Моноцитарный хемотаксический белок-1 (МСР-1) как фактор воспаления при атерогенезе. Разработка пептидного ингибитора МСР-1.

• Автор: Кухтина, Надежда Борисовна
• Шифр специальности: 14.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 107 с. : 24 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Атеросклероз — заболевание с хронической воспалительной компонентой
1.2. Рестеноз как осложнение эндоваскулярных способов реваскуляризации в отдаленном периоде
1.3. Участие цитокинов в атерогенезе. Влияние цитокинов на стабильность атеросклеротических бляшек
1.4. Семейство хемокинов. Характеристика моноцитарного хемотаксического белка-1 (MCP-1)/CCL2
1.5. Рецепторы хемокинов. Пути передачи внутриклеточных
сигналов от хемокиновых рецепторов. Рецептор МСР
1.6. Роль МСР-1 в атерогенезе
1.7. Перспективные противовоспалительные лекарственные препараты и препараты для покрытия стентов при лечении ИБС и атеросклероза
1.8. Заключение обзора литературы
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Клиническая характеристика пациентов, включенных в исследование. Получение и хранение образцов интимы коронарных сосудов и аорт человека
2.2. Иммуногистохимический анализ образцов интимы коронарных артерий и аорт человека
2.3. Выделение РНК
2.4. Реакция обратной транскрипции
2.5. Полуколичественная полимеразная цепная реакция в
«реальном времени»

2.6. Выделение и иммунофенотипирование клеток из образцов
интимы аорты
2.7. Измерение концентрации МСР-1 в плазме крови пациентов с ИБС при нестабильной стенокардии и стабильной стенокардии напряжения
2.8. Культивирование линейных клеток ТНР
2.9. Выделение моноцитов/макрофагов из периферической крови
2.10. Выделение и культивирование эндотелиальных клеток из пупочной вены человека
2.11. Определение уровня фосфорилирования МАР-киназ
2.12. Разработка и получение новых противовоспалительных препаратов пептидной природы на основе структуры хемокина

2.13. Оценка миграции клеток in vitro в модифицированной микрокамере Бойдена
2.14. Изучение хемотаксиса клеток in vivo в модели «air pouch»
(воздушный мешок) у мышей
2.15. Индукция подкожного воспаления у крыс и приматов
2.16. Баллонная ангиопластика левой общей сонной артерии крыс
2.17. Иммуногистохимическое окрашивание пленочных препаратов из области подкожного воспаления приматов и гистологических
срезов общих сонных артерий крыс
2.18. Морфометрический анализ срезов левой общей сонной
артерии крыс после баллонного повреждения
2.19. Анализ параметров клеточного иммунитета крыс
2.20. Статистический анализ
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Анализ атеросклеротических бляшек коронарных артерий и
аорт больных ИБС

3.2. Измерение концентрации МСР-1 в плазме крови пациентов с ИБС при нестабильной стенокардии и стабильной стенокардии напряжения
3.3. Изучение внутриклеточных протеинкиназ, активирующихся при действии МСР-1, в линейных клетках ТНР-1, моноцитах периферической крови и эндотелиальных клетках пупочной вены человека
3.4. Тестирование пептидных фрагментов in vitro
3.5. Изучение действия пептидного фрагмента 65-76 С-концевой последовательности МСР-1 (РХ) in vivo в модели «воздушный мешок» у мышей
3.6. Действие РХ на миграцию лейкоцитов в очаг подкожного воспаления у крыс и приматов
3.7. Влияние РХ на формирование гиперплазии неоинтимы после баллонного повреждения общей сонной артерии крыс ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

JNK/SAPK каскада в запуске транскрипции белков, участвующих в апоптозе (Kasibhatla S et al., 1998).
Третий MAP-киназный каскад представляет собой сигнальный путь, задействующий киназы ERK1/2 (р42/44). Активация данного каскада связана с такими жизненно важными процессами, как клеточная пролиферация, дифференцировка и апоптоз, а также воспалительный ответ (Kyriakis JM, 1999). Именно этот путь задействован в хемотаксисе клеток.
СХС-хемокины (SDF-1, ИЛ-8) и СС-хемокины (MIP-За, МСР-1)
активируют ERK1/2 в различных клеточных системах (Sullivan SK et al., 1999; Boehme SA et al., 1999). На основании данных о блокировании активации ERK1/2 ингибиторами Р13-киназы (Knall С et al., 1997; Sotsios Y et al., 1999) высказано предположение, что G-белок-ассоциированные рецепторы активируют ERK Р13-киназа-у-зависимым путем (Lopez-Ilasaca М et al., 1997). Sasaki Т и др. (2000) предположили, что ßy-субъединицы активируют PI3-киназу-у, которая, в свою очередь, стимулирует Src-подобные киназы, инициируя "классический” сигнальный каскад от рецепторов факторов роста. Кроме того, было обнаружено, что Р13-киназа-у также обладает свойствами протеинкиназы и может напрямую фосфорилировать MAP-киназы ERK (Bondeva Т et al., 1998).
Хемокины играют важную роль в дестабилизации атеросклеротической бляшки. Они привлекают активированные лейкоциты в область повреждения, а также способствуют разрыву бляшки и образованию тромба за счет деградации матрикса макрофагами. Дополнительно хемокины стимулируют выработку тканевого фактора в сосудистых ГМК и ЭК и усиливают окислительный стресс и апоптоз данных клеток внутри атеросклеротической бляшки (Barlic J, Murphy РМ, 2007; Aukrust Р et al., 2001).
Можно предположить, что отдельные звенья внутриклеточных сигнальных каскадов, активируемых под действием хемокинов, в частности,