Гидрофобизованные препараты водорастворимых физиологически активных белков

Гидрофобизованные препараты водорастворимых физиологически активных белков

Автор: Тюрина, Ольга Петровна

Шифр специальности: 02.00.15

Научная степень: Кандидатская

Год защиты: 2000

Место защиты: Москва

Количество страниц: 172 с. ил.

Артикул: 2267167

Автор: Тюрина, Ольга Петровна

Стоимость: 250 руб.

Гидрофобизованные препараты водорастворимых физиологически активных белков  Гидрофобизованные препараты водорастворимых физиологически активных белков 

ВВЕДЕНИЕ.
ГЛАВА 1. КОВАЛЕНТНАЯ ГИДРОФОБИЗАЦИЯ БЕЛКОВПЕПТИДОВ
1.1. Методы ковалентной пшрофобизации белковпептидов
. . I. Использование фосфолипидов.
1.1.2. Ацилировапие белковпептидов производными органических
кислот и аминов
1.2. Среды для ковалентной гидрофобию ции белковпетндов производными жирных кислот
1.3. Влияние ковалентной гндрофобнзацин на физико химические свойства белковпептидов .
ГЛАВА 2. НЕКОВАЛЕНТНАЯ ГИДРОФОБИЗАЦИЯ БЕЛКОВ ФОСФОЛИПИДАМИ
2.1. Классификация и физикохимические характеристики фосфолипидов
2.1.1. Моральные системы липидов.
2.1.2. Основные фичовые состояния воднолипидных
2. 1.3. Методы изучения полиморфизма липидов
2.1.4. Методы определения средних размеров липидных агрегат.,в
2. .5. Агрегация липидных везикул
2.2. Комплексообразованне водорастворимых белков с фосфолипидами
2.2.1. Мехаптм и природа сил комплексообрачования
водорастворимых баков с фосфолипидами.
2.2.2. Влияние бачковпептидов па полиморфизм фосфолипидов
2.2.3. Влияние нековалентпой гидрофобизации фосфолипидами на активность и стабильность белков.
ГЛАВА 3. КОВАЛЕНТНАЯ И НЕКОВАЛЕНТНАЯ
ГИДРОФОБИЗАЦИЯ БЕЛКОВ КАК СПОСОБ УВЕЛИЧЕНИЯ ИХ СРОДСТВА К МЕМБРАНЕ И ПРОНИКНОВЕНИЯ ВНУТРЬ КЛЕТОК.
ГЛАВА 4. ВОДОРАСТВОРИМЫЕ БЕЛКИ ВРТ И ТРИПСИН КАК ОБЪЕКТЫ ГИДРОФОБИЗАЦИИ
4.1. Структура и свойства молекул ВРТ и трипсина.
4.2. Перспективность гидрофобизации ВРТ и трипсина.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ ГЛАВА 5. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
5.1. Исходные вещества
5.2. Методы исследования
5.2.1. Модификация 1РТ производными жирных кислот
А л системе Л ОХ уОди океан
Б в системе обращенных мицелл АОТНОоктан.
II к среде органических растворителей ДМСОДМФАдиоксанпиридин
5.2.2. Отделение НРТ, ацилироваипого производными жирных кислот, от нативного белка путем июионного осаждения
5.2.3. Определение содержания аминогрупп в отпированных препаратах РТ
5.2.4. Модификация НИТ фосфат иди л этан ол амин ом с помощью водорастворимого карбодиимида
5.2.5. Получение мультиламеллярпых и моноламеллярных везиккч .
5.2.6. Получение комплексов трипсина с ф ос фолчпидпыми препаратами.
5.2.7. Получение, комплексов ВРТ1 с фпсфолипидными препаратами мулыпиламеллярными везикулами и малыми монолимеллярн ыми вези кулими.
5.2.8. Определение содержания фосфолипидов по методу Васьковского
5.2.9. Определение содержания белка в гидрофобызова иных препаратах
Л метод Бредфорд
Б метод Лоури
В модифицированный метод Лоури.
5.2 Определение активности трипсиплипидных комплексов
5.2 Определение аптитриптической активности
ацилироваппьрс препаратов ИРТ1.
Б В РТлипидных комплексов
ВРТБлипидных комплексов в присутствии ЛОХ .
5.2 Фазовое распределение гидрофобизованных препаратов ВРТ1 и трипсина в системе, водатритон Х4
5.2 Электрофорез препаратов баков в полиакриламидном гене 1.чазлектрофоре и электрофорез в системе ЯахГей.
