Разнообразие, распространение и методы диагностики бактерий родов Xanthomonas и Clavibacter, поражающих томат

• Автор: Корнев, Константин Павлович
• Шифр специальности: 06.01.07, 03.02.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 145 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
СПИСОК ПРИНЯТЫХ В РАБОТЕ СОКРАЩЕНИЙ И ТЕРМИНОВ
Глава 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1 Черная бактериальная пятнистость томата
1.2 Бактериальный рак томата
Глава 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1 Сбор материала
2.2 Коллекция штаммов исследуемых фитопатогенов
2.3 Изучение морфологических, биохимических и физиологических свойств бактерий
2.4 Определение реакции сверхчувствительности и патогенных свойств
2.5 Статистическая обработка данных
2.6 Молекулярно-генетические методы
2.6.1 Выделение ДНК
2.6.2 Молекулярно-генетический анализ бактерий рода ХапМотопаз
2.6.3 Молекулярно-генетический анализ бактерий рода С1ау1Ъас1ег
2.7 Разработка и подбор праймеров
2.8 Биоинформационный анализ данных
Глава 3 РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ
3.1 Выделение бактерий, идентификация, составление коллекции штаммов
3.2 Характеристика бактерий родаХапгкотопаз, выделенных из растений томата на территории России
3.2.1 Оценка культуральных, биохимических и патогенных

свойств бактерий рода ХапЖотопая
3.2.2 Молекулярно-генетическая характеристика бактерий рода ХаШкотопаз
3.3 Характеристика бактерий СІауіЬаіїег тіск'щапетіз вибрэ. mickiganensis, выделенных из растений томата на территории России
3.3.1 Оценка культуральных, биохимических и патогенных свойств
3.3.2 Молекулярно-генетическая характеристика бактерий подвида СІауіЬасїег michiganensis эибэр. michiganensis..
3.3.3 Характеристика картофельной расы Стт
3.4 Распространение возбудителей черной бактериальной пятнистости и рака томата на территории Российской Федерации
РЕКОМЕНДАЦИИ ПРОИЗВОДСТВУ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ
Томат (Solanum lycopersicum L.) - широко распространенная в мире сельскохозяйственная культура. По данным ФАО, на территории России ежегодно производится более 2 млн. т. урожая томата (FAO, 2011). Значительный экономический ущерб данной культуре наносят бактериозы, в том числе черная бактериальная пятнистость и рак томата (Ахатов и др., 2013).
Возбудитель черной бактериальной пятнистости Xanthomonas vesicatoria был впервые описан в 1920 г. (Doidge, 1920, 1921) и в настоящее время выявлен более чем в 70 странах. Плоды томата при заражении этим фитопатогеном часто становятся не пригодными для употребления в пищу, а пораженность растений в открытом грунте может достигать 100%. Источниками инфекции являются семена и растительные остатки (Gardner, Kendrick, 1921; Lewis, Brown, 1961; Bashan et al., 1982). В настоящее время Xanthomonas vesicatoria разделен на четыре самостоятельных вида: X. euvesicatoria (Jones et al., 2004), X. vesicatoria (ex Doidge 1920, Vauterin et al., 1995), X. perforans (Jones et al., 2006), X. gardneri (ex Sutic 1957, Jones et al., 2006), которые отличаются друг от друга по биохимическим и молекулярногенетическим признакам (Vauterin et al., 1991). Однако, в литературе имеются сведения о распространении на территории России лишь одного вида - X. vesicatoria (Матвеева и др., 1999).
Другое не менее важное заболевание - бактериальный рак томата, возбудителем которого является Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis (Smith, 1910; Davis et al., 1984). В настоящее время этот фитопатоген распространен более чем в 54 странах. Основными источниками данного бактериоза являются зараженные семена, рассада и растительные остатки (Grogan, Kendrick 1953; Strider, 1969; Chang et al., 1989; Gitaitis et al., 1987, 1991).

из-за образования кислоты в аэробных условиях. В случае пожелтения среды в обеих пробирках - тип дыхания окислительный и бродильный.
5) Определение амилолитической активности. Использовали МПА с крахмалом (5 г. на 1 л.), которую стерилизовали при 121°С в течение 30 мин. Культуру фитопатогена высевали штрихом по диаметру чашки. Инкубацию Зх в течение 5-7 дней. После инкубации на агар с культурой фитопатогена наносили раствор Люголя, полностью закрывая поверхность чашки. Среда приобретала темно-синий цвет в случае отсутствия амилолитической активности у бактерий. В случае положительной реакции вокруг культуры фитопатогена формировалась прозрачная зона.
6) Определение пектолитической активности. Использовали среду Логана с добавлением полипектата натрия. Состав основного (нижнего) слоя: хлористый натрий - 5,0 г/л, лимоннокислый натрий - 3 г/л, генцианвиолет -3 мл 0.1% водного раствора, бромтимоловый синий - 3 мл 1,5% водного раствора, рН=6,9-7,2. Стерилизацию проводили в течение 20 мин при 0,5 атм. Поверхность основного слоя подсушивали в течение суток, после чего покрывали пектатным (верхним) слоем следующего состава: 2 г полипектата натрия растворяли в 6 мл спирта, тщательно перемешивали 5-10 мин и выливали в 100 мл дистиллированной воды, в которой предварительно было разведено 0,1 г ЭДТА, рН=7,4. Стерилизовали 5 мин, при 121°С. Культуру бактерий наносили на пектатный слой касанием бактериологической петли в 2-3 местах. После инкубации в течении 1-6 дней при температуре 28°С отмечали появления или отсутствие зон разжижения.
7) Отношение к молоку. К свежему молоку добавляли 5-10%-ный раствор лакмусовой настойки и 10%-ный р-р углекислого натрия до появления синевато-фиолетового оттенка. Затем смесь стерилизовали дробно 20 мин., три дня подряд. После инокуляции культуру фитопатогена инкубировали при 28°С в течение 14-21 дня. Отмечали следующие реакции: образование кислоты - появление розовой окраски; подщелачивание -появление синей окраски; обесцвечивание молока за счет восстановления