Молекулярно-генетический анализ недистрофических миотоний в РФ

• Автор: Иванова, Евгения Андреевна
• Шифр специальности: 03.02.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 95 с. : 19 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
I ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1 КЛАССИФИКАЦИЯ НЕДИСТРОФИЧЕСКИХ МИОТОНИЙ
1.2 НЕДИСТРОФИЧЕСКИЕ МИОТОНИИ, ОБУСЛОВЛЕННЫЕ ПАТОЛОГИЕЙ ХЛОРНОГО ИОННОГО КАНАЛА CLC
1.3 НЕДИСТРОФИЧЕСКИЕ МИОТОНИИ, ОБУСЛОВЛЕННЫЕ ПАТОЛОГИЕЙ НАТРИЕВОГО ИОННОГО КАНАЛА Navl
1.4 ДИАГНОСТИКА НДМ
1.5 СТРОЕНИЕ ХЛОРНОГО КАНАЛА CLC
1.6 СТРУКТУРА И СПЕКТР МУТАЦИЙ ГЕНА CLCN1
1.7 СТРОЕНИЕ НАТРИЕВОГО ИОННОГО КАНАЛА NAV1
1.8 СТРУКТУРА И СПЕКТР МУТАЦИЙ ГЕНА SCN4A
II МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
11.1 МАТЕРИАЛЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
11.2 ЭЛЕКТРОМИОГРАФИЯ
11.3 ЗАБОР ВЕНОЗНОЙ КРОВИ
11.4 ВЫДЕЛЕНИЕ ГЕНОМНОЙ ДНК ИЗ ЦЕЛЬНОЙ КРОВИ
11.5 ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ (ПЦР)
11.6 ЭЛЕКТРОФОРЕЗ В ПААГ
11.6 ПРЯМОЕ АВТОМАТИЧЕСКОЕ СЕКВЕНИРОВАНИЕ
11.8 ПДРФ-АНАЛИЗ
11.9 МУЛЬТИПЛЕКСНОЕ ПРОБА-СПЕЦИФИЧНОЕ ЛИГИРОВАНИЕ
11.10 АНАЛИЗ ПОЛИМОРФНЫХ МАРКЕРОВ
11.11 МЕТОДЫ СТАТИСТИКИ
11.12 АНАЛИЗ НЕРАВНОВЕСИЯ ПО СЦЕПЛЕНИЮ
III РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
111.1 АЛГОРИТМ ИССЛЕДОВАНИЯ
111.2 СПЕКТР МУТАЦИЙ ГЕНА CLCN1
111.3 ЧАСТЫЕ МУТАЦИИ ГЕНА CLCN1
111.4 СООТНОШЕНИЕ МТ И МБ В ИССЛЕДОВАННОЙ ВЫБОРКЕ
111.5 ПОПУЛЯЦИОННОЕ ИССЛЕДОВАНИИЕ ЧАСТОТЫ МУТАЦИИ С.2680ОТ (P.ARG894*) В ГЕНЕ CLCN1

111.6 АНАЛИЗ НЕРАВНОВЕСИЯ ПО СЦЕПЛЕНИЮ И ВЫЯВЛЕНИЕ ГАПЛОТИПА «ОСНОВАТЕЛЯ»
111.7 СЛУЧАИ ХЛОРНЫХ МИОТОНИЙ С ОДНОЙ ВЫЯВЛЕННОЙ МУТАЦИЕЙ
111.8 СПЕКТР МУТАЦИЙ ГЕНА SCN4A
II 1.9 ОПРЕДЕЛЕНИЕ ДОЛЕЙ «ХЛОРНЫХ» И «НАТРИЕВЫХ» МИОТОНИЙ В СТРУКТУРЕ НДМ
111.10 АЛГОРИТМ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ НДМ
IV ЗАКЛЮЧЕНИЕ
V ВЫВОДЫ
VI СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
VII СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ
АА - акриамид
АД - аутосомно-доминантный
АР - аутосомно-рецессивный
БАА - бисакриламид
ВМ - врожденная миотония
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
ИЭМГ - игольчатая электромиография
КЗМ - калий - зависимая миотония
МБ - миотония Беккера
млн.п.н. - миллион пар нуклеотидов
МТ - миотония Томсена
НатМ - натриевая миотония
НДМ - недистрофическая миотония
МЭКВ/Л - милли-грамм-эквивалент на литр
ПААГ - полиакриамидный гель
ПДАФ - полиморфизм длин амплификационных фрагментов
ПДРФ - полиморфизм длин рестрикционных фрагментов
ПЦР - полимеразная цепная реакция
ПЭ - парамиотония Эйленбурга
сМ-сантиморганида
СС - спорадический случай
т.п.н. - тысяча пар нуклеотидов
ФГБУ МГНЦ РАМН - Федеральное государственное бюджетное учреждение Медико-генетический научный центр Российской академии медицинских наук
ЭДТА - этилендиаминтетрауксусная кислота
CLCN1 - chloride channel
HGMD - Human Genetic Mutation Database
MLPA - Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification
NCBI - National Center for Biotechnology Information
OM1M - Online Mendelian Inheritance in Man
SCN4A - sodium channel, voltage-gated, type IV, alpha subunit
SNP - Single Nucleotide Polymorphism
TBE - трис-боратный буфер

11.2 ЭЛЕКТРОМИОГРАФИЯ
Электромиография - исследование нервно-мышечной системы посредством регистрации биопотенциалов мышц. Метод позволяет изучать механизмы двигательной активности человека в физиологических условиях.
В данной работе использован стандартный протокол игольчатого электромиографического исследования. Игольчатые электроды вкалывали в локтевую мышцу (m.Tibialis anterior) и измеряли амплитуду, длительность и форму ПД, длительность миотонического разряда и М - ответ. ИЭМГ для пациентов МГК г.Воронежа выполнял врач функциональной диагностики, невролог ООО «Диагностика плюс» Курбатов A.C. на приборе «Нейро-МВП-Микро» (двухканальный портативный компьютерный электронейромиограф) в г.Воронеже.
Для миотонии различного происхождения характерны так называемые миотонические разряды, представляющие собой высокочастотную активность в виде нарастания и снижения амплитуды и частоты потенциалов, что обусловливает «звук пикирующего бомбардировщика» при прослушивании ЭМГ. Миотонические разряды вызываются введением электрода, постукиванием по мышце, произвольным сокращением. Характерным для миотонии является существенное продление активности после просьбы расслабить мышцу.
М-ответ — вызванный потенциал мышцы, являющийся суммарным синхронным разрядом двигательных единиц мышцы в ответ на электрическое раздражение нерва. Обычно М-ответ регистрируется с помощью накожных отводящих электродов, которые более объективно, чем игольчатые, отражают суммарную активность мышцы. Пластины электродов помещают поперечно расположению волокон. При изучении М-ответа обращают внимание на интенсивность порогового раздражения, форму вызванного потенциала, его амплитуду и длительность.