5.2 Определение константы ингибировиния зластазы лейкоцитов человека препаратами ВРТ1.
5.2 Гезъфипьтрация комыексов 1 с малыми мополамезлярп ыми везикулами ММII.
5.2 Измерение зависи.чости светорассеяния малых моноламеллярных везикул ММВ от концентрации ВРТ1.
5.2 Вторая производная спектров УФ поглощения ацилированных препаратов ВРТ1.
5.2 Регистрации спектров Флуоресценции трипсина и трипсин
липидных комплексов
5.2 Определение размера ММ В методом квазиупругого светорассеяния.
5.2 Определение размера МЛ В и бюклипиднмх комплексов методом турбидиметпии
5.2 Метод РЯМР спектроскопии высокого разрешения.
5.2 Метод РЯМР спектроскопии широких линий
5.2 Изучение захвата ицилироваиных препаратов ВРТ1 монослоем Сасо2 клеток
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
ГЛАВА 6. КОВАЛЕНТНАЯ ГИДРОФОБИЗАЦИЯ ВРТ
6.1. Ацилирование ВРТ1 производными жирных кислот
6.1.1. Реакционные среды ацилипования ВРТ
6.1.2. Влияние органических растворителей па свойства нативного препарата ВРТ
6.1.3. Выбор оптимальных условий для модификации ВРТ и выделения ацилированных препаратов в среде органических растворителей
6.1.4. Сравнительные характеристики гидрофобизованных препаратов РТ
6.1.5. Ингибирование элаетазы лейкоцитов человека препаратами ВРТ
6.1.6. Изучение захвата препаратов ВРТ1 монослоем Сасо2 клеток .
6.2. Модификация ВРТ фосфатиди, птаноламином с помощью
карбодинмида
ГЛАВА 7. НЕКОВАЛЕНТНАЯ ГИДРОФОБИЗАЦИЯ ВРТ И
ТРИПСИНА.
7.1. Характеристика липидных препаратов.
7.1.1. Состав фосфолипидного экстракта сои ЛГ.
7.1.2. Состав фосфолипидного экстракта сои, обработанного 0,1 М
УдС ЛИ2.
7.1.3. Модельные системы фосфолипидов
7.1.4. Размер фосфолипидаых агрегатов липидных препаратов сои в воде
7.1.5. Структурная организация липидных препаратов сои в воде
1.2. Комплексообразопание ВРТ и трипсина с соевыми липидами
7.2.1. Гельфильтрация ВРТ1липидиых комплексов
7.2.2. Изучение агрегации ММ В под действием ВРТ 1 методом турбидиметрии.
7.2.3. Оптимизация параметров комплексообразования ВРТ и трипсина с соевыми фосфолипидами
7.2.4. Влияние трипсина и ВРТ на размер и структуру фосфолипидов
7.2.5. Изучение гидрофобности белоклипидных комплексов.
7.2.6. Изучение состава трипсин и ВРПлипидиых комплексов
7.2.7. Зависимость активности трипсина от концентрации его комплексов с липидами.
7.2.8. Изучение активности трипсин и ВРТ1липидных комплексов в присутствии детергентов.
7.2.9. Исследование стабильности трипсина в составе комплексов с липидами
СПИСОК Л ИТЕРА ТУТЫ.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ЧГидроксисукцнннмиднын эфир стеариновой кислоты КАББА
1 идроксисукцшшмидный эфир олеиновой кислоты ИАБОА
Дезокенхолат натрия дох
Димстилсульфоксид дмсо
Диметил формам ид ДМФА
Димиристонлфосфатидилхолин ДМФХ
Диоктилсульфосукцинат натрия аэрозоль ОТ ЛОТ
Диолсоилфосфатндилхолин ДОФХ
Диолеоилфосфатидилэтаноламин ДОФЭ
Дипальмитоилфосфатидилхолин ДГФХ
Додецилсульфат натрия РБХа
Кардиолипин кл
Моноламсллярныс везикулы ММВ
Мультнламеллярные везикулы МЛВ
рНитроанилин рКа
Основной панкреатический ингибитор протеиназ ВРТ
Полиакриламидный гель ПААГ
Тонкослойна хроматография тех
Тришпробензол сульфокислота ТНБС
Трипсин Тр
Фосфатидилглицернн ФГ
Фосфатидилинозит ФИ
Фосфатидил серии ФС
Фосфатндилхолин ФХ
Фосфатнпилэтаноламин ФЭ
Фосфатидная кислота ФК
Цитраконовый ангидрид ЦА
1 Этнл диметиламннои1Юпилкарбодиимид ЕОС
Этиловый эфир бнзилгинин, гидрохлорид ВАЕЕ
Ядерный магнитный резонанс ЯМР
ВВЕДЕНИЕ


