Пространственные и временные характеристики экспрессии генов, кодирующих регуляторные факторы TGFbeta2, PITX2 и FOXC1, в тканях глаза человека в ходе пренатального развития

• Автор: Фирсова, Наталья Викторовна
• Шифр специальности: 03.00.30, 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 128 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
Введение
Глава 1. Обзор литературы. Молекулярно-генетические аспекты развития глаза позвоночных, в том числе человека
1.1. Транскрипционные факторы, принимающие участие в развитии глаза позвоночных
1.2. Роль сигнальных белков в морфогенезе глаза
1.3. Определяющая роль взаимодействий регуляторных факторов в развитии глаза
1.4. Медико-биологические аспекты развития глаза человека
Глава 2. Материалы и методы исследования
2.1. Объект исследования
2.2. Препарирование тканей
2.3. Выделение тотРНК
2.4. Выделение мРНК
2.5. Синтез кДНК
2.6. Контроль на загрязнение геномной ДНК
2.7. Нормировка кДНК библиотек
2.8. Конструирование праймеров
2.9. Полимеразная цепная реакция
2.10. Агарозный электрофорез
2.11. Выделение ДНК из агарозного геля
2.12. Клонирование в векторе pCR® 11-ТОРО®
2.13. Выделение плазмидной ДНК
2.14. Подготовка РНК зондов
2.15. In situ гибридизация
2.16. Иммуногистохимия

2.17. Интернет-ресурсы
Глава 3. Результаты исследования
3.1. Анализ уровня экспрессии генов Р1ТХ2 и РОХС1 в структурах глаза в ходе развития
3.2. Локализация мРНК Р1ТХ2 в тканях развивающегося глаза
3.3. Локализация белков ТСРЬе1а2, Р1ТХ2 и РОХС1 в тканях глаза на различных стадиях развития
3.3.1. Локализация белка ТОРЬе1а2
3.3.2. Локализация белка Р1ТХ2
3.3.3. Локализация белка РОХС1
Глава 4. Обсуждение
4.1. Экспрессия ТСРЬе(а2, Р1ТХ2 и РОХС1 в роговице и иридокорнеальном углу глаза человека в ходе пренатального развития
4.2. Экспрессия TGFbeta2, Р1ТХ2 и РОХС1 в хрусталике в ходе пренатального развития
4.3. Экспрессия ТСРЬе1а2, Р1ТХ2 и РОХС1 в сетчатке в ходе пренатального развития
4.4. Экспрессия TGFbeta2, Р1ТХ2 и РОХС1 в цилиарном теле в ходе пренатального развития
4.5. Экспрессия ТСРЬега2, Р1ТХ2 и РОХС1 в пигментном эпителии в ходе пренатального развития
4.6. Заключение
Выводы
Список литературы

Введение
Изучение экспрессии регуляторных генов, их дифференциальной активности в ходе развития организма, участие в дифференцировке клеток различного типа представляет собой одно из центральных направлений современной биологии, находящееся на стыке молекулярной генетики и биологии развития. Глаз является уникальной модельной системой для исследования молекулярно-генетических механизмов эмбриональной индукции, пролиферации, дифференцировки, миграции клеток, апоптоза и других процессов в ходе его развития в онтогенезе.
Глаз позвоночных, в том числе человека, состоит из морфологически и функционально различающихся тканей, в формировании которых принимают участие различные эмбриональные ткани: поверхностная
эктодерма, нейроэктодерма и мезенхима — производная нервного гребня. В ходе эмбриогенеза, кроме экспрессии основного каскада регуляторных факторов, важную роль играют и межклеточные взаимодействия тканей.
Развитие глаза обеспечивается согласованной работой множества регуляторных факторов, к которым относятся транскрипционные и РНК-связывающие факторы и сигнальные белки. Большинство этих факторов активирует или ингибирует транскрипцию гснов-мишеней. В настоящее время в литературе существует много данных по молекулярно-генетическим исследованиям формирования и нормального функционирования отдельных тканей глаза позвоночных. Многие работы посвящены изучению паттерна экспрессии регуляторных генов в ходе развития хрусталика, дифференцировки клеток сетчатки, иридо-корнеального угла, трабекулярной сети и др. (Cvekl, Piatigorsky, 1996; Close et ah, 2005; Hsieh et ah, 2002; Zhao et ah, 2002). Существенным достижением последних десятилетий в области исследования глаза было обнаружение высокой консервативности молекулярных механизмов, направляющих развитие глаза у представителей

Таблица 1. Связь мутаций некоторых генов с аномалиями развития глаза у человека.
Класс/название Заболевание
Аномалия Ригера Аномалия Петерса Иридиодисгенез Первичная глаукома Аниридия Катаракта