Сравнительное исследование реактивности сосудов малого и большого кругов кровообращения у крыс с легочной гипертензией

• Автор: Давыдова, Мария Павловна
• Шифр специальности: 03.00.13
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 110 с.

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ
ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР
ХАРАКТЕРИСТИКА ЛЕГОЧНОЙ ГИПЕРТЕНЗИИ
МОДЕЛИ ЛЕГОЧНОЙ ГИПЕРТЕНЗИИ
хроническая гипоксия
монокроталиновая модель легочной гипертензии
другие модели ЛГ
ИЗМЕНЕНИЕ СОСУДОРАСШИРЯЮЩИХ И СОСУДОСУЖИВАЮЩИХ
РЕАКЦИЙ ПРИ ЛЕГОЧНОЙ ГИПЕРТЕНЗИИ
производные аминокислот (катехоламины и серотонин)
вазоактивные факторы пептидной природы
Оксид азота. Эндотелийзависимое расслабление
общая характеристика синтазы оксида азота и действия

изменения активности NOS в кровеносных сосудах при легочной гипертензии у людей и при моделировании ЛГ на
животных
краткая характеристика растворимой гуанилатциклазы
изменения рГЦ при легочной гипертензии
реализация сигнала от рГЦ
изменение эндотелийзависимого расслабления в сосудах
большого круга кровообращения при ЛГ
ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ
МЕТОДИКА
моделирование легочной гипертензии
опыты in vivo
перфузия сосудов
измерение активности NO-синтазы
измерение активности растворимой гуанилатциклазы
Western blotting

РЕЗУЛЬТАТЫ
подтверждение развития легочной гипертензии
опыты in vivo
результаты опытов на изолированных сосудах
констрикторный ответ легочных и системных сосудов после
развития ЛГ
эндотелийзависимое расслабление в малом и большом круге
кровообращения после развития легочной гипертензии
эндотелийзависимое расслабление в малом и большом круге кровообращения на фоне перфузии тетрагидробиоптерина.... 64 эндотелий-независимая дилятация изолированных легочных и
системных сосудов
опыты с блокатором гуанилатциклазы
активность синтазы оксида азота
активность растворимой гуанилатциклазы
данные Вестерн-блоттинга
ОБСУЖДЕНИЕ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ
Легочная гипертензия (ЛГ) - заболевание, характеризующееся увеличением давления в малом круге кровообращения, ремоделингом легочных сосудов и гипертрофией правых отделов сердца. Вместе с увеличением кровяного давления в малом круге кровообращения, наблюдаются изменения системного артериального давления, которое может как уменьшаться, так и увеличиваться.
Легочная гипертензия сопровождается нарушением механизма эндотелийзависимого расслабления сосудов. Легочные артерии пациентов с ЛГ реагируют меньшим расслаблением на вещества, вызывающие эндотелийзависимое раслабление - ацетилхолин и аденозиндифосфат. При моделировании ЛГ на животных так же было обнаружено уменьшение ответа легочных сосудов на факторы, вызывающие дилятацию путем активации эндотелиальной синтазы оксида азота - ацетилхолин, кальциевый ионофор А23187, АБР - и на доноры N0, действующие на уровне гладких мышц сосудов.
Подавление реакции эндотелийзависимого расслабления может быть связано с уменьшением количества белка эндотелиальной ИО-синтазы, снижением или нарушением ее активности. Отсутствие одного из субстратов ферментативной реакции - Г-аргинина или кофермента тетрагидробиоптерина приводит к образованию активных форм кислорода и пероксинитритов, обладающих цитотоксическим действем.
Изменение активности М>синтазы может сильно повлиять на работу следующего звена эндотелийзависимой реакции - растворимой гуанилатциклазы. Избыток N0, как и активные формы кислорода, уменьшают активность рГЦ.
К веществам, осуществляющим регуляцию эндотелийзависимого расслабления легочных сосудов при ЛГ, относят в частности такие, которые циркулируют с кровью и могут воздействовать и на системные сосуды -например, эндотелии-1 и атриальный натрийуретический пептид. Однако об

железо через 6-координационное в новое 5-координационное состояние, в котором железо связано с оксидом азота, а гистидиновый остаток освобожден и может участвовать в катализе, что и приводит к возрастанию активности на два порядка. Переход в новое состояние может осуществляться двумя путями -быстрым и более медленным, связанным с взаимодействием N0 с белковым участком фермента. СО является блокатором фермента, так как реакция останавливается на стадии 6-координированного Ре, и имидазол остается связанным.[Недоспасов А.А., 1998] Для связывания тема с ферментом важны цистеиновые остатки р-субьединиды. Мутантный белок, не содержащий этих цистеиновых остатков, теряет способность удерживать тем и увеличивать активность в ответ на добавление доноров оксида азота, р-субьединица, видимо, имеет большее значение для связывания тема, так как изоформа, содержащая а-субьединицу, мутантную по остаткам цистеина, не утрачивала чувствительность к N0.
Каталитический домен имеет высокую степень гомологии с С-концевыми участками мембрансвязанной гуанилатциклазы и аденилатциклазы. Каталитический домен обеспечивает уровень базальной активности фермента, не связанной с активацией рГЦ через гем. Интересно, что базальной активностью будет обладать и белок, состоящий только из С-концевых частей а- и Р-субьедениц. Синтез сОМР зависит от двухвалентных катионов - Мя2+ или Мп2+. В присутствии магния увеличивается максимальная скорость (Ушах) образования сСМР и сродство СТР к ферменту. Кроме этого, рГЦ может содержать ион меди. Одновалентная медь способствует высвобождению N0 из нитрозотиолов. Однако свободные ионы меди ингибируют активность фермента, уменьшая Ушах.
Активность рГЦ регулируется и за счет изменения экспрессии мРНК, в основном, Р-субьединицы. Увеличенный уровень сАМР, эндотоксин и интерлейкин- 1Р снижают экспрессию. Другой путь уменьшения активности рГЦ - синтез субьединиц с пониженной активностью, конкурирующих за связывание с субьединицей исходного типа. Так, известна мутантная а-субьединица,