Данная реакция происходит при участии ферментов I vi наиболее изученными являются ферментативные процессы хшристоилирования и пальмитоилирования белков. Показано, что миристнновая кислота взаимодействует с аамино группой концсвого . Реакция катализируется миристонлтрансфсразой, а мирнс гоилдонором является миристоилСоА. В отсутствие белкового субстрата между ацилтрансферазой и мнрнстоилСоА i vi образуется достаточно прочный комплекс, который затем при добавлении субстрата способствует взаимодействию ацнлтрансферазы с белком . Пальыитонлнрованис значительно отличается от миристоилнрования Пальмитиновая кислота связывается с белком через тнозфирную связь, например с цистенном . Итак, в этом пункте была проанализирована специфика химических реакций гидрофобизации белков. Наиболее многообещающим и распространенным методом модификации с целью увеличения сродства белков к мембранам клеток является ацнлированнс производными жирных кислот. Далее будут подробно рассмотрены известные среды ковалентной гидрофобизации с помощью данных реагентов. Среды для ковалентной гидрофобизации бе. Химическая модификация белков лежит в основе многих методов получения белковых препаратов для прикладной энзимологни. К сожалению, во многих случаях выбор модифицирующего реагента ограничен, как правило, соединениями гидрофильной природы например, производными короткоцепочечных органических кислот, поскольку реакционной средой для модификации является вода или водные растворы. Методы, основанные на использовании водной среды, относятся к наиболее ранним методам гидрофобизации белков, поэтому по этой теме известно большое количество литературы Водорастворимость реагентов делает данный метод более простым и досту пным для гидрофобизации гидрофильных белков и снимает такие вопросы, как влияние растворителя на растворимость белков, их активность, конформацию и его денатурирующее действие на белки. Также необходимо обратить внимание на то. Из литературы известно несколько сред для проведения гидрофобизации производными жирных кислот. Причина этого, видимо, заключается в гетерогенности реакционной системы. Реакция с белком происходит на поверхности микрокапель реагента, причем начавшаяся гидрофобизация белка способствует более прочной его адсорбции на капле реагента и тем самым его дальнейшему ацилнрованию. Другим примером является использование 1 раствора дезоксихолата натрия ДОХ в воде Модифицирующий реагент добавляют при этом растворенным в небольшом объеме ацетона или в дноксана. В этом случае необходимо учитывать влияние детергента и органического растворителя на активность и стабильность модифицированных белков. Так, в работе было показано снижение стабильности ахимотрипсина в водной среде после гидрофобизации производными жирных кислот в мицеллярной системе. Болес того, было найдено, что этот фермент теряет активности изза денатурирующего действия детергента ДОХ и дноксана . Основная проблема использования водной среды обусловлена тем, что в водной срсдс наряду с модификацией часто идет побочная реакция гидролиз модифицирующего агента. Это приводит к необходимости введения в реакционную систему значительных его избытков , что также затрудняет проведение реакции Эти трудности были преодолены при переходе от водной среды к микрогетерогенному коллоидному раствору, характеризующемуся низким 5 содержанием воды, системе обращенных мицелл поверхностно активных веществ ПАВ в органическом растворигеле. При солюбилизации в такой системе молекула белка включается во внутреннюю оболочку из монослоя гидратированного ПАВ. Водонерастворнмый реагент локализуется не только в объемной фазе органического растворителя, но он также может встраиваться в поверхностный слой обращенной мицеллы, входя в контакт с модифицируемой группой белка Было показано, что степень модификации белка в мицеллярной системе не зависит от его концентрации, степени гндрагацни и концентрации ПАВ, а определяется только молярным соотношением реагентов модификатор белок . Была предложена система НАОТ дноктилсульфосукцннат натриевая соль органический растворитель, которая является наиболее часто используемой для проведения реакции модификации белков.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.168, запросов: 121