Иммобилизация белков в микрочастицы, сформированные методом последовательной адсорбции противоположно заряженных полиэлектролитов

Иммобилизация белков в микрочастицы, сформированные методом последовательной адсорбции противоположно заряженных полиэлектролитов

Автор: Володькин, Дмитрий Владимирович

Шифр специальности: 02.00.15

Научная степень: Кандидатская

Год защиты: 2005

Место защиты: Москва

Количество страниц: 166 с. ил.

Артикул: 2771185

Автор: Володькин, Дмитрий Владимирович

Стоимость: 250 руб.

Иммобилизация белков в микрочастицы, сформированные методом последовательной адсорбции противоположно заряженных полиэлектролитов  Иммобилизация белков в микрочастицы, сформированные методом последовательной адсорбции противоположно заряженных полиэлектролитов 

ВВЕДЕНИЕ.В
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Глава 1, Интерполиэлектролитные комплексы.
1.1. Образование, строение и свойства.
1.2. Белокполиэлектролитныс комплексы.
Глава 2. Формирование и свойства ПЭ пленок, полученных методом последовательной адсорбции полиэлектролитов ПАП на плоских подложках
2.1. Получение пленок методом ПАП
2.2. Структура и свойства многослойных ПЭ пленок.
Глава 3. Полиэлектролитные микрокапсулы, полученные методом ПАП
3.1. Формирование полиэлектролитных оболочек на поверхности коллоидных частиц
3.2. Образование полых полиэлектролитных микрокапсул.
3.3. Некоторые физикохимические свойства полых ПЭ микрокапсул.
Глава 4. Включение макромолекулярных соединений в ПЭ микрочастицыкапсулы с применением метода ПАП
4.1. Мультислои макромолекул на поверхности коллоидных частиц
4.2. Включение макромолекул в ПЭ микрокапсул путем изменения проницаемости их оболочки
4.3. Покрытие кристаллов белков ПЭ оболочкой.
4.4. Метод, основанный на преципитации вещества на поверхности коллоидной матрицы.
4.5. Включение макромолекул в микрокапсулы, полученные на основе МФмикрочастиц
4.6. Обобщение методов включения преимущества и недостатки. Постановка задачи
Глава 5. Кристаллизация карбоната кальция
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Глава 6. Материалы, оборудование и методы исследования
6.1. Материалы и реактивы
6.2. Оборудование
6.3. Методы исследования.
6.3.1. ПЭ микрочастицы, полученные на высоленных агрегатах белка
а. Получение ПЭ микрочастиц.
б. Определение содержания белка в микрочастицах и растворах.
в. Определение эстеразной активности химотрипсина.
г. Высвобождение белка из микрочастиц при различных
д. Изучение кинетики высвобождения белка из микрочастиц.
с. Повторное включение белка в ПЭ микрочастицы, полностью высвободившие белок
6.3.2. Белоксодержащие СаСОз микрочастицы.
а. Получение СаСОз микрочастиц
б. Включение белков в СаСОз микрочастицы методом
адсорбции в порах.
в. Получение белоксодержащих СаСОз микрочастиц методом совместного осаждения
6.3.3. Включение белков в ПЭ микросферы каркасного типа
а. Получение каркасных ПЭ микросфер ПААПСС
б. Иммобилизация белков путем включения в сформированные ПЭ микросферы.
в. Изучение высвобождения белков из микросфер.
6.3.4. Измерение активности ГОД
6.3.5. Измерение амидазной активности ХТР
6.3.6. Получение магнитных наночастиц
6.3.7. Модификация микросфер магнитными наночастицами
6.3.8. Получение ПЭ микросфер путем ПАП на белоксодержащих СаСОз микрочастицах
а. Включение белков в микросферы ПААПСС4.
б. Включение 2 в микросферы ПЛЛАЛГ4.
Эксперименты i viv
6.3.9. Белоксодержащие гелевые микросферы с ПЭ оболочкой
а. Иммобилизация ОВА
б. Модификация микросфер ПГКПЭГ. Изучение адсорбции БСА
6.3 Изучение стабильности комплекса ПССПАА при изменении .
6.3 Получение ПЭ и белков, меченых флуоресцентной меткой.
6.3 Подготовка ДС и ДЕ для использования в работе
6.4. Физикохимические методы, использованные при работе с микрочастицами.
