Мутагенез, индуцированный N-метил-N,-нитро-N-нитрозогуанидином, в культурах делящихся и неделящихся клеток Escherichia Coli

• Автор: Цветкова, Наталья Александровна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Пермь
• Количество страниц: 137 с. : ил.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Спектр мутаций, индуцированных алкилирующими веществами
1.2. Эксцизионная репарация оснований
1.2.1. 3-метиладенин-ДНК гликозилазы
1.3. Адаптивная репарация
1.3Л. Репарация Об-алкилгуанина
1.3.2. Об-метилгуанин-ДНК метилтрансферазы E. coli
1.3.3. Роль сигма-факторов РНК-полимеразы
в механизме регуляции экспрессии генов адаптивного ответа
1.3.4. Терминация адаптивного ответа
1.4. SOS-зависимый механизм,
индуцированный МНИТ, в клетках E. coli
1.5. Современная модель SOS-ответа E. coli
1.6. Связь между адаптивной репарацией и SOS-системой
1.7. Эксцизионная репарация нуклеотидов
1.7.1. UvrABC эндонуклеаза E. coli
1.7.2. Взаимодействие между UvrA и UvrB белками - феномен узнавания повреждения ДНК
1.7.3. Эксцизионная репарация нуклеотидов,
сопряженная с транскрипцией
1.8. Предпочтительная репарация Об-метилгуанина
на транскрибируемой нити ДНК
ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ
ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Штаммы E. coli
2.2. Инкубационные среды, антибиотики, химические вещества
2.3. Ингибирование транскрипции и трансляции в клетках E. coli
2.4. Определение ß-галактозидазы
2.5. Определение РНК в клетках
2.6. Выделение плазмидной ДНК
2.7. Электрофорез в агарозном геле
2.8. Трансформация
2.9. Биолюминесцентный анализ - SOS-Lux тест
2.10. Оценка частоты индуцированных мутаций
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Сравнительный анализ ответов клеток штаммов E. coli группы В
и К12 на мутагенное, бактерицидное и генотоксическое действие МННГ и МННГ в комбинации с рифампицином и хлорамфениколом
3.2. Индуцированный мутагенез в делящихся и неделящихся
клетках E. coli
3.2.1. Влияние pH инкубационной среды
на индуцированный мутагенез в культурах клеток
логарифмической и стационарной фаз роста E. coli
3.2.2. Ингибирование синтеза ß-галактозидазы хлорамфениколом и ингибирование синтеза
РНК рифампицином
3.2.3. Влияние ингибиторов процессов транскрипции или трансляции на мутагенное и бактерицидное
действие МННГ
3.2.4. Влияние pH инкубационной среды на индуцированный мутагенез в адаптированных к МННГ клетках культур логарифмической
и стационарной фаз роста E. coli
3.2.5. Влияние ингибиторов процесса транскрипции или трансляции на индуцированный мутагенез и бактерицидное действие МННГ
в адаптированных к МННГ клетках E. coli
3.3. Влияние осмотического стресса и ингибирования процессов транскрипции или трансляции
на индуцированный мутагенез в E. coli
3.4. Влияние осмотического стресса
и ингибирования процессов транскрипции или трансляции на индуцированный мутагенез в адаптированных к МННГ клетках E. coli
3.5. Экспрессия LexA-контролируемой транскрипционной сшивки
рcdawluxCDABE в делящихся и неделящихся клетках E. coli
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ГЛАВА
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
ЗЛ. Сравнительный анализ ответов клеток штаммов E. coli группы В и К12 на мутагенное, бактерицидное и генотоксическое действие МННГ и МННГ в комбинации с рифампицином и хлорамфениколом
В качестве тест-объектов в экспериментальной системе определения обратных мутаций широко используют штаммы энтеробактерий S. typhimurium и E. coli [82, 121]. В проведенной экспериментальной работе для оценки частоты обратных мутаций использовали как штаммы E. coli группы В, так и E. coli К12. Несмотря на гомологию генов SOS-системы в штаммах E. coli групп В и К12, одной из причин более высокой чувствительности E. coli В (WP2) к химическим мутагенам является различие в активации SOS—генов. Так, например, активация филаментообразования в клетках E. coli В (WP2), в отличие от E. coli К12, происходит при индукции более слабого SOS-сигнала, в связи с низкой аффиностью LexA-penpeccopa к SOS-боксам и наличием минорных отличий в последовательности нуклеотидов промоторного участка sulA+ гена [58, 121]. Способность E. coli групп В (WP2) и К12 к филаментообразованию в ответ на обработку клеток нитрозогуанидином в концентрации 2 мкг/мл представлена на рисунке 1.
Рис 1. Филаментообразование в ответ на обработку клеток E. coli WP2 и E. coli K12s нитрозогуанидином в концентрации 2 мкг/мл в течение 30 мин.