Структурная организация субдоменов интерфазных ядер и митотических хромосом

• Автор: Шеваль, Евгений Валерьевич
• Шифр специальности: 03.03.04
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 239 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность проблемы
Цель исследования
Задачи исследования
Научная новизна работы
Теоретическая и научно-практическая значимость работы
Основные положения, выносимые на защиту
Апробация работы
Публикации по теме диссертации
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Радиально-петельная модель организации митотической хромосомы
Экспериментальные подходы к визуализации хромосомного скэффолда...Л4 Идентификация белков хромосомного скэффолда и их топология в
митотических хромосомах
Радиальные петли и спирализация хроматид
Структурная роль белков хромосомного скэффолда
Хромосомный скэффолд как система дискретных сшивок
Подвижность белков скэффолда
Высшие уровни компактизации хроматина в митотических
хромосомах
Молекулярная организация элементарных хромонем
Заключение
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Культура клеток
Получение ядерного матрикса/хромосомного скэффолда in situ
Иммуноцитохимическое окрашивание
Хромосомные препараты
Электронная микроскопия
Иммуноэлектронная микроскопия
Корреляционная световая и электронная микроскопия
Выявление фокусов транскрипции
Выявление эу- и гетерохроматина в составе митотических хромосом
Синхронизация культуры клеток
Фиксация клеток с использованием конденсирующего буфера
Иммуноцитохимическое выявление реплицирующегося хроматина,
включившего Вгсіи
Введение флуоресцентно меченного нуклеотида в клетки
Генная инженерия
Плазмиды
Фибрилларин-ТарЯГР
Ьар2/3-ГЬЛ С
РЕЗУЛЬТАТЫ
Глава 1. Идентификация стадий митоза в экстрагированных клетках
Глава 2. Изучение структуры митотических хромосом после экстракции 2М
ШС1 и полианионами
Результаты
Обсуждение 5
Глава 3. Исследование динамики формирования хромосом в профазе митоза
Результаты
Морфология хромосом в митозе
Проверка синхронизации культуры клеток и периодизация Б-фазы
Продольная дифференциация хромосом в метафазе
Динамика рано и поздно реплицирующихся фракций хроматина в
профазе и метафазе
Обсуждение
Глава 4. Исследование ультраструктурної! организации хромосомного
скэффолда
Результаты
Обсуждение
Глава 5. Изучение динамики структурной организации периферического
скэффолда в митозе
Результаты
Локализация В23 и pKi-67 клетках HeLa на разных стадиях митоза... 101 Ассоциация pKi-67 и В23 с остаточными структурами на разных
этапах митоза
Локализации pKi-67 в ходе митоза (иммуноэлектронная микроскопия) 104 Улътраструктурная организация остаточных структур на разных
стадиях митоза
Белки Ki-67 и В23 не экстрагируются солью из сформированных de
novo комплексов
Обсуждение
Глава 6. Изучение организации ядерного матрикса хромоцентров
культивируемых фибробластов мыши
Результаты
Обсуждение
Глава 7. Разработка метода выявления малодоступных для специфических
антител ядрышковых антигенов
Результаты
Обсуждение
Глава 8. Изучение самоорганизации клеточных структур, индуцированной
гиперэкспрессией некоторых белков ядерной оболочки
Результаты
Основные структурные компоненты ядерной оболочки, выявляемые
при ультраструктурном исследовании клеток линии HeLa-В
Гиперэкспрессия ламина В1 приводит к избыточной продукции
ядерной оболочки
Мембраны в областях инвагинаций ядерной оболочки не содержат
поровых комплексов
Гиперэкспрессия ламина А индуцирует формирование почек и
выростов внутренней мембраны ядерной оболочки
Гиперэкспрессия нуклеопорина рот121 индуцирует формирование
комплексов эндоплазматического ретикулума
Гиперэкспрессия нуклеопорина ndcl индуцирует формирование кластеров мембран эндоплазматического ретикулума в цитоплазме.

хромосомы за счет дискретных белковых “скрепок” (“chromatin network model”). В данной модели роль непрерывного скелета играет молекула ДНК, сшиваемая в единую сеть с помощью структурных белков. (Г) - модель иерархического фолдинга (“hieraclical folding model”). Данная модель рассматривает митотическую хромосому как результат последовательного сворачивания молекулы ДНК в ряд иерархически соподчиненных фибриллярных структур - нуклеосомная фибрилла, фибрилла диаметром 30 нм, элементарная хромонема, фибрилла диаметром 200-250 нм. (Д) -вариант модели иерархического фолдинга, постулирующий участие хромосомного скэффолда в последних этапах формирования хромосом - сворачивании фибриллы диаметром 200-250 нм в митотическую хроматиду (“hieraclical folding/axial glue model”).