Микроклональное размножение селекционных форм ремонтантной малины с использованием новых регуляторов роста

• Автор: Озеровский, Александр Владимрович
• Шифр специальности: 06.01.05
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Брянск
• Количество страниц: 123 с. : ил.

Перечень сокращений, условных обозначений
ГЛАВА 1. Использование биотехнологических методов в селекции ремонтантных форм малины
1.1 Характеристика объекта исследований
1.2 Микроклональное размножение растений
1.3 Регенерация плодово-ягодных растений в культуре in vitro
1.4 регуляторы роста растений
1.4.1 Биопрепараты на основе симбионтных грибов
1.4.2 Регуляторы роста на основе фурфурола
1.4.3 Крезацин - новый синтетический препарат
1.5. Современные методы исследования генома растений
1.5.1 Морфо-фенотипические и биохимические методы
1.5.2. Задачи решаемые ПЦР
1.6 Использование молекулярных маркеров в изучении
генома и селекции малины
ГЛАВА 2. Методики и условия окружающей среды
2.1 Место проведения и объекты исследований
2.2 Методики исследований
2.2.1 Методика микроклонального размножения
2.2.2 Методика получения регенератов ремонтантной малины
2.2.3 Методы по определению генома малины
2.2.3.1. Выделение геномной ДНК
2.2.3.2ISSR-PCR
2.3 Климатические и почвенно-агротехнические
условия проведения исследований
ГЛАВА 3 Результаты и обсуждение
3.1 Микроклональное размножение ремонтантных форм малины
3.1.1 Введение новых генотипов
3.1.2 Сравнение эффективности использования желирующих веществ при культивировании ремонтантной
малины в культуре in vitro
3.1.3 Влияние месторасположения почек на однолетних побегах замещения ремонтантной малины на их
регенерационную способность в культуре in vitro
3.1.4 Влияние регуляторов роста на развитие побегов малины
в культуре in vitro
3.1.5 Адаптация к нестерильным условиям
3.2 Регенерация ремонтантных форм малины из листовых эксплантов
3.3 Молекулярное маркирование признака ремонтантности
у малины при микроклональном размножении
ГЛАВА 4. Экономическая эффективность применения регуляторов роста при микроклональном размножении
ремонтантной малины
Выводы
Рекомендации
Список используемой литературы
Перечень сокращений, условных обозначений
6-БАП - 6-бензилоаминопурин,
ГК - гибберелиновая кислота,
ИМК - индолилмасляная кислота,
ИУК - индолилуксусная кислота,
НУК - нафтилуксусная кислота,
4-Р11 - М-(4-пиридил)-Ы-фенилмочевина,
СРРи - N-(2 хлор-4-пиридил)-Ы-фенилмочевина,
- тидиазурон,
РСЯ - полимеразно-цепная реакция,
^БР-РСЯ - ПСР с праймерами для определения полиморфизма межмикросателитных последовательностей
подсыхания субстрата. Для активного роста и развития 1 раз в неделю подкармливали их разбавленным в 2-3 раза раствором МС. Через 2 месяца адаптации растения перемещали в теплицу для доращивания, после чего саженцы высаживали на постоянное место в питомник. Статистическая обработка проводилась с помощью программ «Эксель» и «Статистика». Результаты представлены в виде М±ш (ш - статистическая ошибка среднего).
2.2.2 Методика получения регенератов ремонтантной малины
При оптимизации условий регенерации использовали листья укорененных пробирочных растений ремонтантной малины, которые предварительно были получены из апикальных меристем и размножены в лаборатории биотехнологии БГСХА. Пробирочные растения культивировались на питательной среде следующего состава: МС (Murashige and Skoog., 1962). Состав среды приведен в таблице 1. Среды готовили из концентрированных растворов макросолей (20 х), микроэлементов (100 х), Fe-хелата (200 х) и витаминов (100 х), добавляли инозит, сахарозу, агар (Difco), стерилизовали автоклавированием (1,2 атм, 20 мин.). pH среды доводили раствором NaOH. 6-БАП и ИМК добавляли перед автоклавированием. Посуду стерилизовали прокаливанием 25 минут или автоклавированием. Тидиазурон и антибиотики добавляли непосредственно перед использованием. Клональное микроразмножение проводили в присутствии 6-БАП 2 мг/л, укоренение побегов ИМК 0,5 мг/л. При приготовлении растворов гормонов использовали 96 % С2Н5ОН.
В опытах по регенерации изучали влияние гормональных факторов (тип цитокинина и его концентрация), влияние фотопериода, а также физиологических факторов на проявляемую регенерационную способность.
Источником эксплантов служили апикальные листья и черешки изолированные от укорененных in vitro растений. На изолированные листовые пластинки наносили поранения в области центральной жилки и