микроэмульсиях 

ВВЕДЕНИЕ
1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.
1.1. КОМПЛЕКСЫ БЕЛКОВ С ОСНОВНЫМИ КЛАССАМИ ПРИРОДНЫХ СОЕДИНЕНИЙ. ВЗАИМНОЕ ВЛИЯНИЕ КОМПОНЕНТОВ КОМПЛЕКСОВ.
1.1.1. Углеводбелковые комплексы и конъюгаты.
1.1.2. Липопротеидные комплексы.
1.1.3. Модельные мембраноподобные системы
1.1.3.1. Липосомы
1.1.3.2. Обращенные мицеллы
1.1.3.3. Смешанные обращенные мицеллы.
1.1.4. Суиъединичные белки
1.1.5. Комплексы белков с полиэлектролитами.
1.1.6. Комплексы белков с нуклеиновыми кислотами.
1.1.7. Комплексы белков с олигоэлектролитами, олигоаминами.
1.1.8. Ковалентные конъюгаты ферментов с полиспиртами.
1.2. ФИЗИКОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ АНАЛИЗА СТРУКТУРЫ БЕЛОКСОДЕРЖАЩИХ КОМПЛЕКСОВ. ФЛУОРЕСЦЕНТНЫЕ МЕТОДЫ
1.2.1. Применение методов АТ Я и КД спектроскопии для исследования структуры белков
1.2.2. Флуоресцентные методы исследования структуры белков
1.2.2.1. Метод флуоресцентной спектроскопии.
1.2.2.2. Методы тушения флуоресценции
1.2.2.3. Флуоресцентная анизотропия
1.2.2.4. Применение флуоресцентных методов для исследования молекулярной подвшсности белков.
1.3. ИССЛЕДОВАНИЕ МОЛЕКУЛЯРНЫХ СВОЙСТВ БЕЛКОВ АДСОРБИРОВАННЫХ НА ПОВЕРХНОСТЯХ РАЗДЕЛА ФАЗ ВОДАВОЗДУХ И ВОДАМАСЛО.
1.3.1. Метод мономолекулярных слоев
1.3.2. Адсорбция белков на гидрофобных флюидных поверхностях, водавоздух и водамасло .
1.3.3. Методы слежения за адсорбцией белков на поверхностях водавоздух и водамасло исследование реологических свойств белковых пленок.
1.3.4. Методы исследования структурных свойств белков на поверхностях водавоздух
2. ПОСТАНОВКА ЗАДАЧИ
3. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
3.1. МАТЕРИАЛЫ
3.2. МЕТОДЫ.
3.2.1. Каталитическая активность ферментов в водных растворах и водно
орган ических смесях
3.2. 1. 1. аХимотрипсин ХТ.
3.2.1.2. Трипсин Т.
3.2.1.3. Пероксидаза хрена 1РХ.
3.2.1.4. Лизоцим из куриного яйца.
3.2.1.5. Щелочная протеаза
3.2.1.5. Целлюлоза.
3.2.2. Солюбилизация, сворачивание и изучение каталитической активности ферментов в системе обращенных мицелл АОТ.
3.2.2.1. Определение каталитической активности КФ в обращенных мицеллах
3.2.2.2. Солюбилизация и сворачивание ферментов галактозоксидаз, x и Баа1ох, в системе обращатых мицелл А ОТ.
3.2.2.3. Сворачивание ТсСАЬ в системе обращенных мицелл АОТ.
3.2.2.4. Определение каталитической активности пгидроксибензоатгидроксилизы РНВН
в системе 6одаДМСО и в системе обращенных мицелл АОТ.
3.2.3. Приготовление модифицированных препаратов белков и ферментов
3.2.3.1. Ковалентная модификация ферментов и белков ХТ и овальбумина, приготовление термоденатурированного препарата ОБА
3.2.3.2. Введение флуоресцентных меток овальбумип, ХТ. РНВН, Злактоглобулии.
3.2.3.3. Приготовление комплексов ферментов и белков с полиэлектролитами и
олигоаминами
3.2.4. Исследование структурных свойств ферментов и белков в гомогенных и
микр о гетер о генных системах, в растворах и системах обращенных мицелл ПАВ
3.2.4.1. Флуоресцентная спектроскопия
3.2.4.2. Измерение стационарной флуоресцентной анизотропии 1.
