Участие мускариновых рецепторов третьего типа в опосредовании холинергической регуляции сердца млекопитающих

• Автор: Тапилина, Светлана Владимировна
• Шифр специальности: 03.03.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2015
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 168 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
1. ВВЕДЕНИЕ
1.1. Актуальность темы
1.2. Задачи исследования
1.3. Научная новизна исследования
1.4. Научно-практическая значимость
1.5. Основные положения, выносимые на защиту
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1. Механизмы реализации холинергических эффектов в норме
2.1.1. Парасимпатическая иннервация сердца
2.1.1.1. Общий план вегетативной иннервации сердца
2.1.1.2. Внугрисердечное нервное сплетение
2.1.1.2.1. Структура ганглиев внутрисердечного нервного сплетения
2.1.1.2.2. Локализация узлов интеркардиального нервного сплетения
2.1.1.2.3. Нейрохимия интракардиальных ганглиев
2.1.2. Мускариновые рецепторы в миокарде
2.1.2.1. Строение и общие принципы работы мускариновых рецепторов
2.1.2.1.1. Агонисты и антагонисты мускариновых рецепторов
2.1.2.2. Мускариновые рецепторы в сердце
2.1.2.3. Физиологическая роль МГ, М4-, М5- рецепторов в сердце
2.1.2.3.1. М1-рецепторы
2.1.2.3.2. М4-рецепторы
2.1.2.3.3. М5-рецепторы
2.1.3. Реализация холинергических эффектов в сердце
2.1.3.1. М2-рецепторы в сердце
2.1.3.1.1. Оіа-субьединица и аденилатциклазный сигнальный каскад
2.1.3.1.2. (Зу-субъединица &-белка: активация ОИГК-каналов
2.1.3.2. МЗ-рецепторы в сердце млекопитающих
2.1.3.2.1. Доказательства наличия функциональных МЗ-рецепторов в сердце
2.1.3.2.2. Внутриклеточные каскады, опосредуемые М3 рецепторами
2.1.3.2.3. Фосфоинозитидный сигнальный путь: эффекты инозитолтрифосфата
2.1.3.2.4. Фосфоинозитидный сигнальный путь: эффекты диацилглицерола
2.1.3.2.5. Калиевый ток Гкмз
2.2. Особенности холинергичекой стимуляции при возникновении патологических ситуаций в сердце
2.2.1. Ишемическое повреждение миокарда и МЗ-рецепторы
2.2.1.1. Цитопротекторные эффекты стимуляции МЗ-рецепторов
2.2.1.2. Влияние активации МЗ-рецепторов на межклеточное взаимодействие
2.2.1.3. Ассоциация между РКСе и МЗ-рецепторами
2.2.2. Патологическая гипертрофия сердца и МЗ-рецепторы
2.2.3. Аритмия и мускариновые рецепторы
2.2.3.1. Участие М-рецепторов в генезе фибриляции предсердий
2.2.3.2. Кардиопротекторная роль МЗ-рецепторов при фибрилляции желудочков
2.2.4. Сердечная недостаточность и МЗ-рецепторы
2.3. Развитие холинегической регуляции в ходе онтогенеза
3. МЕТОДИКА
3.1. Объекты исследования
3.1.1. Препаровка
3.1.2. Препараты правого предсердия
3.1.3. Препарат стенки правого желудочка
3.2. Иммуногистохимическое окрашивание препаратов миокарда
3.2.1. Использованные антитела
3.2.2. Протокол окраски
3.3. Молекулярно-биологические исследования уровня экспрессии генов методом
полимеразной цепной реакции в реальном времени
3.3.1. Принцип метода
3.3.2. Выделение тотальной РНК из препаратов сердечной мышцы
3.3.3. Обработка ДНКазой
3.3.4. Обратная транскрипция
3.3.5. Выделение геномной ДНК
3.3.6. Праймеры, использованные в работе
3.3.7. Полимеразная цепная реакция
3.4. Эксперименты с регистрацией электрической активности
3.4.1. Устройство установки
3.4.2. Регистрация ПД. Протокол эксперимента

3.4.3. Обработка результатов
3.5. Метод пэтч-кламп
3.5.1. Выделение изолированных кардиомиоцитов крысы
3.5.2. Регистрация кальциевого тока О-типа в изолированных кардиомиоиитах методом пэтч-кламп
4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
4.1. Доказательства наличия и функциональной активности МЗ-рецепторов в сердце
4.1.1. Исследование эффектов избирательной стимуляции МЗ-рецепторов в рабочем миокарде крысы
4.1.1.1. Действие пилокарпина на параметры электрической активности в рабочем
предсердном миокарде крысы. Развитие эффекта во времени
4.1.1.2. Эффекты избирательной стимуляции МЗ-рецепторов в предсердном рабочем
миокарде крысы
4.1.1.3. Исследование эффектов избирательной стимуляции МЗ-рецепторов в рабочем
миокарде стенки правого желудочка крысы
4.1.1.4. Сравнение влияния пилокарпина на конфигурацию ПД в предсердиях и
желудочках крысы
4.1.2. Действие избирательной активации МЗ-рецепторов на параметры электрической активности различных отделов сердца мыши
4.1.2.1. Действие избирательной стимуляции МЗ-холинорсцепторов на параметры
электрической активности синоатриального узла мыши
4.1.2.2. Исследование влияния избирательной стимуляции МЗ-холинорецепторов на
параметры ПД в препарате ушка правого предсердия мыши
4.1.2.3. Действие избирательной активации МЗ-рецепторов пилокарпином на
электрическую активность правого желудочка мыши
4.1.2.4. Сравнение действия пилокарпина на параметры электрической активности
предсердий и желудочков мыши
4.1.3. Иммуногистохимическое исследование миокарда различных отделов сердца мыши на наличие рецепторных белков М2 и МЗ-рецепторов
4.1.3.1.Иммуногистохимическое окрашивание препарата правого предсердия мыши
4.1.3.2. Иммуногистохимическое окрашивание препаратов правого желудочка

эффекту. Этот эффект возникает при активации 1кась за счет снижения проводимости клеток АВУ [БНзЫтига й а1., 1988]. В желудочковых кардиомиоцитах также обнаружены СИКК каналы, однако их количество значительно ниже, чем в предсердиях.
Таким образом, эффекты АЦХ, опосредуемые активацией М2-рецепторов, можно разделить на две группы: зависимые от активации каналов 1кась Ру-субъединицей и опосредованные аденилатциклазным сигнальным путем (Рис.З). Важно отметить, что последние имеют место уже при воздействии наномолярных концентраций АЦХ, в то время как выраженная активация ЦасН наблюдается при аппликации микромолярных концентраций.
Рисунок 3. Сигнальный путь М2-рецепторов. После активации М2-рецепторов происходит диссоциация в, белка на а- и Ру-субъединицы. Основной мишенью для 01-субъединицы является аденилатациклаза, при блокаде которой происходит снижение цАМФ и как следствие ингибирование тока Ц калиевого, хлорного и кальциевого тока Ь-типа. Ру-субъединица активирует ацетилхолинзависимые калиевые каналы. Все это приводит к возникновению в сердце отрицательных хроно-, дромо-, ино- и батмотропных эффектов. Более подробные описания приведены в тексте главы 2.1.4.1.