Генетические факторы, определяющие предрасположенность к псориазу и чувствительность больных к терапии генно-инженерным биологическим препаратом инфликсимаб

• Автор: Каганова, Наталья Леонидовна
• Шифр специальности: 03.02.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 170 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ОГ ДАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Клиническая характеристика и эпидемиология псориаза
1.2. Оценка распространенности, тяжести псориаза и клинической эффективности лечения 1 б
1.3. Генетические аспекты псориаза
1.4. Триггеры внешней среды
1.5. ЮТа
1.6. Ассоциация между полиморфными вариантами генов ТМРА,
ТЫР-ЯЫ и ТЫР-Я-И и предрасположенностью к развитию
псориаза
1.7. Терапия псориаза, основанная на применении блокаторов ТМих
1.8. Ассоциация между полиморфными вариантами генов ТЫРЛ,
ТЫР-Я-1 и ТЫР-Я-П и индивидуальной восприимчивостью больных
к терапии генно-инженерными биологическими препаратами
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Формирование банка биологических образцов
2.2. Оборудование
2.3. Реактивы и расходные материалы
2.4. Праймеры
2.5. Приготовление растворов
2.6. Методы
2.6.1 .Выделение ДНК из биообразцов
2.6.2. ПЦР синтез ДНК исследуемых генов
2.6.3. Детекция и визуализация продуктов амплификации ДНК
2.6.4. Очистка продуктов амплификации ДНК ферментами
2.6.5. Проведение сиквенсной ПЦР
2.6.6. Осаждение продуктов сиквенсной ПЦР ЗМ ацетатом натрия
2.6.7. Проведение реакции секвенирования и анализ полученных результатов
2.6.8. Рестрикция продуктов амплификации ДНК фрагмента шестого экзона гена ТЫР-Я-П
2.6.9. Определение спектра генов в геноме человека, уровень

экспрессии которых изменяется при псориатическом процессе
2.6.10. Проведение протеомных исследований
2.6.11. Компьютерные программы и базы данных, использованные
в работе
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Описание исследуемых выборок, создание информационной базы данных, банка биообразцов и генетического материала (ДНК) больных псориазом и здоровых доноров
3.2. Молекулярно-генетическое исследование полиморфных локусов генов ТМ?А, ТИР-Л-! и ТМР-К-П
3.3. Определение в геноме человека спектра генов, уровень экспрессии которых изменяется при псориатическом процессе
3.4. Анализ протеомных исследований биотатов кожи больных псориазом, получивших терапию инфликсимабом
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЕ
ПРИЛОЖЕНИЕ
ПРИЛОЖЕНИЕ
ПРИЛОЖЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
а.о. - аминокислотный остаток
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
кДа - 1 ООО дальтонов
кДНК - ДНК, комплементарная РНК
мРНК - матричная РНК
ПУВА-терапия - лечебное воздействие на кожу длинноволнового ультрафиолетового излучения А в комбинации с псораленом (PUVA = Psoralen + UltraViolet А)
ПЦР - полимеразная цепная реакция РНК - рибонуклеиновая кислота п.н. - пар нуклеотидов т.п.н. - тысяч пар нуклеотидов УФ - ультрафиолет
ЭДТА - этилендиаминтетрауксусная кислота CMV - цитомегаловирус dH20 - дистиллированная вода dNTP — дезоксинуклеотидтрифосфаты
ddNTP - модифицированные дидезоксинуклеотидтрифосфаты
FDA - управление по контролю за качеством пищевых продуктов и
лекарственных препаратов (Food and Drug Administration)
FIIV - вирус иммунодефицита человека IFN - интерферон
IgGi - иммуноглобулин человека класса Gi IL - интерлейкин
LOD-балл - логарифм отношения правдоподобий, выражающий количественную оценку генетического сцепления kb - 1 ООО пар нуклеотидов п - количество
OR - соотношение шансов (Odds Ratio) р — короткое плечо хромосомы человека Р - вероятность
PASI - индекс распространенности и тяжести псориаза (Psoriasis Area and Severity Index)

терапевтическими мишенями [Sonkoly et al., 2008].
Согласно данным современной литературы обнаружены ассоциации между SNPs в генах, кодирующих рецепторы TNFa, и предрасположенностью к развитию аутоиммунных болезней, таким как ревматоидный артрит, болезнь Крона [Hajeer and Hutchinson, 2000; Sashio et al., 2002; Dieude et al., 2002; Dieudd et al., 2004;Waschke et al., 2005].
1.7. Терапия псориаза, основанная на применении блокаторов TNFa
В последние годы отмечается тенденция к увеличению числа тяжелых, рецидивирующих, резистентных к различным методам лечения форм псориаза, приводящих к потере трудоспособности молодого населения и инвалидизации. Существующие виды терапии заболевания не позволяют достигнуть выздоровления пациентов, в ряде случаев оказывают лишь кратковременный эффект.
Учитывая важную патогенетическую роль провоспалительного цитокина TNFa в развитии псориаза, был разработан принципиально новый эффективный подход к терапии заболевания с использованием генно-инженерных биологических препаратов, селективно блокирующих действие данного цитокина [Cordiali-Fei et al., 2007; Saraceno et al., 2008].
Представителями этой группы препаратов, зарегистрированных и рекомендованных Управлением по контролю за качеством пищевых продуктов и лекарственных препаратов США (FDA), являются этанерцепт, инфликсимаб и адалимумаб, полученные с помощью биотехнологических методов [Weinberg and Buchholz, 2006; Galindo et al., 2008]. Данные препараты высокоаффинно связывают TNFa и блокируют его действие, однако, между ними существуют некоторые различия [Fransen et al., 2006].
Этанерсепт - препарат, который представляет обой комплексный
рекомбинантный белок, состоящий из двух субъединиц рецептора TNFRJI,
соединенных с Fc-фрагментом иммуноглобулинов человека класса IgGj.
Этанерсепт блокирует не только трансмембранный и растворимый TNFa, но
и TNFß, подавляя эффекты обоих цитокинов. Адалимумаб - препарат,