6.4.1. Световая оптическая микроскопия.
6.4.2. Сканирующая электронная микроскопия СЭМ.
6.4.3. Трансмиссионная электронная микроскопия ТЕМ.
6.4.4. Метод адсорбциидесорбции азота метод БрунауэраЭмметаТеллера.
6.4.5. Конфокальная флуоресцентная сканирующая
микроскопия КСФМ
6.4.6. Флуоресцентная микроскопия
6.4.7. Микрогравиметрия
6.4.8. Спектроскопия координационного рассеяния СКР
6.4.9. Элементный анализ.
6.4 Расчет концентрации микросфер
6.4 Измерение гидродинамического радиуса полиэлектролитов
6.4 Измерение потенциала СаСОз микрочастиц.
6.4 Лиофильное высушивание.
6.4 УФвидимая спектроскопия.
6.4 Флуоресцентная спектроскопия.
6.4 Рентгеноструктурный анализ широкого угла рассеяния.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Глава 7. Иммобилизация ХТР путем ПАП на агрегатах белка
7.1. Получение, структура и свойства белоксодсржащих микрочастиц
7.2. Высвобождение белка из микрочастиц
7.3. Изучение активности иммобилизованного ХТР.
Глава 8. Включение белков в ПЭ микросферы каркасного типа
8.1. Синтез и характеристика пористых микрочастиц из карбоната кальция .
8.2. Получение и структура ПААПСС4 микросфер каркасного типа.
8.3. Белоксодержащие каркасные ПЭ микросферы
а. Включение белков в сформированные микросферы ПААПСС
б. Создание дополнительной ПЭ оболочки на поверхности каркасных микросфср с белком.
в. Изучение каталитической активности микросфер с ХТР в водноорганических смесях
г. Модификация микросфер наночастицами Без
8.4. Формирование ПЭ микросфер путем ПАП на белоксодсржащих СаСОз микрочастицах.
8.4.1. Изучение включения белков в СаСОз микрочастицы
а. Метод адсорбции в порах АП
б. Метод совместного осаждения СО
8.4.2. Получение белоксодержащих ПЭ микросфер
а. Включение белков в микросферы ПААПСС
б. Включение 2 в микросферы ПЛЛАЛГ4.
Изучение иммунного ответа на микросферы с Г2 i viv
8.5. Сравнительные характеристики методов включения белков
в ПЭ микросферы каркасного типа
Глава 9. Иммобилизация белков в гелевые микросфсры с ПЭ оболочкой
9.1. Включение ОВА в гелевые Саальгинатные микросферы
9.2. Высвобождение ОВА из Саальгинатных микросфер
9.3. Модификация микросфер ПГКПЭГ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.
Список сокращений
ЛБТС 2,2азобис3этилбензотиазол6сульфонат
АЛГ Альгинат натрия
АП Адсорбция в порах
АФ 5аминофлуоресцеин
БПЭК Белокполиэлектролитный комплекс
БТЭЭ Этиловый эфир ЫбснзоилЬтирозина
БТНА Яяянитроанилид ЫбензоилЬтирозина
ВБАВ Высокомолекулярные биологически активные вещества
ГОД Глюкозоксидаза
ДЕ Диэтиламиноэтил декстран
ДС Декстран сульфат
ИПЭК Интерполиэлектролитный комплекс
КСФМ Конфокальная флуоресцентная сканирующая микроскопия ЛАК Лактальбумин ЛИЗ Лизоцим
ЛПЭ Лиофилизующий полиэлектролит Мк Микрокапсулы Мс Микросферы Мч Микрочастицы
МФчастицы Меламинформальдегидныс латексные частицы
НПЭК Нестехиометричный интерполиэлектролитный комплекс ОВА Овальбумин ОПЭ Опорный полиэлектролит
ПАЛ Поли аллиламин гидрохлорид
ПАК Полиакриловая кислота
ПАП Последовательная адсорбция полиэлектролитов ПВП Поли4винилпиридин
ПГК ПолиЬглутаминовая кислота
ПГКПЭГ Полиглутаминовая кислота, ковалентно модифицированная полиэтиленгликолем
ПДАДМА Полидиаллилдиметиламмоний хлорид ПДМАЭМ ПолиН,Мдиметиламиноэтилметакрилат
ПЕР Пероксидаза
ПЛЛ ПолиЬлнзин
ПМАК Полиметакриловая кислота
ПСчастицы Полистирольныс латсксиыс частицы г ПСС Поли стиролсульфонат натрия
л ПЭ Полиэлектролит
ПЭИ Полиэтиленимин
РБ Родамин Б изотиоцианат
СПЭК Стехиометричный интерполиэлсктролитный комплекс
СО Совместное осаждение
СЭМ Сканирующая электронная микроскопия
ТРИС Трисоксиметиламинометан
ТЭМ Трансмиссионная электронная микроскопия
ФИТЦ Флуоресцеин 5изотиоцианат
ХТР аХимотрипсин
ЭДТА Этилендиаминтетрауксусная кислота
ВВЕДЕНИЕ


