Иммунотерапевтическая активность фрагментов альфа7-субъединицы ацетилхолинового рецептора и прионного белка в экспериментальных моделях болезни Альцгеймера

• Автор: Камынина, Анна Владимировна
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Пущино
• Количество страниц: 138 с. : ил.

Содержание
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ «Генез болезни Альцгеймера и подходы к ее терапии»
1. Биохимические маркеры болезни Альцгеймера
2. Роль бета-амилоида в патогенезе болезни Альцгеймера
2.1. Образование бета-амилоида
2.2. Агрегация бета-амилоида
2.3. Механизмы реализации токсического действия бета-амилоида
3. Участие нейрональных мембранных белков в патогенезе болезни Альцгеймера
3.1. Участие глутаматэргической системы в патогенезе болезни Альцгеймера
3.2. Участие холинэргической системы в патогенезе болезни Альцгеймера
3.3. Участие прионного белка в патогенезе болезни
Альцгеймера
4. Существующие лекарственные средства, применяемые в медицине для терапии болезни Альцгеймера
5. Разрабатываемые подходы к терапии болезни Альцгеймера
5.1. Анти-амилоидная терапия болезни Альцгеймера
5.1.1. Препараты, препятствующие агрегации бета-амилоида
5.1.2. Препараты, действующие на процессы образования бета-амилоида
5.1.3. Анти-амилоидная иммунотерапия болезни Альцгеймера
5.1.3.1. Активная иммунизация
5.1.3.2. Оптимизация структуры экзогенного бета-амилоида как
способ совершенствования вакцины против болезни Альцгеймера
5.1.3.3. Пассивная иммунизация
5.1.3.4. Гипотезы иммунотерапевтического действия антител к бета-амилоиду
5.2. Нейрональные мембранные белки как мишени для разработки новых
подходов к терапии болезни Альцгеймера

6. Экспериментальные модели болезни Альцгеймера
II. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
1. Исследование иммунотерапевтической активности фрагментов а7-субъединицы
АХР на животных с экспериментально индуцированной формой БА
1.1. Исследование действия иммунизации конъюгированными с белком-
носителем фрагментами а7-субъединицы АХР на животных
экспериментально индуцированной формой БА
1.1.1. Выбор фрагментов а7-субъединицы АХР
1.1.2. Действие иммунизации конъюгированными с белком-носителем фрагментами а7-субъединицы АХР на память БЭ мышей
1.1.3. Действие иммунизации конъюгированными с белком-носителем фрагментами а7-субъединицы АХР на уровень бета-амилоида в мозгу БЭ мышей
1.2. Исследование иммуногенной активности свободных фрагментов 07-
субъединицы АХР на мышах
1.3. Исследование действия иммунизации свободными фрагментами 07-
субъединицы АХР на животных с экспериментально индуцированной формой БА
1.3.1. Действие иммунизации фрагментами а7-субъединицы АХР на память БЭ животных
1.3.2. Определение содержания антител к фрагментам а7-субъединицы АХР в сыворотке крови и спинномозговой жидкости БЭ мышей
1.3.3. Эффект иммунизации фрагментом 173-193 а7-субъединицы АХР на уровень бета-амилоида в мозгу БЭ мышей
1.3.4. Влияние иммунизации фрагментом 173-193 а7-субъединицы АХР на уровень а7-типа АХР в мозгу БЭ мышей
1.4. Исследование действия антител к фрагменту 173-193 а7-субъединицы АХР на животных с экспериментально индуцированной формой БА
1.4.1. Исследование влияния пассивного введения сыворотки, содержащей антитела к фрагменту 173-193 а7-субъединицы АХР, на память БЭ мышей
1.4.2. Получение аффинноочищенных мышиных антител к фрагменту 173-193 а7-субъединицы АХР
1.4.3. Исследование влияния пассивного введения антител к фрагменту 173-
193 на память БЭ мышей

2. Исследование иммунотерапевтической активности фрагментов прионного белка
а7-субъединицы АХР на животных с экспериментально индуцированной формой

