Экспериментальное обоснование применения клеточных технологий в лечении цирроза печени и острой печеночной недостаточности

• Автор: Кожевников, Юрий Анатольевич
• Шифр специальности: 14.00.27
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 111 с. : 34 ил.

Список сокращений
АЛТ аланинаминотрансфераза
ACT аспартатаминотрансфераза
ГЦ гепатоцит
гкс глюкокортикостероиды
дмсо диметилсульфоксид
ИГА индекс гистологической активности
кг контрольная группа
КФП Культура фетальных клеток печени
кт ксенотрансплантация
ог основная группа
опн острая печеночная недостаточность
отп острое токсическое повреждение печени
пол перекисное окисление липидов
тгп трансплантация гепатоцитов
ФРГ фактор роста гепатоцитов
ЧХУ четыреххлористый углерод
ЭКП эмбриональные клетки печени
ЭР эндоплазматический ретикулум
ЭСК эмбриональные стволовые клетки
ЦП цирроз печени
отп ортотопическая трансплантация печени
оції объем циркулирующей плазмы
ПЦР полимеразная цепная реакция
FACS Fluorescence-activated cell sorting (цитометрия флуоресцентно-активированных клеток)
лпс липополисахариды

ОГЛАВЛЕНИЕ
Введение
Глава I. Обзор литературы
1.1. Аспекты острой печеночной недостаточности
1.1.1. Определение, классификация
1.1.2. Вопросы этиологии, патогенеза и синдромы ОПН
1.1.3. Проблемы лечения ОПН
1.1.4. Применение клеточных биотехнологий в коррекции ОПН
1.2. Аспекты цирроза печени
1.2.1. Определение, классификация
1.2.2. Вопросы этиологии и патогенеза, роль иммунной системы
1.2.3. Проблемы лечения ЦП
1.2.4. Трансплантация стволовых клеток в стимуляции регенерации печени при ЦП
1.3. Моделирование ЦП и ОПН на лабораторных животных
Глава II. Материалы и методы исследования
2.1. Общая характеристика экспериментального материала
2.2. Характеристика методов исследования
2.2.1. Моделирование острой печеночной недостаточности
2.2.2. Моделирование цирроза печени
2.2.3. Приготовление клеточных трансплантатов
2.2.4. Методы биохимического контроля
2.2.5. Методы морфологического исследования
2.2.6. Иммунологические методы исследования
2.3. Методы статистической обработки
Глава III. Исследование приживления аллогенных фетальных клеток печени в различных органах взрослых мышей

3.1. ПЦР - анализ приживления трансплантата
3.2. Распределение в органах флуоресцентно-окрашенных
клеток фетальной печени
3.4. Гистологический и флуоресцентный анализ приживления клеток фетальной печени в органах
Глава IV. Трансплантация стволовых клеток при ОПН
4.1. Ход эксперимента
4.2. Летальность в экспериментальных группах
4.3. Исследование биохимических показателей крови при ОПН после проведения клеточной трансплантации
4.3.1. Изменение уровеня общего белка и альбумина в сыворотке крови
4.3.2. Изменение показателей индикаторных ферментов
4.3.3. Изменение уровеня общего холестерина в сыворотке крови
4.3.4. Изменение уровеня мочевины и креатинина в сыворотке крови
4.4. Определение массы печени и селезенки
4.5. Структурная оценка изменений при клеточной трансплантации
4.5.1. Макроскопическая характеристика изменений печени и селезенки72
4.5.2. Морфологические изменения печени после трансплантации
Глава V. Трансплантация КФП и ККМ при циррозе печени
5.1. Ход эксперимента
5.2. Летальность в экспериментальных группах
5.3. Исследование биохимических показателей крови при ЦП после проведения клеточной трансплантации
5.3.1. Изменение уровеня общего белка и альбумина в сыворотке крови
5.3.2. Изменение показателей индикаторных ферментов
5.3.3. Изменение уровеня общего холестерина в сыворотке крови

количество «овальных» клеток из печени в чистом виде очень трудно, поэтому до сих пор не было сообщений об их лечебном применении.
3. Экзогенные стволовые клетки, которые могут происходить из циркулирующих гемопоэтических клеток [96, 110] или из стволовых клеток костного мозга [153, 207, 221]; они немногочисленны, мультипотенты, но с очень продолжительной способностью к пролиферации. Например, при перипортальном некрозе, вызванном аллиловым спиртом, происходит пролиферация клеток, у которых отсутствуют маркеры и гепатоцитов, и холангиоцитов [263], что можно объяснить трансдифференцировкой стволовых клеток костного мозга.
На сегодняшний момент активно изучаются механизмы, через которые стволовые клетки могут ускорить регенерацию печени при ее повреждении. Механизмов несколько: дифференцировка стволовых клеток в клетки печени; их слияние с клетками печени; продукция ростовых факторов, которые припятствуют апоптозу гепатоцитов и механизм привлечения в процесс регенерации тканевых стволовых клеток.
После трансплантации костного мозга от донора мужчины в гепатоцитах реципиента-женщины обнаруживались Y-хромосомы. Подобные результаты наблюдали и при трансплантации печени от женщин мужчинам. В этом случае до 40% гепатоцитов и холангиоцитов являлись потомками гемопоэтических стволовых клеток реципиента, вселившихся в трансплантат, причем были найдены как диплоидные, так и полиплоидные гепатоциты с Y-хромосомой [94, 240].
Были изучены условия трасдифференцировки взрослых клеток костного мозга в гепатоциты in vitro. При культивировании использовали специальную среду и факторы роста: гепатоцитов (HGF) и эпидермальный (EGF). После 2-х недельного культивирования появились гепатоцитоподобные клетки, синтезирующие альбумин. Их количество прямо зависело от конентрации HGF в культуральной среде [189].