Мутанты и гибриды в изучении генотипической изменчивости трансформированных клеток в культуре

• Автор: Игнатова, Татьяна Николаевна
• Шифр специальности: 03.00.17
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 1983
• Место защиты: Ленинград
• Количество страниц: 281 c. : ил

I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. КОНСТИТУТИВНЫЕ ХАРАКТЕР РЕГУЛЯЦИИ РАЗМНОЖЕНИЯ ТРАНСФОРМИРОВАННЫХ МЕТОК И 1ШИОТРОНШЙ
ХАРАКТЕР ИЗМЕНЕНИИ ИХ ФЕНОТИПА
1.2. ПОДВИЖНЫЕ ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ЭЛЕМЕНТЫ КАК ФАКТОР ГЕНОТИПИЧЕСКОЙ ИЗМЕНЧИВОСТИ СОМАТИЧЕСКИХ КЛЕТОК
1.3. ОНКОГЕНЫ В ИЗУЧЕНИИ ГЕНОТИПИЧЕСКОЙ ИЗМЕНЧИВОСТИ СОМАТИЧЕСКИХ КЛЕТОК В КУЛБТУРЕ
1.4. МЕХАНИЗМЫ АКТИВАЦИИ ОНКОГЕНОВ
1.5. ГЕНОТИПИЧЕСКАЯ ИЗМВДШ®;. ТРАНСФОРМИРОВАННЫХ
клеток здоустшчивых1тП
1.6. ХРОМОСОМНЫЕ ПЕРЕСТРОЙКИ В КЛЕТКАХ ОПУХОЛЕВЫХ
И ЯДОУСТОЙЧИВЫХ ЛИНИЙ
П. ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИИ
II. I. Линии клеток и их краткая характеристика
П.2. Селекция клонов, устойчивых к ингибиторам
размножения
П.З. Определение эффективности клонирования
линий и клонов
П.4. Определение скорости размножения и величины
насыщающей плотности популяций
П. 5. Гибридизация клеток с использованием целых
клеток и микроклеток
П.6. Получение "фокусов" трансформации-в культурах
линии СдЦ/ЮТ 1/2
11.7. Определение онкогенности клеток
П. 8. Определение содержания цАМФ и активности
ферментов АЦ и ФДЭ

П.9. Определение активности фермента Иа^к+-АТФазы
П.10. Определение потоков моновалентных катионов
П.П. Определение дыхательной активности клеток
П.12. Определение общего содержания и количества
индивидуальных ганглиозидов
П.13. Изучение особенностей митохондрий и митохондриальной ДНК
Ш. РЕЗУЛЬТАШ И ОБСУЖДЕНИЕ
Ш.І. ИССЛЕДОВАНИЕ ФЕНОТИПИЧЕСКОЙ ИЗМЕНЧИВОСТИ В ПОПУЛЯЦИЯХ ТРАНСФОРМИРОВАННЫХ КЛЕТОК ПО ПРИЗНАКАМ УСТОЙЧИВОСТИ К ИНГИБИТОРАМ РАЗМНОЖЕНИЯ
Ш.І.І. Влияние БДУ, ЭМС, АД, ЛМЕА и гистона НІ на частоту обнаружения устойчивых к АГ вариантов
Ш.І.2. Влияние ЭМС, МННГ на частоту обнаружения
вариантов, устойчивых к БЭ и КХ
Ш.2. ИССЛЕДОВАНИЕ ФЕНОТИПИЧЕСКОЙ СТАБИЛЬНОСТИ КЛОНОВ, УСТОЙЧИВЫХ К АГ, БЭ и КХ ПОСЛЕ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ В НЕСЕЛЕКТИВНЫХ УСЛОВИЯХ
Ш.2.І. Изучение стабильности наследования признака устойчивости к АГ в клонах популяции ДСНО и ЛСНО
Ш.2.2. Изучение стабильности наследования признака устойчивости к БЭ
Ш.2.3. Изучение стабильности наследования признака устойчивости к КХ
Ш.З. ПРИРОДА. УСТОЙЧИВОСТИ ВАРИАНТОВ К БЭ И КХ
Ш.З.І. Множественная устойчивость резистентных вариантов к неселективным агентам. Меж-клональная и внутриклональная гетерогенность.
Ш.З.2. Исследование проницаемости мембраны клеток устойчивых вариантов. Потенциирование проницаемости
Ш.3.3. Наследование устойчивости к БЭ и КХ в
гибридах