2.1. Выбор фрагментов прионного белка
2.2. Исследование действия иммунизации конъюгированными с белком-носителем фрагментами прионного белка на животных с экспериментально индуцированной формой БА
2.2.1. Влияние иммунизации фрагментами прионного белка на память БЭ мышей
2.2.2. Определение содержания антител к прионным фрагментам в сыворотке крови и спинномозговой жидкости БЭ мышей
2.2.3. Влияние иммунизации фрагментами прионного белка на уровень бета-амилоида в мозгу БЭ мышей
2.2.4. Влияние иммунизации фрагментами прионного белка на морфологическое состояние нейронов гиппокампа и коры мозга БЭ мышей
2.3. Исследование действия антител к фрагменту 95-123 прионного белка на животных с экспериментально индуцированной формой БА
2.3.1. Получение аффинноочищенных мышиных антител к фрагменту 95-123 прионного белка
2.3.2. Исследование влияния пассивного введения антител к фрагменту 95-123 прионного белка на память БЭ мышей
2.3.3. Исследование влияния пассивного введения антител к фрагменту 95-123 прионного белка на уровень бета-амилоида в мозгу БЭ мышей
3. Исследование действия антител к фрагменту 173-193 а7-субъединицы АХР и к
фрагменту 95-123 прионного белка в клеточной модели БА
3.1. Получение аффинноочищенных кроличьих антител к фрагменту 173-193 а7-субъединицы АХР и к фрагменту 95-123 прионного белка
3.2. Исследование отсутствия связывания аффинноочищенных кроличьих
антител к фрагментам 173-193 а7-субъединицы АХР и 95-123 прионного белка с (3-амилоидом
3.3. Исследование действия аффинноочищенных кроличьих антител к
фрагментам 173-193 а7-субъединицы АХР и 95-123 прионного белка на клеточную гибель, вызванную бета-амилоидом

5.1.3. Анти-амилоидная иммунотерапия болезни Альцгеймера
5.1.3.1. Активная иммунизация
В современной литературе, посвященной терапии БА, большое внимание уделяется иммунологическим подходам к лечению этого заболевания. Данное направление терапии основано на иммунизации пептидными фрагментами бета-амилоида и индукции антител к нему. В результате такой иммунизации антитела специфически связываются с патогенным пептидом и уровень бета-амилоида снижается. Предотвращение агрегации бета-амилоида и выведение его из мозга стали одними из основных критериев оценки эффективности терапии БА. Индукция антител к бета-амилоиду рассматривается как главный инструмент для достижения этой цели. Это направление на сегодняшний день является наиболее перспективным для лечения БА.
В 1999 году появились первые работы, демонстрирующие способность антител к бета-амилоиду ликвидировать амилоидные бляшки, тем самым приостанавливая и замедляя процесс развития БА. В работах на трансгенных мышах с мутациями в гене белка-предшественника бета-амилоида АРР ученые исследовали влияние иммунизации бета-амилоидом на формирование амилоидных бляшек. Оказалось, что введение бета-амилоида в адъюванте Фрейнда предотвращало формирование сенильных бляшек, а также замедляло процесс дистрофии нейронов [161]. В дальнейших работах по изучению вакцинации бета-амилоидом трансгенных мышей было показано не только снижение уровня бета-амилоида, но и улучшение когнитивных функций мозга животных [162]. Основываясь на том, что в моделях на трасгенных животных была продемонстрирована высокая эффективность бета-амилоидной вакцинации снижать уровень бета-амилоида в тканях мозга и улучшать когнитивные функции мозга, стали проводиться клинические испытания анти-амилоидной иммунотерапии на пациентах с признаками Б А [163]. На первой фазе клинических испытаний 24 пациентам внутримышечно вводили агрегированный человеческий бета-амилоид 1-42 (AN 1792) в QS-21 адъюванте и показали, что такая иммунизация не оказывала негативного влияния на больных. В октябре 2001 года началась вторая стадия клинических испытаний на 372 пациентах, страдающих БА. В декабре 2001 года исследования были приостановлены в связи с тем, что у 6% пациентов, которые получали инъекцию бета-амилоида, обнаружился асептический менингоэнцефалит [163-165]. Следует отметить, что осложнения не коррелировали с титрами противоамилоидных антител.
Исследования пациентов с менингоэнцефалитом показали, что в их мозгу содержалось большое количество CD4+ и CD8+ Т-клеток, при этом их концентрация не коррелировала с концентрацией противоамилоидных антител [166,167]. Было также показано, что