Для реакций с участием слабых, а также слабых и сильных полиэлсктролитов степень превращения 0 зависит от среды. Как видно из Рис. ИПЭК являются кооперативными и протекают в узком интервале растворов. Интересен вопрос об образовании ИПЭК в кислых и щелочных средах. Существенно, что продуктами завершенных реакций между полиэлектролитами, взятыми в эквимольных соотношениях и протекающих в отсутствие низкомолекулярных солей, являются нейтральные стехиометричные ИПЭК, строение которых не зависит от способа их получения и одинаково для одной и той же пары полиэлектролитов Рис. Степень превращения 0 в таких ИПЭК в большой степени определяется стерическим соответствием между электростатически комплементарными цепями. Поскольку интерполиэлектролитные комплексы часто являются продуктами взаимодействия стеричсски нерегулярных макромолекул, то число звеньев, не участвующих в образовании межмолекулярных солевых связей, составляет не менее 7. Строение ИПЭК, представляющих собой продукты незавершенных интерполимерных реакций , зависит от среды, из которой поликомплсксы получены Рис. Различие в строении ИПЭК продуктов незавершенных реакций определяет их фазовое состояние и обусловливает различие в свойствах. Так, при проведении реакции по схеме, представленной на Рис. ИПЭК выделяются из раствора в отдельную фазу 8. Это связано со способностью деионизованных групп поликислоты, еще не вступивших в интерполимерную реакцию, образовывать водородные связи. В то же время в щелочных средах вплоть до значений степени превращения 0 0,,5 фазового разделения системы не происходит, образующиеся ИПЭК продукты незавершенных реакций растворимы 8 9. Рис. Схема образования интерполиэлектролитных комплексов. Рис. Анализ экспериментальных данных для некоторых пар полиэлектролитов в виде зависимостей степени превращения 0 от . Рис 3. Схема образования интерполиэлсюролитных комплексов в кислой и щелочной средах. Важным параметром, влияющим на образование ИПЭК, является не только среды, но и ионная сила. В литературе принято более короткий полиэлектролит называть опорным ОПЭ или блокирующим, а более длинный лиофилизующим ЛПЭ. Если взаимодействие между полиэлектролитами происходит при ионной силе, равной нулю, то образуются неравновесные комплексы. Это связано с наличием ионизованных участков ОПЭ, которым трудно взаимодействовать с ЛПЭ изза пространственных затруднений, вызванных жесткостью структуры. В присутствии низкомолекулярного электролита возникает конкуренция между ним и высокомолекулярным полиэлектролитом за образование ионных связей. Это приводит к ослаблению связей, в результате чего цепи ЛПЭ приобретают большую подвижность, и с течением времени система приходит в равновесие. Однако добавление избытка низкомолекулярного электролита может привести к разрушению большого числа ионных связей и даже к полному разрушению ИПЭК. Для каждой пары полиэлектролитов характерно определенное значение концентрации низкомолекулярного электролита, при которой ИПЭК распадаются. К примеру комплекс ПМАКПВГ1Е1Вг разрушается при концентрации ЫаВг в растворе 0,5 М, тогда как комплекс полиэтиленсульфоната натрия с ПВПЕ1Вг полностью не разрушается даже в присутствии 1,5 М ЫаВг . В следующей части данной главы будет рассмотрен вопрос о строении и свойствах интерполиэлектролитных комплексов. Результаты исследований равновесий реакций образования ИПЭК в водных растворах, а также изучение строения и свойств полиэлектролитных комплексов в блоке приводят к представлению о них как о полимерах лестничного строения, в которых более или менее упорядоченные участки, представляющие собой двутяжные последовательности пар противоположно заряженных звеньев, образовавших друг с другом солевые связи Л, чередуются с областями Б, В, содержащими последовательности разобщенных звеньев и представляющих собой дефекты Рис. Среди дефектов различают структуры типа петли Б и сетчатые структуры В. В идеальном случае, редко реализующемся на практике, ИПЭК имеют структуру, лишенную участков, где взаимодействие между цепями полиэлсктролитов отсутствует.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.194, запросов: 121