Посттрансплантационная миграция и распределение клеток костного мозга при перевиваемой меланоме B16

• Автор: Соловьева, Анастасия Олеговна
• Шифр специальности: 03.03.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 131 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА I ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Клетки, применяемые для клеточной терапии
1.2. Костный мозг как источник материала для клеточной терапии
1.2.1. Гемопоэтические клетки костного мозга
1.2.2. Мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки костного мозга
1.3. Селезенка - основное депо зрелых лимфоидных клеток костномозгового происхождения
1.4. Миграционная активность клеток
1.4.1. Миграционная ось SDF-la/CXCR
1.4.2. Миграционная ось VLA4/VCAM-
1.4.3. Миграционная ось SCFVcKit
1.4.4. Миграционная ось VEGF/VEGFR
1.4.5. Миграционная ось HGF/c-Met
1.4.6. Миграционная ось MCP-1/CCR
1.5. Ниша стволовой клетки как регулятор миграции
1.6. Методы изучения миграции и распределения
трансплантированных клеток
1.7. Особенности миграции и распределения гемопоэтических
клеток костного мозга различной степени дифференцировки
1.8. Факторы, влияющие на миграцию и
распределение трансплантированных клеток
1.9. Трансплантация клеток при опухолевом росте
1.9.1. Влияние трансплантированных клеток на рост и метастазирование опухоли
1.9.2. Миграция и распределение трансплантированных клеток
при опухолевом росте

ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Лабораторные животные
2.2. Выделение клеток для трансплантации, их культивирование
и характеристика
2.2.1. Индукция адипогенной дифференцировки ММСК
2.2.2. Индукция остеогенной дифференцировки ММСК
2.2.3. Определение фенотипа ММСК костного мозга
2.2.4. Окрашивание клеток витальным красителем Hoechst 33342.
2.3. Выделение ДНК из органов реципиента и определение ее концентрации
2.4. Исследование миграции и распределения
трансплантированных клеток
2.4.1 Изучение миграции и распределения трансплантированных
клеток костного мозга и селезенки
2.4.2. Изучение миграции и распределения трансплантированных
клеток нефракционированного костного мозга и ММСК
2.5. Исследование влияния роста опухоли на миграцию и распределение трансплантированных клеток костного мозга
2.6. Изучение влияния трансплантации клеток костного мозга на выживаемость животных-носителей меланомы В
2.7. Оценка влияния трансплантации клеток на опухолевый рост
2.8 Флуоресцентная микроскопия срезов органов
2.9. Разработка микрочиповой методики анализа
распределения трансплантированных клеток
2.10. Статистическая обработка полученных результатов
ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Динамика распределения трансплантированных клеток костного
мозга и спленоцитов по органам интактного реципиента
3.1.1. Распределение трансплантированных клеток костного мозга

3.1.2. Распределение трансплантированных клеток селезенки
3.1.3. Сравнительный анализ временной динамики распределения трансплантированных клеток костного мозга и селезенки
3.2. Влияние меланомы В16 на миграционную активность неразделенной популяции клеток костного мозга и ММСК
3.2.1. Распределение трансплантированных клеток костного
мозга по органам интактного реципиента
3.2.2. Распределение трансплантированных клеток костного
мозга в организме реципиента-носителя меланомы В
3.2.3. Сравнительный анализ распределения трансплантированных клеток костного мозга в организме интактного реципиента и реципиента-носителя меланомы В
3.2.4. Влияние опухолевого роста на распределение трансплантированных мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток костного мозга
3.2.5. Распределение нефракционированной популяции клеток костного мозга и мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток в организме реципиента-носителя меланомы В
3.3. Изучение распределения трансплантированных клеток в органах реципиента-носителя меланомы в16 при помощи
флуоресцентной микроскопии
3.4. Анализ влияния трансплантации ККМ на выживаемость животных-носителей меланомы В16 и рост опухоли
3.5. Разработка биочипа для оценки миграционной активности изучаемых клеток
3.5.1. Количественная нормировка контрольного олигонуклеотида (С>4)
что селезенка является органом хоминга для иммунокомпетентных клеток. В сердце определялось около 1% трансплантированных клеток. В дальнейшем содержание мигрировавших клеток в сердце увеличивалось в 2 раза, однако оставалось на низком уровне. При введении клеток непосредственно в левый желудочек сердца количество трансплантированных клеток в сердечной мышце достигало 4,7% (Aicher А., 2003). Также показано, что миграционная активность и приживление ГСК на модели острой почечной недостаточности была низкая и не отличалась от таковой в норме (Burst V., 2013).
Помимо вышеперечисленных факторов, совместная трансплантация различных типов клеток также влияет на их миграционную активность и приживление в организме реципиента. Сравнение миграции и распределения внутривенно трансплантированных ГСК КМ, ММСК КМ и ГСК+ММСК на модели фиброза печени показало, что тенденция временного распределения клеток в легких, печени и почках в течение 28 суток была схожа. Однако интенсивность накопления GFP-сигнала в группе, которой трансплантировали ММСК, была гораздо выше по сравнению с группой ГСК и ГСК+ММСК (Li Q., 2013). По результатам других авторов, при котрансплантации ММСК и ГСК костного мозга человека NOD/SC1D мышам значительно увеличивается приживаемость и миграционная активность ГСК, что имеет прямую зависимость от количества котрансплантрованных ММСК (Paik S.K., 2007).
Таким образом, котрансплантация ГСК и ММСК играет важную роль в миграционной, дифференцировочной активности и степени приживления введенных клеток.
Итак, не смотря на большое количество работ по изучению миграции и распределения трансплантированных клеток, существуют противоречивые и неоднозначные данные по поводу судьбы трансплантированных клеток. Очень мало работ по сравнительному исследованию миграции клеток после котрансплантации. Поскольку ГСК и ММСК в своей основной нише в костном мозге находятся в постоянном взаимовлиянии, очевидно, что их совместная трансплантация повлияет на эффективность клеточной терапии. Поэтому сравнительное изучение миграционной активности и распределение в организме реципиента клеток различной степени дифференцировки (сплено-