Антикарнозиновая активность стафилококков

• Автор: Потехина, Лидия Петровна
• Шифр специальности: 03.02.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Оренбург
• Количество страниц: 113 с. : 9 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Страница
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ПЕРСИСТЕНЦИЯ СТАФИЛОКОККОВ: МЕХАНИЗМЫ И РЕГУЛЯЦИЯ (обзор литературы)
1.1. Механизмы персистенции стафилококков
1.2. Диагностика и санация стафилококковых бактерионосителей.
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Характеристика микроорганизмов
2.2. Выделение и идентификация стафилококков
2.3. Методы изучения биологических свойств стафилококков
2.4. Методы воспроизведения экспериментальной стафилококковой инфекции
2.5. Методы гистологической обработки материала
2.6. Методика определения влияния циклоферона на антикарнозиновую активность стафилококков
2.7.Методы статистической обработки результатов
ГЛАВА 3. ХАРАКТЕРИСТИКА АНТИКАРНОЗИНОВОЙ
АКТИВНОСТИ СТАФИЛОКОККОВ
ГЛАВА 4. ИЗУЧЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКОЙ РОЛИ
АНТИКАРНОЗИНОВОЙ АКТИВНОСТИ СТАФИЛОКОККОВ
4.1. Роль антикарнозиновой активности микроорганизмов в развитии экспериментального инфекционного процесса
4.2. Морфофункциональная характеристика тканей макроорганизма при
экспериментальной инфекции
ГЛАВА 5. РОЛЬ АНТИКАРНОЗИНОВОЙ АКТИВНОСТИ В ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ СТАФИЛОКОККОВОЙ МИКРОФЛОРЫ
ПРИ БАКТЕРИОНОСИТЕЛЬСТВЕ И ПРОГНОЗИРОВАНИИ
РАЗВИТИЯ СТАФИЛОКОККОВЫХ ИНФЕКЦИЙ
5.1. Диагностическое значение антикарнозиновой активности

стафилококков при бактерионосительстве
5.2. Использование показателя антикарнозиновой активности
микроорганизмов в клинико-лабораторной практике
ГЛАВА 6. ИЗУЧЕНИЕ РЕГУЛЯТОРНОГО ДЕЙСТВИЯ ЦИКЛОФЕРОНА НА АНТИКАРНОЗИНОВУЮ АКТИВНОСТЬ
СТАФИЛОКОККОВ IN VITRO И IN VIVO
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ
ПРИЛОЖЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ Актуальность проблемы
Феномен выживания бактерий в организме хозяина рассматривается как одно из важных звеньев в патогенезе инфекционного процесса. Выживание бактерий в макроорганизме реализуется через их адаптацию к факторам защиты хозяина и может быть связано с инактивацией последних. В настоящее время установлено, что микроорганизмы способны подавлять факторы естественной резистентности организма хозяина, такие как лизоцим, комплемент, лакто-феррин и др. [Бухарин О.В., 1999]. Одним из таких факторов защиты хозяина является природный дипептид карнозин ф-аланил-Ь-гистидин), который оказывает антибактериальное действие [French Patent №71.07856 of March 1, 1971], обладает антиоксидантной активностью [Дупин А.М. с соавт.,1984], проявляет антистрессорный [Гуляева Н.В., Обидин А.Б., Левшина И.П.,1989], иммуномодулирующий [Мальцева В.В., Сергиенко В.И., Стволинский С.Л.,1992] и ра-диопротекторный [Северин С.Е., Болдырев A.A., Стволинский С.Л., 1990] эффекты, обнаружено также его противоаллергическое действие [Адо А.Д., Алексеева Т.А., Лукманова Ф.Ф., 1977]. Отмечено, что дифтерийные бактерии, нуждающиеся для своего роста в ß-аланине, могут получать его из L-карнозина [Mueller, 1938], установлено разрушение карнозина бактериями [Gefter, 1925], а также способность бактерий, преимущественно стафилококков, его инактивировать, определенная как антикарнозиновая активность (АКрА) [Бухарин О.В., Чернова О.Л., Матюшина С.Б., 1999]. Карнозин является эндогенным компонентом быстрых скелетных мышц [Severin S.F., 1964]. Однако наибольшее количество дипептида содержится в обонятельном эпителии слизистой оболочки передних носовых ходов [Margolis F., 1974], являющимся естественным биотопом для микроорганизмов (в частности, стафилококков) при бактерионосительстве.
В связи с этим, известный интерес представляет, с одной стороны, - изучение распространенности антикарнозиновой активности у разных видов стафилококков, выделенных со слизистой оболочки переднего отдела носа, у здо-

мг/мл, относился к фаготипу 53/83 III фагогруппы. Из данного штамма методом "реплик" [Шеенков Н.В., 1993] был получен изогенный клон, отличающийся по антикарнозиновой активности (0,1 мг/мл). Инфицирование мышей-самцов линии СВА массой 18 - 20 г осуществляли путём введения в клетчатку глаза [Анатолий С.А., 1971] 0,2 мл взвеси суточной агаровой культуры S. aureus концентрацией 1 х 109 КОЕ/мл. Для определения микробной обсеменённости в различные сроки исследования (от 1 до 63 дней) выделяли почки, гомогенизировали и высевали стандартной бактериологической петлёй на желточносолевой агар методом секторных посевов [Фельдман Ю.М., 1984]. Идентичность выделенных культур устанавливали по сходству фаготипа. Популяционный анализ проводили путём изучения антикарнозиновой активности у 5 субпопуляций, выделенных от 6 мышей на каждый срок исследования.
Методика интраназалъного заражения крыс. Для оценки биологической роли АКрА стафилококков в биотопе экспериментально были отобраны изо-генные клоны, полученные с использованием метода популяционного анализа [Lederberg J., Lederberg М., 1952] из штамма S. aureus 109, выделенного со слизистой оболочки переднего отдела носа резидентного бактерионосителя. Один клон имел антикарнозиновую активность 3 мг/мл («АКрА+», а другой не имел этого признака (0 мг/мл - «АКрА -»).
Белых беспородных крыс-самцов массой 180-230 г заражали интрана-зально (по 0,1 мл) взвесью суточной агаровой культуры S. aureus концентрацией А620=0,09, приготовленной с помощью автоматизизованной фотометрии на микробиологическом анализаторе iEMS-MF (Labsystems, Финляндия).
Эвтаназию животных под эфирным рауш-наркозом проводили через 3 и 6 суток от начала эксперимента в утренние часы (10 часов).
Материалом для исследований служили слизистые оболочки носа, трахеи, мягкого неба, внутрилегочных бронхов, респираторных отделов легких. Изучаемые органы отделяли от близлежащих тканей и помещали в стерильные чашки Петри со средой 199. Взятые кусочки тщательно промывали в нескольких порциях среды 199 с добавлением пенициллина или стрептомицина в раз-