Особенности регуляции цитокининами экспрессии генов первичного ответа

• Автор: Ракова, Наталья Юрьевна
• Шифр специальности: 03.00.12
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 144 с. : ил.

Список условных сокращений
Литературный обзор
I. Цитокинины
1.1. Химическая структура цитокининов
1.2. Функциональная активность цитокининов
1.3. Действие цитокининов на ткани и органы растения
1.4. Действие цитокининов на клеточном уровне
II. Регуляторы ответа ARR
III. Рецепторы цитокининов
IV. Полиамины
V. Фосфолипаза Д
VI. Общие закономерности функционирования сигнальных систем
VI. 1. Аденилат- и гуанилатциклазная системы
VI.2. Липоксигеназная сигнальная система
VI.3. Участие NO в трансдукции сигнала
VI.4. МАР-киназный каскад
VI.5. Супероксидсинтазная система и молекулы, содержащие активные

формы кислорода
Материалы и методы исследований
1. Реактивы
2. Объекты исследований
2.1. Модельная система на основе амаранта
2.2. Модельная система на основе трансгенного арабидопсиса
2.3. Модельная система на основе трансгенной E.coli
3. Ингибиторный анализ на модели амаранта
4. Кинетико-ингибиторный анализ на модели амаранта
5. Оценка жизнеспособности проростков
6. Выявление влияния цитокининов на формирование супероксид-анионов на модели амаранта
7. Ингибиторный анализ на модели арабидопсиса
8. Определение активности GUS
9. Определение количества белка методом Bradford
10. Анализ действия полиаминов при их эндогенном накоплении
11. Анализ действия цитокининов на отдельные рецепторы на модели E. coli
12. Анализ содержания мРНК репортерного гена GUS
13. Электронная микроскопия
14. Гистохимическое окрашивание арабидопсиса с помощью X-Gluc_
15. Статистическая обработка данных
Результаты и обсуждение
I. Анализ способности различных цитокининов вызывать экспрессию генов первичного ответа
II. Исследование влияния некоторых компонентов различных
сигнальных путей на ранние эффекты цитокининов
II. 1. Возможность участия фосфолипазы Д
П.2. Возможность участия окиси азота NO
II.3. Возможность участия супероксид-радикалов и перекиси водорода
III. Исследование влияния полиаминов
Заключение
Выводы
Список цитируемой литературы
СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ
АБК - абсцизовая кислота
АГ - аминогуанидин
Асп - аспарагиновая кислота
АТФ - аденозинтрифосфат
БА - 6-бензиладенин
ГДФ - гуанидиндифосфат
Гис-гистидин
ГТФ - гуанидинтрифосфат
ДМСО - диметилсульфоксид
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
ИУК - индолил -3-уксусная кислота
мРНК - матричная РНК
НАДФ - никотинамидадениндинуклеотид
РНК - рибонуклеиновая кислота
СОД - супероксиддисмутаза
транс-Х - транс-зеатин
тРНК - транспортная РНК
ФлС - фосфолипаза С
ФлА - фосфолипаза А
ФлД - фосфолипаза Д
цАМФ - циклический аденозинмонофосфат
цГМФ - циклический гуанидинмонофосфат
цис-Х - цис-зеатин
ЭГТА - этиленгликоль-бис((3-аминоэтиловый эфир)тетраацетат ЭДТА - этилендиаминтетраацетат т|/2 - время полумаксимального эффекта
1-бут - бутан- 1-ол (1-бутанол, н-бутанол)
2-бут - бутано-2-ол (2-бутанол)

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
1. Реактивы
В работе были использованы: L-тирозин - соль (Sigma), НС1 (реахим, хч), аммиак (осч), фосфат натрия 1-замещенный (хч), фосфат натрия 2-замещенный (хч), Н202 3%, сахароза (хч), агароза (НЕЕО), канамицин (Duchefa), ампициллин (Sigma), р-меркаптоэтанол, Na-лауроилсаркозин, Na2-ЭДТА, Тритон Х-100 (Ferak), диметилсульфоксид (ДиаэМ, хч), 4-MUG (4-метилумбеллиферил-Р-О-глюкуронид) (Duchefa), 4-метилумбеллиферил-р-О-галактозид (Duchefa), X-Gluc (Duchefa), n-нитросиний тетразолий (Reanal).
Транс-зеашн, z/wc-зеатин (чистота 99,9%) (Sigma), БА (Sigma), широкий ряд веществ, обладающих цитокининовой активностью.
Спермин (Sigma), спермидин (Sigma), кадаверин (Sigma), путресцин (Sigma), аминотуанидин (Sigma), NAE 12, L-NMMA (Calbiochem), D-NMMA (Calbiochem), L-NAME (Calbiochem), D-NAME (Calbiochem), SNAP (Calbiochem), NOR3 (Calbiochem).
Спирты: 1-бутанол, 2-бутанол, этанол, метанол (перегнанные, осч).
0s04 (Россия, осч), эпоксидные смолы (Fluka), глутаровый альдегид (Fluka), окись пропилена (Fluka), параформальдегид (Fluka), уранил ацетат (Fluka), цитрат свинца (Fluka). Остальные реактивы отечественного производства марки хч.
2. Объекты исследований
2.1. Модельная система на основе амаранта
Этиолированные проростки амаранта при воздействии цитокининов накапливают в своих семядолях пигмент амарантин (бетацианин). Эта реакция основана основана на быстрой индукции транскрипции цитокинин-зависимых генов (генов первичного ответа) (Романов и др., 1999; Romanov et al., 2000) и относится к ранним эффектам цитокининов, проявляющимся через считанные часы после воздействия фитогормона. Данная система