Природные каталитически активные антитела при вирусных и бактериальных инфекциях

• Автор: Пархоменко, Таисия Александровна
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 114 с. : ил.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АГ - антиген(ы)
АИЗ - аутоиммунное(ые) заболевание(я)
АИТ - аутоиммунный тиреоидит АТ - антитела
ВИП - вазоактивный интестинальный пептид
ВИЧ - вирус иммунодефицита человека
ВКР - В-клеточный рецептор
ВКЭ - вирус клещевого энцефалита
ГХИ - гнойная хирургическая инфекция
ДТТ - 1,4-дитиотреитол
КЭ - клещевой энцефалит
ПААГ - полиакриламидный гель
ПВДФ - поливинилен дифторид
ПХ - пероксидаза хрена
РВ - рожистое воспаление
РС - рассеянный склероз
СКВ - системная красная волчанка
СКВ - системная красная волчанка
СПИД - синдром приобретенного иммунодефицита человека Трис - трис(гидроксиметил)аминомеган У А - удельная активность ЭДТА - этилендиаминтеграацетат
Сь и Сн - константные области легкой и тяжелой цепи антител соответственно Бс - константный домен антител Н - тяжелая цепь иммуноглобулинов
(М) - иммуноглобулин(ы) класса О (М)
И - легкая цепь иммуноглобулинов - додецилсульфат натрия Уь и Ун- вариабельные области легкой и тяжелой цепи антител соответственно

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Природные иммуноглобулины
1.1.1. Структура и функции иммуноглобулинов
1.1.2. Антитела как ферменты
1.1.3. Механизмы образования антител с каталитической активностью
1.2. Природные абзимы в норме и при патологиях
1.2.1. Каталитически активные антитела в норме
1.2.2. Каталитически активные антитела при аутоиммунных заболеваниях..
1.2.3. Каталитически активные антитела при инфекционных заболеваниях..
1.3. ДНК-гидролизующис антитела
1.3.1. Анти-ДНК антитела в норме и при аутоиммунных патологиях
1.3.2. Роль ДНК-абзимов в патогенезе АИЗ
1.3.3. Механизм действия ДНК-гидролизующих антител
1.4. Инфекционные заболевания и иммунитет
1.4.1. Гуморальный иммунный ответ на инфекции
1.4.2. Клещевой энцефалит
1.4.3. Бактериальные инфекции
1.4.4. Инфекции и аутоиммунные заболевания
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Реактивы и материалы
2.2. Методы
2.2.1. Исследуемая группа больных инфекционными заболеваниями
2.2.2. Выделение иммуноглобулинов крови
2.2.3. Электрофоретический анализ белков
2.2.4. Определение концентрации белка
2.2.5. Концентрирование препаратов белка
2.2.6. Перенос белков на поливинилен дифторидную мембрану
и окрашивание коллоидным раствором серебра
2.2.7. Иммуноферментное окрашивание IgG и их субъединиц
2.2.8. Определение активности антител в реакции гидролиза ДНК
плазмиды pBluescript

2.2.9. Аффинная хроматография IgG на ДНК-целлюлозе
2.2.10. Определение кинетических параметров реакции гидролиза суперскрученной ДНК плазмиды препаратами IgG
2.2.11. Разделение молекул IgG с легкими цепями к- и Х-типа
2.2.12. Разделение иммуноглобулинов класса G на подклассы
(IgGl, IgG2, IgG3, IgG4)
2.2.13. Аффинная хроматография IgG на анти-Ь-сефарозе
2.2.14. Проведение pH-шока для препаратов антител
2.2.15. Тестирование ДНК-гидролизующей активности антител in situ в геле, содержащем субстрат
2.2.16. Исследование металл-зависимости реакции гидролиза
ДНК препаратами IgG
2.2.17. Определение относительного содержания разных
подклассов IgG ИФА
2.2.18.' Получение сорбента анти-к- и aHTH-7.-Sepharose
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Выделение иммуноглобулинов из крови человека
3.2. Скрининг ДНК-гидролизующей активности в препаратах антител из крови больных инфекционными заболеваниями
3.3. Доказательства наличия у антител крови больных
инфекционными заболеваниями каталитических функций
3.3.1. Гель-фильтрация антител в условиях «кислого шока»
3.3.2. Взаимодействие абзимов с аффинными сорбентами
3.3.3. Определение ферментативной активности абзимов в геле in situ
3.4. Исследование зависимости каталитической активности антител
от концентрации ионов металлов
3.5. Взаимодействие ДНК-абзимов из крови больных клещевым
энцефалитом с ДНК-целлюлозой
3.6. Кинетические параметры реакции гидролиза ДНК препаратами
IgG крови больных инфекционными заболеваниями
3.7. Определение типа легких цепей антител, участвующих в гидролизе ДНК
3.8. Определение изотипов антител (IgGl-IgG4), участвующих в гидролизе ДНК
3.9. Исследование цитотоксичности препаратов IgG из крови больных
клещевым энцефалитом

1.4.2. Клещевой энцефалит
Вирус клещевого энцефалита относится к роду Flavivirus (группа В) семейства Flaviviridae. Резервуаром вируса КЭ в природе являются иксодовые клещи (Ixodes persulkatus, Ixodes ricinus). Ареал КЭ простирается широкой непрерывной полосой по южной части зоны лесов и лесостепи Азии и Европы до Тихого и Атлантического океанов. Наибольшая часть ареала КЭ приходится на Российскую Федерацию, где он выявлен в 38 субъектах федерации (рис. 5). Весьма неблагополучная ситуация с заболеваемостью КЭ в Новосибирске. Самые популярные рекреационные зоны расположены вокруг Академгородка СО РАН под Новосибирском. Показатель заболеваемости КЭ в Новосибирске за последние годы находится в пределах 21,01—24,09 (количество больных на 1000 человек) [179].
Входные ворота инфекции при заражении - кожа и слизистая оболочка пищеварительного тракта. Вирус характеризуется нейротропностью, в частности к клеткам шейных сегментов и их аналогов в бульбарных отделах продолговатого мозга и вызывает инфекцию центральной нервной системы с широким спектром клинических проявлений — от менингитов средней степени тяжести до тяжелых форм энцефалитов с миелитами и без них.
Рис. 5. Карта распространения клещевого энцефалита.
Возбудитель острого и хронического клещевого энцефалита, как и вирионы всех флавивирусов, имеет сферическую форму диаметром до 50-60 нм, покрытую