Трансформация картофеля и табака генами дефензинов и ингибитора протеиназ BWI-1a

• Автор: Чередниченко, Михаил Юрьевич
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 134 с. : ил.

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Ингибиторы протеиназ растений
1.1.1. Протеолитические ферменты
1.1.2. Ингибиторы протеиназ растений
1.1.2.1. Локализация и индукция действия ингибиторов протеиназ
растений
1.1.2.2. Участие ингибиторов протеиназ в регуляции активности
внутриклеточных ферментов растений
1.1.3. Ингибиторы протеиназ в системе защиты растений от
биотических стрессов
1.1.3.1. Ингибиторы протеиназ в системе защиты растений от
насекомых
1.1.3.2. Ингибиторы протеиназ в системе защиты растений от
патогенных микроорганизмов
1.2. Дефензины растений
1.2.1. Структура дефензинов растений
1.2.2. Локализация и предполагаемый механизм действия
дефензинов растений
1.2.3. Классификация дефензинов растений
1.2.4. Фунгицидная активность дефензинов растений
1.2.5. Бактерицидная активность дефензинов растений
1.2.6. Вклад дефензинов в защиту растения-хозяина
1.3. Болезни картофеля
1.4. Генетическая инженерия картофеля

ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2Л. Растительный материал
2.2. Векторные конструкции
2.3. Культивирование эксплантов in vitro
2.4. Методика проведения трансформации растений картофеля и
табака
2.5. Молекулярный анализ полученных трансформированных
линий картофеля и табака
2.6. Определение суммы растворимых фенольных соединений,
накопления флавоноидов и лигнина
2.7. Статистическая обработка данных
ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Зависимость эффективности регенерации от генотипа
выбранных сортов картофеля и условий проведения трансформации
3.1.1. Морфогенетическая способность in vitro различных сортов
картофеля
3.1.2. Определение оптимальной концентрации антибиотиков при
проведении агробактериальной трансформации картофеля и табака
3.1.3. Влияние условий проведения трансформации картофеля и
табака на эффективность последующей регенерации
3.2. Трансформация картофеля и табака конструкциями,
содержащими гены фунгицидных белков
3.3. Молекулярно-биологический анализ полученных
трансформированных линий картофеля и табака
3.3.1. ПЦР-анализ трансформированных линий картофеля и табака

3.3.2. Блот-гибридизация по Саузерну
3.3.3. Проверка фунгицидной и бактерицидной активности клеток полученных трансгенных линий картофеля и табака
3.3.4. Анализ экспрессии функциональных генов га и 1р в клетках трансгенных линий (уровень мРНК)
3.3.5. Анализ содержания фенольных соединений в трансгенных растениях картофеля
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1. Растительный материал
В работе были использованы растения картофеля 20 сортов отечественной и зарубежной селекции, отличающиеся степенью устойчивости к основным фитопатогенам. Стерильные пробирочные растения отобранных сортов были предоставлены к.б.н. Мусиным С.М. и к.б.н. Хромовой Л.М. (ВНИИ картофельного хозяйства им. А.Г. Лорха)
Альянс (ВНИИКХ) Раннеспелый, столового назначения. Товарная урожайность до 320 ц/га. Ростки: этиолированные неокрашенные, световые -основание неокрашенное. Низкая устойчивость к фитофторозу листьев и ниже среднего к фитофторозу клубней, парше и ризоктониозу; устойчив к раку; неустойчив к нематодам; выше среднего поражается макроспориозом, относительная устойчивость к сухим гнилям.
Бинтьс (Голландия) Раннеспелый, пригоден к переработке. Неустойчив к фитофторозу.
Брянский ранний (Брянская опытная станция по картофелю ВНИИКХ) Раннеспелый, столовый. Урожайность в госиспытании до 240 ц/га. Ростки: этиолированные — слабо-сине-фиолетовые, световые — основание темно-сине-фиолетовое. Сильно восприимчив к фитофторозу листьев, относительно устойчив к фитофторозу клубней; относительно устойчив к вирусу скручивания листьев, среднеустойчив к мозаичным вирусам и ризоктониозу, устойчив выше среднего к парше, высокоустойчив к сухим гнилям, устойчив к раку, неустойчив к нематодам, плохо переносит переувлажнение почвы.
Дезире ("Де З.П.С." Б.А., Голландия). Среднеспелый, универсального использования. Товарная урожайность до 140 ц/га. Устойчив выше среднего к фитофторозу листьев и клубней, устойчив ниже среднего к ВСЛК, выше