Гидролиз и модификация липидов с применением липолитических ферментов дрожжей Candida rugosa и Yarrowia lipolytica

• Автор: Чан Тхи Тху Хыонг
• Шифр специальности: 03.01.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Казань
• Количество страниц: 147 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Г1 Общая характеристика липаз
1Л. 1 Структура липаз и механизм действия липаз
1.1.2 Свойства липаз
1Л.З Источники получения липаз
1.1.4 Факторы, влияющие на биосинтез липаз микроорганизмами
1.1.5 Иммобилизация липаз
1.1.6 Применение липаз
1.2 Ферментативные гидролиз и переэтерификация липидов
1.2.1 Ферментативный гидролиз липидов
1.2.2 Ферментативная переэтерификация липидов
ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1 Материалы
2.1.1 Объект исследования
2.1.2 Ферментные препараты
2.1 .ЗСубстраты
2.1.4 Компоненты для приготовления питательной среды
2.1.5 Реактивы и растворители
2.2 Методы исследования
2.2.1 Гидролиз растительных масел и рыбьего жира ферментными препаратами липаз в системе вода - масло
2.2.2 Определение активности липаз (модифицированный метод Ота-Ямада)
2.2.3 Выращивание посевного материала ЮггамлЛ //ро/уЛса

2.2.4 Выращивание дрожжей Yarrowia lipolytica на жидкой питательной среде
2.2.5 Изучение влияния источника углерода и липидного индуктора на липолитическую активность и рост культуры Yarrowia lipolytica
2.2.6 Изучение влияния источника азота на липолитическую активность и рост культуры Yarrowia lipolytica
2.2.7 Изучение влияния ПАВ на липолитическую активность и рост культуры Yarrowia lipolytica
2.2.8 Осаждение липазы из культуральной жидкости дрожжей Yarrowia lipolytica
2.2.9 Иммобилизация ферментного препарата липазы Yarrowia lipolytica
2.2.10 Получение калиевых солей жирных кислот
2.2.11 Определение качественного и количественного состава высших
жирных кислот методом газожидкостной хроматографии
2.2.12 Обработка полученных результатов
ГЛАВА 3 РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1 Ферментативный гидролиз касторового масла системе вода - масло без эмульгатора с использованием в качестве катализатора липазы из Candida
rugosa
3.2 Ферментативный гидролиз оливкового масла в системе вода - масло без эмульгатора с использованием в качестве катализатора липазы из Candida
rugosa
3.3 Ферментативный гидролиз рыбьего жира в системе вода - масло без эмульгатора с использованием в качестве катализатора липазы из Candida
rugosa
3.4 Получение ферментного препарата с использованием продуцента Yarrowia (Candida) lipolytica Y-3153 (ATCC 34088)
3.4.1 Влияние источника углерода и индукторов на рост и липолитическую активность Yarrowia lipolytica
3.4.2 Влияние источника азота и стимулятора на рост и липолитическую
активность Yarrowia lipolytica
3.4.3 Выделение липаз из дрожжей Yarrowia lipolytica
3.4.4 Иммобилизация липаз из Yarrowia lipolytica
3.4.5 Проведение гидролиза иммобилизованным препаратом липазы
Yarrowia lipolytica оливкового масла
3.4.6 Модификация рыбьего жира ферментным препаратом Yarrowia lipolytica и установление его жирно-кислотной специфичности
3.4.7 Технологические аспекты получения липолитического препарата на базе дрожжей Yarrowia lipolytica
ВЫВОДЫ
Список использованных источников

щения диацилглицеридами позволяет получить продукт, который содержит 60 вес.% диацилглицеридов и 40 вес.% триацилглицеридов для применения в производстве маргарина [103].
Найдены некоторые особенности ферментативных реакций гетерогенного ферментативного катализа липазами, благодаря которым увеличивается интенсивность процесса. Таким образом, введение в реакционную смесь небольшого количества вторичных или третичных аминов в качестве акцепторов образующихся жирные кислоты позволяет липолиз твердого животного жира провести практически количественно за 20 ч при 20 °С или в течение 6 ч при 45 °С [104].
Для ускорения гидролиза и увеличения выхода продуктов часто использовали различные растворители. Например, был проведен гидролиз кокосового масла в системе органический растворитель-вода с использованием липазы из Candida lipolytica. Кроме того, применение органического растворителя позволило проводить гидролиз твердого говяжьего жира, пищевого и непищевого лярда под каталитическим действием липаз из Candida ntgosa при температурах ниже температуры плавления жиров. Степень гидролиза говяжьего жира за 24 часа составила 94 % при температуре 31 °С, а степень гидролиза лярда 97 % при 25 °С. Так, использование органической растворителей при гидролизе жиров и масел липазами позволяет избежать стадии эмульгирования субстрата в водной среде [1].
Японскими исследователями была проведена модификация липазы из Pseudomonas fluorescens производными полиэтиленгликоля типа 2,4-бис (о-метокси-полиэтиленгликоль)-6-хлортриазина. Из за того, что модифицированный фермент более термостабильны и могут быть использованы многократно, особенно более растворим в безводных органических растворителях. Таким образом, модификация липазы приводит к увеличению их гидрофобное и тем самым к интенсивному процессу гидролиза [1].
Гидролиз оливкового масла панкреатической липазой, включенной в обращенные мицеллы ПАВ позволяет повысить выход жирных кислот 2-3,5 раза чем в водной фазе [104]. Кроме того, в системе обращённых мицелл АОТ ферментный препарат панкреатической липазы гидролизует льняное и рапсовое масла в 3-5 раз