Ш.3.4. Влияние БЭ на частоту обнаружения "фокусов"
трансформации в культурах линии С HTI0 1/2
Ш.4. ИССЛЕДОВАНИЕ ОСОБЕННОСТЕЙ ФЕНОТИПА И ПРИЗНАКОВ,
СВЯЗАННЫХ С РАЗМНОЖЕНИЕМ КЛЕТОК; УСТОЙЧИВЫХ Ж
БЭ и КХ
Ш.4.1. Исследование зависимости размножения устойчивых клонов от сывороточных факторов и от плотности культуры
Ш.4.2. Наследование в гибридах способности клеток,
устойчивых к БЭ, размножаться без сыворотки
Ш.4.3. Связь между изменением внутриклеточного и
экстрактеточного цАМФ и изменением характера размножения клеток, чувствительных и устойчивых к БЭ
Ш.4.4. Связь размножения клеток чувствительных и устойчивых вариантов с гидролитической активностью Ша+/к+-АТФазы и потоками моновалентных катионов
Ш.4.5. Изучение количества и состава ганглиозидов
клеток, чувствительных и устойчивых к БЭ
III.4.6. Онкогенность клеток, устойчивых к БЭ и КХ.
Наследование онкогенности в гибридах
Ш.4.7. Исследование особенностей митохондрий и внутриклеточных мембран в клетках, устойчивых к БЭ
1.4.8. Изучение дыхательной активности и цитохромс-оксидазы клеток, устойчивых к БЭ
Ш.4.9. Определение ДНК в митохондриях клеток ь,
чувствительных и устойчивых к БЭ
Ш.5. ПОВЕДЕНИЕ ИНДИВИДУАЛЬНЫХ ХРОМОСОМ В КЛЕТКАХ,
УСТОЙЧИВЫХ К КХ И БЭ, И ЕГО НАСЛЕДОВАНИЕ В
. ГИБРИДАХ
Ш.5.1. Последовательность перестроек хромосом в
клетках субклонов Г-1
Ш.5.2. Последовательность перестроек хромосом в
клетках субклонов V79, устойчивых к БЭ
Ш.5.3. Изучение наследования в гибридах особенностей кариотипа и способности к синтезу сывороточных белков
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
В Ы В 0 Д Ы '
ЛИТЕРАТУРА

ras, myc, mos активируются такие и посредством перестроек хромосом. Точковые мутации в последовательности ДНК прото-онкогенов активируют .онкогены с-Ъав и c-ras (см. табл.1»1). В механизмах активации можно обнаружить как общие черты, так и индивидуальные, специфические.
Активация прото-онкогенов имеет тканевую специфичность (см. обзор 606 ) и время-специфичность, т.е. зависимость как от тканевой специфичности (дифференцировки), так и от стадии дифференци-ровки (355 ), Как это ни парадоксально, но ашлификации, делеции, рекомбинации и другие перестройки, осуществляемые с помощью ПГЭ, по существу могут быть регуляторными механизмами онтогенеза многоклеточных организмов (см. обзор53 ). И для них, следовательно, характерна, не только тканеспецифичность, но и время-специфичность. ДНК-перестройки оказывают воздействие сразу на большое количество признаков, кодируемых генами, в которые или рядом с которыми они инсерцируют, т.е. имеют плейотропный характер действия. Они одновременно могут менять такие характеристики клеток, как скорость пролиферации, их чувствительность к регуляторным воздействиям и черты дифференцировкии Должны быть генетически запрограммированы (см. обзоры 7,511 ). Они обнаруживаются в клетках многоклеточных организмов, находящихся на разных ступенях филогенеза. Возможность осуществления различных ДНК-перестроек в клетках эукариот теперь представляется реальней в связи с обнаружением в их клетках последовательностей, имеющих способность к транспозициям (614) описанных ранее у кукурузы (393 ), у микроорганизмов дрожжей и дрозофилы (см. обзоры:56,57,134 ), а также так называемых
"умеренных" (средних) повторов ДНК, которым приписывается функция поддержания и увеличения собственного количества в геноме (" selfish « днк), что однако не исключает вероятность выполнения шли и других функций (см. обзор 123 ). Последовательности онкогенов,