Молекулярно-генетические особенности структуры генов патогенности возбудителей коклюша и дифтерии; совершенствование лабораторной диагностики при этих инфекциях.

• Автор: Борисова, Ольга Юрьевна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 257 с. : 36 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
ГЛАВА I. ПАТОГЕННЫЕ СВОЙСТВА ВОЗБУДИТЕЛЕЙ КОКЛЮША И ДИФТЕРИИ
1.1. Некоторые аспекты эволюционной изменчивости микроорганизмов
1.2. Биологические свойства возбудителя коклюша
1.2.1. Фенотипическая характеристика Bordetella pertussis
1.2.2. Антигенная структура и серотипирование штаммов возбудителя коклюша
1.2.3. Патогенные свойства штаммов В. pertussis
1.2.4. Генетическая характеристика штаммов В. pertussis
1.3. Биологические свойства возбудителя дифтерии
1.3.1. Микробиологическая характеристика Corynebacterium diphtheriae
1.3.2. Характеристика возбудителя дифтерии, циркулирующего на различных этапах эпидемического процесса дифтерийной инфекции
1.3.3. Патогенные свойства штаммов С. diphtheriae
1.3.4. Генетическая характеристика штаммов С. diphtheriae
ГЛАВА II. ПРИМЕНЕНИЕ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИХ МЕТОДОВ В ДИАГНОСТИКЕ КОКЛЮША И ДИФТЕРИИ
2.1. Использование молекулярно-генетических методов в диагностике
инфекционных заболеваний
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
ГЛАВА III. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
3.1.Штаммы бактерий
3.2. Идентификация культур
3.3. Генотипирование штаммов В. pertussis
3.3.1. Выделение хромосомной ДНК
3.3.2. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) по выявлению генов: S1
субъединицы коклюшного токсина iptxA), пертактина (ргп), фимбриальных генов {fim2 и jгтЗ), фактора колонизации трахеи (tcfA)
3.4. Генотигшрование штаммов С. diphtheriae
3.4.1. Выделение ДНК С. diphtheriae
3.4.2. Амплификация фрагментов tox гена
3.5. Определение вирулентности штаммов В. pertussis
3.5.1. Заражение животных
3.5.2. Определение вирулентности
3.5.3. Лейкоцитозстимулирующая активность (ЛСА) культур
3.6. Статистическая обработка результатов
3.7. Программное обеспечение
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
ГЛАВА IV. СТРУКТУРА ОСНОВНЫХ ГЕНОВ ПАТОГЕННОСТИ В. pertussis И ОСОБЕННОСТИ ЦИРКУЛЯЦИИ ВОЗБУДИТЕЛЯ КОКЛЮША В РАЗЛИЧНЫЕ ПЕРИОДЫ ЭПИДЕМИЧЕСКОГО ПРОЦЕССА КОКЛЮШНОЙ ИНФЕКЦИИ
4.1. Особенности циркуляции возбудителя коклюша в различные периоды эпидемического процесса коклюшной инфекции
4.1.1. Характеристика различных периодов эпидемического процесса
коклюшной инфекции и фенотипические особенности возбудителя
4.2. Генетическая структура популяции штаммов В. pertussis в различные периоды эпидемического процесса коклюшной инфекции
4.2.1. Последовательность нуклеотидов ptxA гена, кодирующего S1 субъединицу коклюшного токсина, и распространение штаммов В. pertussis с различными аллельными вариациями (аллеломорфами) этого гена
4.2.2. Последовательность нуклеотидов ргп гена, кодирующего пертактин, и распространение штаммов В. pertussis с различными аллельными вариациями этого гена
4.2.3. Последовательность нуклеотидов фимбриальных генов (fim2 и fim3) и распространение штаммов В. pertussis с различными их аллельными вариациями
4.2.4. Последовательность нуклеотидов tcfA гена, кодирующего фактор колонизации трахеи, и распространение штаммов В. pertussis с различными аллельными вариациями этого гена
4.2.5. Сопоставление генетической структуры штаммов В. pertussis, используемых для производства АКДС-вакцины, и штаммов, выделенных от больных коклюшем на современном этапе эпидемического процесса коклюшной инфекции
4.2.6. Вирулентные свойства штаммов В. pertussis, несущих новые аллельные
вариации
ГЛАВА V. РАЗРАБОТКА УСКОРЕННЫХ МЕТОДОВ, ОСНОВАННЫХ НА АМПЛИФИКАЦИОННЫХ ТЕХНОЛОГИЯХ, ДЛЯ НАБЛЮДЕНИЯ И ВЫЯВЛЕНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ КОКЛЮША
5.1. Молекулярно-генетический метод, основанный на полиморфизме длин рестрикционных фрагментов, для ускоренного выявления штаммов В. pertussis, циркулирующих на современном этапе
5.1.1. Разработка метода слежения за генетической структурой штаммов
В. pertussis
5.1.2. Мониторинг штаммов В. pertussis, вызывающих заболевание коклюшем на современном этапе, методом ПЦР-ПДРФ
5.2. Ускоренный молекулярно-генетический метод лабораторной диагностики коклюшной инфекции
5.2.1. Разработка ускоренного метода диагностики коклюша LAMP-вариант
5.2.2. Клинические испытания прямого ускоренного молекулярногенетического метода LAMP-варианта

53, 116, 118, 132, 157]. Поэтому, увеличение частоты высеваемости штаммов В. pertussis серотипа 1.2.3 является крайне неблагоприятным признаком для характеристики эпидемического процесса. Различий в вирулентности и токсичности культур, выделенных от привитых и непривитых детей, а также от больных с различной степенью тяжести заболевания не было выявлено [53].
Одним из признаков, характеризующих патогенность возбудителя коклюша, считается лейкоцитозстимулирующая активность, как одно из специфических проявлений действия коклюшного токсина. Лейкоцитозстимулирующую активность (ЛСА) определяют путем подсчета количества лейкоцитов в периферической крови опытных и контрольных (получивших инъекцию раствора NaCl) мышей через 3 суток после внутримышечного введения взвеси в дозе 2,5 МОЕ (международная оптическая единица плотности). Согласно [93, 160] за 1 МОЕ по системе СИ условно принят 1 млрд.м.кл. Единицей ЛСА (ЛСЕ) служит отношение количества лейкоцитов в периферической крови опытных мышей к количеству лейкоцитов в периферической крови контрольной группы мышей. Многолетнее изучение лейкоцитозстимулирующей активности циркулирующих штаммов В. pertussis показало [39, 53, 132, 157], что индекс ЛСА не изменился с конца 60-х по 80-е годы и варьировал в пределах 2,8 - 2,2 единиц. Большинство штаммов (81,8% - 82,0%) обладали ЛСА слабой и средней степени. В 80-е годы встречались единичные штаммы со средней и высокой ЛСА (18,5%), в то время как среди штаммов 1967 - 68 гг. они составляли 72,2%.
Известны исследования по дермонекротической (ДНА), гистаминсенсибилизирующей (ГСА) и гемагглютинирующей (ГАА) активности возбудителя коклюша, которые также характеризуют его патогенные свойства. Дермонекротическая и гистаминсенсибилизирующая активности являются проявлениями комбинированного действия нескольких