3.2.4.3. Спектроскопия кругового дихроизма
3.2.4.4. Седиментационный анализ 2.
3.2.5. Исследование термодинамических характеристик ферментнолиэлектролитных
комплексов
3.2.5.1. Изучение комплекса ХТ с ПБ методом флуоресцентной спектроскопии с использованием эозина.
3.2.5.2. Определение стехиометрии и констант диссоциации комплексов ХТ с олигоаминами
в воде и в системе водаэтанол методом равновесного диализа
3.2.6. Исследование адсорбции и структурных свойств белков на поверхности водавоздух
3.2.6.1. Тензиометрия метод автоматической капельной тензиометрии,
3.2.6.2. Изучение реологических свойств поверхности водавоздух при адсорбции белков с использованием Ленгмюровской техники
3.2.6.3. Измерение Фурье ИКспектров поглощения метод спектроскопии нарушенного полного отражения, 1
3.2.6.4. Измерение ИК спектров в режиме отражения, I.
3.2.6.5. Измерение трансляционной диффузии белков методом флуоресцентной корреляционной спектроскопии
3.2.6.5.1. Измерение трансляционной диффузии пгидроксибензоатгидроксилазы, меченной Алекса8, Алекса8РНВН в объемной фазе в водных растворах и в системе водаДМСО методом .
3.2.6.5.2. Измерение трансляционной диффузии и профиля распределения концентрации овальбумина, меченного iv , на поверхности водавоздух методом
3.2.6.6. Разрегиениовременная флуоресцентная анизотропия
4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.
4.1. БЕЛКИ И БЕЛОКСОДЕРЖАЩИЕ КОМПЛЕКСЫ НА ПОВЕРХНОСТИ ВОДАВОЗДУХИА ПРИМЕРЕ ОВАЛЬБУМИНА ИЗ КУРИНОГО ЯЙЦА ОВА И МОЛОЧНОГО В ЛАКТОГЛОБУЛИНА
4.1.1. Метод инфракрасной абсорбционнорефлекционной спектроскопии I.
4.1.2. Молекулярная подвижность белков на поверхности водавоздух.
4.1.3. Трансляционная диффузия белков на поверхности водавоздух
4.1.4. Роль межмолекулярпых взаимодействий в формировании и свойствах поверхностного слоя белка при адсорбции на поверхности водавоздух
4.1.5. Молекулярные свойства овальбумина в условиях сжатия пленки.
4.1.6. Взаимосвязь поверхностной активности белков с их пепообразующей способности
4.1.7. Влияние комичексообразовапия с пектином па адсорбционные свойства белков
4.1.8. Вращательная динамика комплексов ОВАпектип и пектин па поверхности водавоздух.
4.2. РЕГУЛЯЦИЯ ОЛИГОМЕРНОГО СОСТАВА ФЕРМЕН ТОВ В СИСТЕМЕ ОБРАЩЕННЫХ МИЦЕЛЛ ПАВ
4.2.1. Рефолдингрекомбинантных ферментов, образующихся в виде тел включения в системе обращенных мицелл ПАВ
4.2.2. Роль межсубъединичного взаимодействия в функционировании парагидроксибензоатгидроксилазы РНВН и x.
4.2.3. Влияние природы липидов на каталитическую активность кислой фосфатазы
4.3. ФЕРМЕНТЫ В СОСТАВЕ ФЕРМЕНТПОЛИЭЛЕКТРОЛИТНЫХ КОМПЛЕКСОВ И КОВАЛЕНТНЫХ КОНЪЮГАТОВ С ПОЛИАЛКИЛЕНОКСИДАМИ В НЕВОДНЫХ СРЕДАХ.
4.3.1. Ковалентная модификация ферментов гидрофильными и гидрофобными низкомолекулярными соединениями .
