Повышение термостабильности бактериальной формиатдегидрогеназы методом направленного мутагенеза

Повышение термостабильности бактериальной формиатдегидрогеназы методом направленного мутагенеза

Автор: Федорчук, Владимир Витальевич

Шифр специальности: 02.00.15

Научная степень: Кандидатская

Год защиты: 2000

Место защиты: Москва

Количество страниц: 122 с. ил

Артикул: 2769758

Автор: Федорчук, Владимир Витальевич

Стоимость: 250 руб.

Повышение термостабильности бактериальной формиатдегидрогеназы методом направленного мутагенеза  Повышение термостабильности бактериальной формиатдегидрогеназы методом направленного мутагенеза 



В результате был получен содержащий шесть аминокислотных замен мутант фсрмнетлстзщютстты Тб. Этот мутант был 9 раз стабильнее исходною фермента. ФДГ. Однако, кроме гидрофобных существенное влияние ив стэпилышсп белковой глобулы могут играть и другие взаимодействия Одними из самых сильных среди исковалентных шапмолейетвий являются электростатические Роль утих взаимодействий в стабильности нашего фермент еще не исследовалась. Кроме того, анализ карты Рамачан. К. Потому оптимизация хтектростатических взаимодействий и снятие яовформмпоюпех напряжений могут бып. ФДГ. ФДГ мутаций и одни многоточечный мутант тш основе термостабилыюго мутанта Тб и 3 разработка и осттимишшя системы крупномасштабного выделения формиптдегилрогенвш на основе двухфазных систем РКОсольтюд с включением сталии термообработки. II. Глава 1. Общие положения. Специфическая аминокислотная последовательность каждого бел определяет вопервых, самоорганизацию линейной подипспгтидкой цепи в уникальную трехмерную структуру вовторых, специфическую функцию и сс регуляцию, м. Для некпторих белком, например, инсулина, время жизни составляет несколько минут, для других, например, кристаллике хрусталика глаза, совпадает со временем жизни ергаиизмд. Также сильно различаются и температуры, при которых могут функционировать ферменты, одни из них нормально работают при О С, для дру гих оптимум активности находится при 0. Соответственно эволюция должна била иайтя гакой компромисс между жесткостью определяющей стабильность и гибкостью определяющей активность, чтобы бедок был достаточно стабилен и обладал необходимой активнее ью при фшио. При лом бедок имеет лишь ограниченную стабильность. Эго достигается топким багажом между стабилизирующими и дестабилизирующим и юаимодсйстяиями. Так свободная энергия Гиббса стабилизации белков составляет примерно ДкАюль и эквивалентна энергии нескольких слабых взаимодействий, в то время как оцениваемая суммарная энергия межатомных взаимодействий притяжения и оттплкииапия п белковой глобуле сосгаисг порядка хДжмоль Поэтому должно быть, возможно, по крайней мерс, п принципе, модифицировать бело так, чтобы повысить сто стабильность, хотя возможно при этом ухудшится его специфическая функция. Фиэикохимичоскио методы. На ранних лая ах рзбог по оовышсшно стабильности белков наибольшие успехи были емтаны с применением метола иммобилизации III Основная причина изменения стабильности в результате иммобилизации СОСТГ4ТТ в ужесточении натвноП конформации белковой глобулы. Набор применяемых при иммобилизации подходов шючаег в себя многоточечное носовалспгнсс взаимодействие фермента с носителем адсорбшюнная иммобилизация. ЧЮТ оточенное КОа. С1ПМО присоединение фермента к шдорхмосш НОСН1СЛЯ химическая иммобилизация, внутримолекулярное сшивание бифункциональными реагентами, механическое включение ферментов и пт или микрокапсулы. Другое направление в стабилизации бет кое заключается в их химической иолфпации . В результата химической модификации в белок вводятся фумкциональпме группы, способные образовывать дополни г ел ьные водородные связи или солевые мостики. Модификация неполярными соединениями ипоиа усиливает в белках гидрофобные взаимодействия, а при модификации x подтрными и заряженными соединениями происходит се шдрофилизация. Одним из основных недостатков перечисленных выше методов является необходимость проведения самого процесса иммобилизации, что приводит к увеличению себесгоимостн конечного препарата иммобилизованного фермента. Дхя излучения писокошпшкшх ЦрмирвГОв необходимо гюпольювать фермент достаточно ВНООСЮЙ степени чистоты. Как зпвеспю. ЯВЛВСГСЯ ОДНОЙ ИЗ СПМЫХ ДОрОГОСТОПЦИХ ПО всем процессе получения фепарата фермента. Более i. Выход иммобилизованного фермента может также зависеть от свойств используемою носителя. При переходе от одной партии нссэтсля к другой даже небольшие изменения в ао свойствах могут существенно алгить на эффективность процесса иммобилизации. Следует отметить. Л разделение таких смесей ка гомогенные субпосулдции часто лдоетдомт значительные трудности.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.181, запросов: 121