Хроматофокусирование: новые подходы в концентрировании и разделении ионов металлов и биологически важных макромолекул

Хроматофокусирование: новые подходы в концентрировании и разделении ионов металлов и биологически важных макромолекул

Автор: Иванов, Александр Вадимович

Шифр специальности: 02.00.02

Научная степень: Докторская

Год защиты: 2011

Место защиты: Москва

Количество страниц: 335 с. ил.

Артикул: 4802989

Автор: Иванов, Александр Вадимович

Стоимость: 250 руб.

Хроматофокусирование: новые подходы в концентрировании и разделении ионов металлов и биологически важных макромолекул  Хроматофокусирование: новые подходы в концентрировании и разделении ионов металлов и биологически важных макромолекул 



Сорбенты с биполярными группами модифицированные иминодиуксусной кислотой с иммобилизованными ионами металлов применяли в афинной хроматографии белков при элюировании с внешним градиентом , . Разделение белков происходит изза различий в комплексообразовании белков с иммобилизованными ионами металлов при снижении подвижной фазы. Для создания внутренних градиентов подобные сорбентЕЛ еще не использовали, хотя они и проявляют буферирующую способность. В настоящее время более публикаций по формированию и применению градиентов относится к области хроматофокусирования, и число таких публикаций неуклонно возрастает. Хроматофокусировапие метод ионообменной хроматографии, использующий внутренний градиент т. Г4 , , . Внутренний градиент создают, используя буферное взаимодействие подходящего слабоосновного или слабокислотного ионообменного сорбента и пропускаемого через колонку буферного элюента 4, , , 9. Для слабоосновного анионообменника получается нисходящий, а для слабокислотного катионообменника восходящий градиент . В настоящее время хроматофокусировапие широко распространенный метод разделения и очистки аминокислот, белков и других биологических макромолекул биполярною цвиттерионного строения 4, 6, . Параметром разделения при хроматофокусировании белков служат значения рбелков как цвиттсрионных молекул 4, , , , , 9. Возрастающий интерес исследователей к хроматофокуеированию объясняется отличительными особенностями этого метода, главными из которых являются следующие. Высокая разрешающая способность, связанная с формированием линейного градиента в слое сорбента 4, 6, 7, , , , 4. Обычно ДрН составляет 0,,2 ед. Достигнуто разделение белков, изоэлектрические точки. Поэтому на одной хроматографической колонке теоретически можно разделить смесь из и более цвиттерионных компонентов 4, 4, 5. Простая регенерация хроматографических колонок после разделения смеси белков, для чего колонку промывают стартовым буферным раствором при высоких значениях , , , 9. Простое аппаратурное оформление 4, 6, , 0. Возможности аналитического хроматофокусирования в высокоэффективном варианте 4, 6, , 0, 2, 3, 0 микроколоночного хроматофокусирования 4, 6, , 6, 7, 0, 1. Высокая нагрузочная емкость хроматографических колонок в препаративном хроматофокусировании, связанная с высокой буферной емкостью сорбентов и элюентов, а также с особенностями формирования градиента . Исходно весь объем сорбента в колонке может быть насыщен белками пробы 4, 6, , , 0. Колонку, заполненную слабоосновным анионообменником рейсе слабокислотным катионообмен ником с функциональными группами, имеющими широкий диапазон констант протонирования, предварительно уравновешивают стартовым буферным раствором при высоких значениях от 6 до 9. В случае катионообменпого сорбента стартовый буферный раствор, наоборот, имеет низкий около 3 4. Разделяемую пробу растворяют в том же буферном растворе, которым уравновешивали сорбент, и наносят на колонку. Рабочий интервал рЫ выбирают с учетом значений изоэлектрических точек разделяемых белков. Стартовый буферный раствор заменяют буферным раствором с низким значением , используемым в качестве элтоента 4, 6, 7, , , 0, 4. Элюирующий раствор должен сохранять буферпую емкость в широком интервале , что достигается применением в качестве элюентов многокомпонентных буферных смесей или специальных полибуферных высокомолекулярных соединений 4, 7, , , , , , , , 3. Для получения лучших результатов предпочтительнее работать в интервале не более 3 ед. Таблица 1. Гидрофобные ОФ буферная смесь амфолитов и слабых кислот внешний, ступенчатый 5сд. Пенгалгин органические вещества анилин и его производные . Зсд. Гидрофильные буферная смссь амфолитов и слабых кислот внутренний, линейный 5 ед. Силыюосновные аниоиообменники кислота и сопряженное основание внешний, линейный 1, ед. Сильнокислотные катионообменники кислота и основание внешний линейный 1,5 2,5 сд. II, , , , , , . Сильнокислотные катионообменники кислота и основание внешний, ступенчатый 4 сд. Слабоосновные анионообменники кислота и основание внешний, линейный ,5 ед. Слабокислотные катионообменники кислота и основание внешний, линейный 2сд.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.196, запросов: 121