Исследование взаимодействия с лигандами цитокининовых рецепторов арабидопсиса и кукурузы

• Автор: Кривошеев, Дмитрий Михайлович
• Шифр специальности: 03.01.05
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 179 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Список условных сокращений
ВВЕДЕНИЕ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРТЫ
1. Открытие цитокининов и их химическая структура
2. Физиологическое действие цитокининов
3. Метаболизм цитокининов
4. Открытие рецепторов цитокининов
5. Двухкомпонентные системы передачи сигнала
6. Доменная структура рецепторов цитокининов
7. Трансдукция цитокининового сигнала и вовлеченные белки 29
8. Субклеточная локализация рецепторов
9. Лиганд-связывающие свойства рецепторов
10. Распределение рецепторов цитокининов в растении и их физиологическая
роль
11. Влияние мутаций на активность рецепторов
12. Пространственная структура рецептора
13. Синтетические аналоги цитокининов, взаимосвязь между структурой
соединений и их цитокининовой активностью
13.1 Влияние положения боковой цепи и заместителей в адениновом
гетероцикле на цитокининовую активность соединений
13.2 Влияние модификаций пуринового гетероцикла на цитокининовую
активность соединений
13.3 Влияние модификаций боковой цепи на цитокининовую активность соединений
13.4 Производные мочевины и амидов

14. Антицитокинины

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
1. Реактивы
2. Модельные системы
2.1 Модельные системы на основе E
2.2 Модельные системы на основе трансгенного арабидопсиса
2.3 Модельная система на основе амаранта
3. Сайт-специфичный мутагенез методом ПЦР
4. Получение химически-компетентных клеток E
5. Химическая трансформация E
6. Выделение плазмид из E
7. Рестрикция
8. Получение химически компетентных A. tumefaciens GV310191
9. Трансформация химически компетентных A. tumefaciens
GV3101
10. Трансформация растений Nicotiana benthamiana
11. Получение сферопластов
12. Выделение мембран растительных клеток
13. Радиолигандный метод анализа связывания цитокининов с рецепторами в составе бактерий и сферопластов
14. Радиолигандный метод анализа связывания цитокининов с рецепторами в составе растительных мембран
15. Анализ активности ß-глюкуронидазы (GUS) в проростках Рarrs'GUS арабидопсиса
16. Вестерн-блотинг
17. Биотест на цитокининовую активность с проростками амаранта (амарантовый биотест)
18. Компьютерное моделирование сайта связывания цитокининов
19. Математические и статистические методы анализа

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
1. Исследование цитокининовой активности синтетических производных
аденина и их способности связываться с рецепторами цитокининов
2. Антицитокининовая активность БОМА
3. Исследование свойств рецепторов цитокининов в составе растительных мембран
4. Влияние точечных мутаций в CHA.SE-домене на лиганд-связывающие свойства рецептора 2тНК1
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
БЛАГОДАРНОСТИ

пигментации, а мутация crß, б приводила к гибели растений уже на стадии зародыша (Rashotte et al., 2006). Вероятно, CRF контролируют экспрессию генов, экспрессия которых не зависит от ARR В-типа. Таким образом, помимо дублирования функций регуляторов ответа типа В, CRF играют свою индивидуальную роль в регуляции роста и развития растений.
Помимо двуххомпонентной системы в передаче цитокининового сигнала может принимать участие фосфолипаза D. В пользу этого говорит ряд фактов. Накопление GUS у растений Рлми-'С-арабидопсиса снижалось на 70-80% в присутствии первичных спиртов (пропанола-1 или бутанола-1), которые являются специфическими ингибиторами фосфолипаз D. Соответствующие вторичные спирты данного эффекта не вызывали (Романов, 2009). В модельной системе на основе проростков амаранта с помощью кинетико-ингибиторного анализа было показано раннее действие первичных спиртов, происходящее до активации транскрипции (Romanov et al., 2000). В модельной системе на основе проростков арабидопсиса было также показано уменьшение содержания цитокинин-зависимых транскриптов в присутствии первичных спиртов (Romanov et al., 2002).
Позднее были получены прямые данные об активации фосфолипазы D уже через 10 мин после добавления цитокининов к проросткам амаранта. Тем не менее, конкретный механизм участия фосфолипазы D в трансдукции цитокининового сигнала в настоящее время не известен. Данный механизм может быть основан на способности фосфолипазы D взаимодействовать с различными белками и влиять на их биологическую активность или на способности вызывать перераспределение белков между различными компартментами клетки (Романов, 2009; Колесников и др., 2012).
8. Субклеточная локализация рецепторов
Согласно структурным данным, цитокининовый рецептор является интегральным трансмембранным белком, CHASE домен которого расположен по одну сторону от мембраны, а гистидинкиназный и ресиверный домены