Разработка твердофазного иммуноферментного анализа для лабораторной диагностики хламидиоза

• Автор: Банникова, Василиса Александровна
• Шифр специальности: 14.00.46
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Саратов
• Количество страниц: 162 с. : 12 ил.

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
ГЛАВА 1. ТВЕРДОФАЗНЫЙ ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ: ОСНОВНЫЕ
ПРИНЦИПЫ ПОСТАНОВКИ И ПРИМЕНЕНИЯ
ГЛАВА 2. МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ УРОГЕНИТАЛЬНОГО
ХЛАМИДИОЗА
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
ГЛАВА 3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
3.1. Штаммы микроорганизмов и антигены
3.2. Оборудование и приборы
3.3. Реактивы и буферные растворы
3.4. Выделение иммуноглобулиновой фракции из асцитических жидкостей иммунных животных
3.5. Приготовление иммунопероксидазных конъюгатов
3.6. Варианты ТИФА
3.7. Электрофорез
3.8. Иммуноблот
3.9. Лабораторные животные
3.10. Статистическая обработка
ГЛАВА 4. ПОЛУЧЕНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА ДИАГНОСТИЧЕСКИ ЗНАЧИМЫХ ПОЛИКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ К ВОЗБУДИТЕЛЮ ХЛАМИДИОЗА
4.1. Выбор антигена и оптимизация условий иммунизации биомоделей

4.2. Изучение специфичности полученных антител
4.3. Изучение иммунохимических свойств иммунореактивного лиганда
C. trachomatis с использованием гомологичных антител
ГЛАВА 5. КОНСТРУИРОВАНИЕ И ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ РАЗЛИЧНЫХ МОДИФИКАЦИЙ ТИФА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ ХЛАМИДИОЗА
5.1. Приготовление и характеристика иммуноглобулиновых пероксидазных конъюгатов
5.2. Разработка и оптимизация постановки различных вариантов ТИФА для выявления специфического антигена возбудителя хламидиоза
5.3. Сравнительное изучение эффективности различных вариантов ТИФА
для идентификации возбудителя хламидиоза
ГЛАВА 6. ПЕРСПЕКТИВА ПРАКТИЧЕСКОГО ПРИМЕНЕНИЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ИММУНОФЕРМЕНТНОЙ ТЕСТ-СИСТЕМЫ ДЛЯ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ УРОГЕНИТАЛЬНОГО ХЛАМИДИОЗА
6.1. Сравнительная эффективность выявления возбудителя хламидиоза в клиническом материале от больных людей в ДНА и ПИФ
6.2. Сравнительная оценка диагностической значимости ДИА и ПЦР для
детекции урогенитального хламидиоза
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ЛИТЕРАТУРА.

Список принятых в работе сокращений
ABTS-2,2-azmobis (3-ethylbenzthiazoline sulfonis acid)
анти-С-аг lg — антитела к хламидийному антигену
BSA - бычий сывороточный альбумин
ВЗОМТ - воспалительные заболевания органов малого таза
ДИА - дот-иммуноферментный анализ
ДНК-ЗГ - ДНК-зондовая гибридизация
ДАБ - диаминобензидин
ЗППП - заболевания, передающиеся половым путем
lg - иммуноглобулины
ЛЦР - лигазная цепная реакция
ЛПС - липополисахарид
мг - миллиграмм
м.кл - микробные клетки
мкл - микролитр
мкг - микрограмм
мл - миллилитр
млн - миллион
МКА - моноклональные антитела МОМР - основной белок наружной мембраны МФА - метод флуоресцирующих антител НЦМ - нитроцеллюлозная мембрана НЦ - нитрат целлюлозы

ошибочным диагнозам [91, 198], а высокая стоимость существенно ограничивает использование этого современного теста [177]. Для диагностики хламидиоза в последние годы стали использовать ЛЦР, в основе которой лежит тот же принцип трехступенчатого процесса амплификации генетического материала, что и в ПЦР, однако достаточного количества сведений о его чувствительности и специфичности пока не накоплено. D. Taylor-Robinson полагает [398], что ПЦР и ЛЦР позволяют значительно усовершенствовать диагностику хламидийной УТИ.
Транскрипционная амплификация (ТА) - новый метод молекулярной амплификации C. trachomatis, который основан на применении амплификации посредством транскрипции и гибридизационной защиты для качественного определения рибосомной РНК C. trachomatis в эндоцервикальных и уретральных образцах, а также в исследуемых пробах мочи у обоих полов. Предполагается, что эффективность нового метода будет чрезвычайно высокой (>99%), однако требуются дополнительные исследования в различных популяциях [1].
Таким образом, к основным недостаткам метода ДНК-диагностики, ограничивающие их распространение, относятся высокая стоимость, необходимость использования специального оборудования и помещений для забора материала, риск переноса загрязнений между образцами и реагентами. Кроме того, судя по последним литературным данным, резюмирующим более, чем 10-летний опыт применения генодиагностических методов для выявления хламидий, только отдельные публикации подтверждают корреляцию положительных результатов генных тестов с клиническими наблюдениями и результатами других лабораторных исследований, что свидетельствует о большом проценте гипердиагностики при практическом использовании ПЦР, ДНК-зондов и ЛЦР [419].