4.3.2. Ферментпол иэлектролитные комплексы в водноорганических средах
4.3.3. Молекулярные механизмы влияния комплексообразования с ПЭ на функциональную активность и стабильность ферментов
4.3.4. Регуляция каталитической активности и стабильности ферментов путем образования конъюгатов ферментов с полиспиртами
4.3.5. Регуляция каталитической активности и стабильности ферментных препаратов щелочной протеазы и целлюлозы при комплексообразовании с хитозаном для
применения в составе синтетических моющих средств СМС
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Благодаря нолуспнтетической природе можно широко варьировать их размеры, характеристики, состав поверхности. Это позволяет использовать липосомы в качестве носителей для широкого круга фармакологически активных веществ противоопухолевые и противомикробные препараты, гормоны, ферменты, вакцины, а также дополнительные источники энергии для клетки, генетический материал . Втретьих, липосомы сравнительно легко разрушаются в организме они бнодеградируемы, высвобождая доставленные вещества. В процессе доставки лекарств липосомы, сами лишенные свойств антигена, экранируют включенные в них биоактивные молекулы от контакта с иммунной системой, не вызывая защитных и аллергических реакций организма. Кроме того, вещество, заключенное в липосомы, защищено от воздействия ферментов, что увеличивает эффективность препаратов, подверженных биодеструкции в биологических жидкостях. Особую роль играет характер взаимодействия липосом с клетками. Оно может принимать разные формы самая простая липосомы адсорбируются на клеточной поверхности. При определенных условиях липосомы могут поглощаться клетками, их мембрана может сливаться с клеточной мембраной, что приводит к внутриклеточной доставке их содержимого рис. Рис. Способы проникновения содержимого липосом в клетку . Как носители лекарств липосомы наиболее широкое применение получили в экспериментальной онкологии. Суть в том, что существует ряд препаратов, весьма эффективно разрушающих злокачественные клетки или тормозящих их рост. Однако применить их в терапевтических целях не всегда возможно изза их большой токсичности или плохой растворимости в воде. С помощью липосом эти трудности могут быть преодолены. Липосомы можно использовать также для борьбы с инфекционными заболеваниями. Показательными в этом плане могут служить экспериментальные данные по лечению с использованием липосомных преператов герпесной инфекции, лейшманиоза болезнь поражает печень, селезенку, костный мозг, а также некоторых грибковых заболеваний. Существует две причины, вследствие которых липосомальные препараты антиканцерогенных а также противовоспалительных субстанций очень эффективны уменьшение токсичности и возможность направленной доставки лекарства например, химиотерапевтических препаратов в место локализации опухоли. Речь идет о соотношении размеров наночастиц и диаметра пор капилляров. Так как размер частиц больше диаметра пор капилляров, их объем распределения ограничивается компартамейтом введения. Например, при внутривенном введении они не выходят за пределы кровотока, т. Следовательно, резко понижается токсическое действие субстанции, включенной в липосомы. Таким образом, лекарство будет накапливаться в очагах воспаления . Это явление получило название пассивное нацеливание рис. Таким образом, существует две причины, вследствие которых липосомальные препараты антиканцерогенных субстанций очень эффективны уменьшение токсичности и пассивное нацеливание . Уменьшение объема распределения и, след. Рис. Пассивное нацеливание . Использование липосом для точной, целенаправленной доставки лекарственных веществ имеет, однако, и определенные сложности. Дело в том, что после попадания в организм большая часть липосом поглощается клетками ретикулозидотелиальной системы РЭС. Это происходит вследствие взаимодействия липосом с бежами плазмы опсопинами. Опсонниы метят липосомы, делают их мишенями для клеток РЭС, состоящей в основном из макрофагов, способных поглощать из крови посторонние частицы и уничтожать их. Наибольшее скопление этих клеток находится в печени, селезенке, костном мозге, лимфатических узлах и кровотоке. Поэтому, если цель введения липосом заключается в их контакте с клетками РЭС, то проблем почти не возникает липосомы туда попадут возбудители некоторых инфекционных заболеваний находятся именно в таких клетках. Если же требуется, чтобы липосомы доставили свое содержимое в другие места, то добиться этого сложнее. Для увеличения времени циркуляции липосомальных препаратов было предложено их поверхность модифицировать полимерами с гибкой гидрофильной цепью, например полиэтилен гликоле ПЭГ .

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.192, запросов: 121