Мультиплексная микрочиповая система с иммобилизованными реактивами для молекулярно-генетического анализа

Мультиплексная микрочиповая система с иммобилизованными реактивами для молекулярно-генетического анализа

Автор: Наволоцкий, Денис Васильевич

Шифр специальности: 02.00.02

Научная степень: Кандидатская

Год защиты: 2010

Место защиты: Санкт-Петербург

Количество страниц: 161 с. ил.

Артикул: 4877828

Автор: Наволоцкий, Денис Васильевич

Стоимость: 250 руб.

Мультиплексная микрочиповая система с иммобилизованными реактивами для молекулярно-генетического анализа  Мультиплексная микрочиповая система с иммобилизованными реактивами для молекулярно-генетического анализа 



Ложноотрицательным результатом является результат, при котором отсутствие роста интенсивности флуоресценции раствора связано не с отсутствием интересующего участка ДНК в пробе, а некорректными условиями проведения анализа или наличием в анализируемом растворе ингибиторов ПЦР . Ложноположительным результатом является результат, при котором рост интенсивности флуоресценции раствора связан не с наличием интересующего участка ДНК в пробе, а с попаданием интересующего участка ДНК в анализируемый раствор из окружающей среды в процессе проведения анализа 5. ДНК в анализируемом растворе, в то время как в результате ПЦР синтезируется 9 молекул ДНК, поэтому даже небольшое загрязнение анализируемого раствора продуктами предыдущего анализа обусловит положительный результат ПЦРанализа. Также ложноположительный результат ПЦРанализа с использованием интеркалирующих красителей может быть вызван амплификацией побочных продуктов, так как интеркалирующие красители не селективны к нуклеотидной последовательности амплифицируемого участка. Высокая вероятность получения ложных результатов вызывает необходимость регулярного проведения контрольных анализов. Для выявления ложноположительных результатов проводится определение пробы, заведомо не содержащей интересующий участок ДНК. Для выявления ложноотрицательных результатов проводится параллельное определение пробы с добавлением в нее раствора интересующего участка ДНК. При получении неверных результатов при анализе контрольных анализов все полученные результаты признаются недостоверными. Таким образом, ПЦР обладает рядом особенностей, которые необходимо учитывать при проведении анализа. Так как определение начального содержания ДНК проводится по обратной аппроксимации, основным условием которой является постоянство эффективности реакции, то незначительные различия в эффективности амплификации на каждом отдельном температурном цикле приводят к невозможности проведения количественного анализа ДНК. Л для обеспечения высокой эффективности амплификации необходимо проводить оптимизацию как состава реактивов и нуклеотидных последовательностей праймеров, так и параметров температурновременного режима. Так же высокая вероятность ложноположительных и ложноотрицательных результатов вызывает необходимость регулярного проведения контрольных экспериментов. Увеличение информативности одного анализа, высокая стоимость реагентов, трудоемкость анализа и ограниченное количество пробы привели к необходимости проведения нескольких ПЦР в одном растворе мультиплексная ПЦР. В этом случае в одном растворе содержатся несколько пар праймеров, которые обеспечивают одновременную амплификацию нескольких участков ДНК 2. Проведение мультиплексной ПЦР начинает широко распространяться в практике ПЦРанализа. На данный момент существует несколько задач, которые решаются проведением анализа с использованием мультиплексной ПЦР. Одной из таких задач, которая актуальна в клиническом анализе для выявления возбудителей инфекционных заболеваний , является проведение скрининга пробы на наличие нескольких участков ДНК , . Второй областью применения мультиплексной ПЦР является контроль достоверности полученных результатов . В этом случае в анализируемый раствор вводится ДНК внутренний контроль, а присутствующий набор праймеров позволяет проводить амплификацию участка введенной ДНК. Отсутствие амплификации внутреннего контроля позволяет судить о некорректных условиях проведения ПЦР или присутствии в анализируемом растворе ингибиторов ПЦР, тем самым позволяя выявить ложноотрицательные результаты. Так же мультиплексная ПЦР позволяет проводить сравнение результатов, полученных при анализе нескольких проб. Сравнение количественных результатов о содержании определенного участка ДНК в нескольких пробах возможно только при равенстве общего количества ДНК, что невозможно обеспечить при клиническом анализе изза особенностей отбора пробы . Мультиплексная ПЦР, в которой одна из реакций используется для определения общего количества ДНК в растворе, а остальные для определения интересующих участков ДНК, позволяет провести корректировку результатов анализа на эффективность пробоотбора и провести сравнение результатов анализа нескольких проб .

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.183, запросов: 121